Aminoáá cidos y Proteíánás

1. INTRODUCCIÓN

Las proteínas son biomoléculas grandes que se encuentran en todo organismo vivo.
Existen muchos tipos y tienen muchas funciones biológicas. La queratina de la piel
y las uñas, la fibroína de la seda y telarañas y la mayor parte de las enzimas que
catalizan las miles de reacciones biológicas dentro de las células, todas son
proteínas. Sea cual sea su función, todas las proteínas están construidas de muchas
unidades de aminoácidos unidos es una cadena larga.

Los aminoácidos, como su nombre lo indica, son bifuncionales. Contienen un grupo

amino básico y un grupo carboxilo ácido.

Su valor como bloques de construcción proviene del hecho de que se pueden unir
en grandes cadenas formando enlaces amida entre el –NH2 de un aminoácido y el
–CO2H de otro.

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2. PRINCIPIOS TEÓRICOS

AMINOÁCIDO

Los aminoácidos son los monómeros de las proteínas. Dos aminoácidos se

combinan en una reacción de condensación que libera agua formando un enlace
peptídico. Estos dos restos aminoaciditos forman un dipéptido. Si se une un tercer
aminoácido se forma un tripéptido y así, sucesivamente para formar un polipéptido.

Los aminoácidos están formados por un carbono unido a un grupo carboxilo, un

grupo amino, un hidrógeno y una cadena R de composición variable, que determina
las propiedades de los diferentes aminoácidos, existen cientos de cadenas R por lo
que se conocen cientos de aminoácidos diferentes. En los aminoácidos naturales, el
grupo amino y el grupo carboxil se unen al mismo carbono que recibe el nombre de
alfa asimétrico. La unión de varios aminoácidos da lugar a cadenas llamadas
polipéptidos o simplemente péptidos. Se hablará de proteína cuando la cadena
polipeptídica supere los 50 aminoácidos o el peso molecular total supere los 5.000
uma. Existen unos 20 aminoácidos distintos componiendo las proteínas. La unión
química entre aminoácidos en las proteínas se produce mediante un enlace
peptídico. Ésta reacción ocurre de manera natural en los ribosomas, tanto del
retículo endoplasmático como del citosol.

ESTRUCTURA GENERAL DE UN AMINOÁCIDO

La estructura general de un aminoácido se

establece por la presencia de un carbono
central alfa (en negro) unido a: un grupo
carboxilo (rojo), un grupo amino (verde), un
hidrogeno (negro) y la cadena lateral (azul),
tal como se muestra a continuación:

donde "R" representa la cadena lateral,

específica para cada aminoácido.
Técnicamente hablando, se les denomina

alfa-aminoácidos, debido a que el grupo amino (–NH 2) se encuentra a un atomo de

distancia del grupo carboxilo (–COOH). Como dichos grupos funcionales poseen H
en sus estructuras químicas, son grupos susceptibles a los cambios de pH, por eso,
en el pH de la célula, prácticamente ningún aminoácido se encuentra de esa forma,
sino que se encuentra ionizado.

Los aminoácidos a pH bajo (ácido) se encuentran mayoritariamente en su forma

catiónica (con carga positiva), y a pH alto (básico) se encuentran en su forma
aniónica (con carga negativa). Sin embargo, existe un pH especifico para cada
aminoácido, donde la carga positiva y la carga negativa se encuentran en equilibrio,
y el conjunto de la molécula es eléctricamente neutro. En éste estado se dice que el
aminoácdio se encuentra en su forma de zwitterion.

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ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS: ESTRUCTURA PRIMARIA Y SECUNDARIA.

Las proteínas llevan a cabo funciones de importancia crítica para las células. Existen
dos clases principales de proteínas: las catalíticas (enzimas) y las estructurales. Las
enzimas actúan como catalizadores en una amplia variedad de reacciones químicas
en las células. Las proteínas estructurales son aquellas que forman parte integral
de la estructura de las membranas, paredes celulares y componentes
citoplasmáticos. En esencia,. una célula es lo que es debido a las clases de proteína
que contiene. Por tanto, un cierto conocimiento de la estructura de las proteínas
resulta esencial para la comprensión de las funciones celulares.

Las proteínas son polímeros de longitud variable que contienen secuencias definidas
de aminoácidos covalentemente unidos por enlaces peptídicos. La unión de dos
aminoácidos constituye un dipéptido, la de tres aminoácidos un tripéptido, y así
sucesivamente. La unión covalente de muchos aminoácidos por medio de enlaces
peptídicos constituye un polipéptido, y las proteínas están formadas por uno o más
polipéptidos. El número dé aminoácidos varía de una proteína a otra y se conocen
proteínas con tan solo 15 aminoácidos mientras que otras contienen 10.000. Como
las proteínas pueden variar en lo que respecta a composición, secuencia y número
de aminoácidos, es fácil comprender que sea posible una enorme diversidad de
estructuras (y funciones) proteicas.

Todas las proteínas son moléculas plegadas y forman disposiciones estructurales

complejas. La disposición lineal de los aminoácidos se conoce como la estructura
primaria del polipéptido, que suministra una descripción completa de todos los
enlaces covalentes presentes en la molécula. En muchos aspectos, se puede
considerar que la estructura primaria de un polipéptido es la más importante, ya
que una estructura primaria dada permite la existencia de solo algunos tipos de
estructura de orden superior. La yuxtaposición de los radicales del carbono -α
dictados por la estructura primaria induce al polipéptido a doblarse y plegarse de un
modo específico. Este proceso conduce a la formación de la estructura secundaria
de la proteína. Los puentes de hidrógeno, resultan importantes en el tipo de
estructura secundaria alcanzado por una proteína.

Estructura de las proteínas: estructura terciaria y cuaternaria.

Cuando un polipéptido ha adoptado una estructura secundaria determinada se

pliega sobre sí mismo para formar una molécula aún más estable. Esa disposición
conduce a la formación de la estructura terciaria de las proteínas. Como ocurre con
la estructura secundaria, la estructura terciaria de una proteína la determina en
definitiva la estructura primaria, pero también está influenciada por la estructura
secundaria de la molécula. A consecuencia de la formación de la estructura
secundaria, la cadena lateral de cada aminoácido del polipéptido queda en una
posición específica. Si se pueden formar enlaces adicionales de hidrógeno, uniones
covalentes, interacciones hidrofóbicas u otras interacciones atómicas, el polipéptido
se plegará hasta alcanzar una forma tridimensional única.

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Con frecuencia un polipéptido se dobla de tal forma que quedan expuestos grupos
sulfhidrilo (-SH) pertenecientes a residuos de cisteína. Estos grupos -SH libres se
pueden unir covalentemente formando un puente disulfuro (-S-S-) entre los dos
aminoácidos. Si los dos residuos de cisteína pertenecen a diferentes cadenas
polipeptídicas de una proteína, el puente disulfuro une físicamente las dos
moléculas. Además, un único polipéptido se puede plegar y unirse a sí mismo si dos
residuos de cisteína originan un puente disulfuro dentro de la misma molécula. La
disposición terciaria del polipéptido origina finalmente en la molécula regiones
expuestas y otras surcadas que pueden ser importantes en la unión con otras
moléculas (por ejemplo, en la unión entre un sustrato y una enzima).

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3. PARTE EXPERIMENTAL

PREPARACION DE LA SOLUCION DE ALBÚMINA

Se separa la clara de la yema de un huevo. Se mide la clara en una probeta y se

añade igual cantidad de agua destilada. Se bate hasta que esté algo espumosa,
luego se filtra a través de una gasa o algodón. De esta solución se tomo para los
siguientes ensayos.

I. REACCIONES DE COLORACIÓN

REACCIÓN DE BIURET

 En un tubo de ensayo se coloca 1 mL de solución de albúmina y 1.5 mL de

NaOH al 10%
 Se agrega gota a gota la solución de CuSO4 al 0,5% hasta que se obtenga
un color púrpura violeta.

REACCIÓN XANTOPROTEICA

 En un tubo de ensayo se coloca 1 mL de una solución de albúmina luego 7

gotas de acido nítrico concentrado
 Luego se somete a baño maría con temperatura suave. La reacción se
evidencia por la presencia de un precipitado que se torna amarillo y que
luego se disuelve.
 Se enfría exteriormente y se añade hidróxido de amonio gota agota hasta
que el color se torne anaranjado.

REACCIÓN DE LA NINHIDRINA

 Se coloca en un tubo de ensayo 1 mL de una solución de albúmina y 3 gotas

de solución de ninhidrina al 0,1 %
 Se lleva a baño maría hasta que se desarrolle un color púrpura

II. REACCIONES DE PRECIPITACIÓN

REACCIONES DE PRECIPITACIÓN CON SALES METÁLICAS

En 3 tubos se agrega agregue 1 mL de solución albúmina a cada uno

 A un tubo se agrega un ligero exceso de sulfato de cobre al 5%

 Al otro tubo se agrega un ligero exceso de cloruro de bario al 5%

PRECIPITACIÓN DE REACTIVOS ALCALOIDES

En un tubo de ensayo se coloca 1mL de solución de albúmina

 Se le agrega 6 gotas de solución de acido pícrico

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4. REACCIONES QUIMICAS

1.- REACCIONES DE COLORACION

Reaccion de Biuret

Reacción Xantoproteica

Reacción de la Ninhidrina

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2.- REACCIONES DE PRECIPITACION

REACCIONES DE PRECIPITACION CON SALES METALICAS

Con sulfato de cobre

Con cloruro de bario

PRECIPITACION DE REACTIVOS ALCALOIDES

Acido pícrico:

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5. RESULTADOS

A) Reacciones de Coloración:

Reacción de Biuret: Se observa que al reaccionar la solución de albumina con

hidróxido de sodio 10% en solución de Sulfato de Cobre 0.5%; se obtiene una
solución de color púrpura-violeta.

Reacción Xantoproteica: Se observa que al reaccionar la solución de albumina

con ácido nítrico concentrado, sometido a temperatura suave, se obtiene un
precipitado amarillo (reacción), que luego se disuelve.

Luego, se enfría la solución y se añade hidróxido de amonio, se observa que la

solución se torna anaranjada.

Reacción de la Ninhidrina: Se observa que al reaccionar la solución de albúmina

con la solución de ninhidrina al 0,1% en presencia de calor (a baño maría), se
obtiene una solución de color púrpura.

B) Reacciones de Precipitación:

Reacciones de Precipitación con sales Metálicas: Se observa al reaccionar la

solución de albumina con Sulfato de Cobre 5%, Cloruro de Bario 5% y Acetato de Plomo 5%; lo
siguiente:

Sulfato de Cobre 5% Cloruro de Bario 5%

Coloración Precipitado turquesa Precipitado incoloro

Reacciones de Precipitación reactivos Alcaloides: Se observa que al

reaccionar con el ácido pícrico se forma un precipitado amarillo.

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6. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Como se ha podido observar el reconocimiento de proteínas y aminoácidos se

realizó con rapidez y satisfactoriamente, ya que solo se necesitó de pruebas
cualitativas para verificar la existencia de los mismos, así pues se utilizaron las
reacciones de coloración y las reacciones de precipitación.

Reacción de Biuret: En general la proteína albumina da reacción positiva (color

púrpura-violeta) por tener en su molécula el grupo –CONH2 (enlace peptídico).

Esta reacción da un color púrpura-violeta, esto debido a que dicha reacción se basa
en la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu 2+ y los pares de
electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos,
provocando un cambio de color.

Reacción de Xantoproteica: En esta reacción, el grupo fenilo de la molécula

proteica (triptófano, tirosina) con el acido nítrico concentrado da nitro
modificaciones de color amarillo que por adición álcali cambia a color anaranjado.

Reacción de la Ninhidrina: En esta reacción, la Ninhidrina forma un complejo de

color característico violáceo con los aminoácidos.

Reacciones de Precipitación de Sales Metálicas: En este tipo de reacciones, las

sales metálicas desplazan a los hidrógenos y debido a la afinidad de los hidrógenos
con los iones presentes provenientes de las sales metálicas se forma los respectivos
ácidos.

Reacciones de Precipitación de Alcaloides: En la precipitación de reactivos

alcaloides, el ácido pícrico tiende a formar sales.

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7. CONCLUSIONES

 Existen Varios métodos de identificación de proteínas las cuales pueden ser

generales (Biuret, Ninhidrina) o incluso específicas (Xantoproteica: proteínas
con grupo fenilo), o valerse de dos factores de identificación visibles como el
color y la precipitación. Todos estos métodos se basan en la capacidad de
las proteínas para reaccionar con varios compuestos tanto en medio ácido o
básico.

 Debido a que los aminoácidos contienen por lo menos un grupo carboxilo y

un grupo amino se comportan como ácidos débiles, pero también como
bases débiles.

 La reacción de Biuret sirve para el reconocimiento del enlace peptídico, solo

la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se
debe a la presencia del enlace peptídico (- CO- NH -) que se destruye al
liberarse los aminoácidos.

 La Reacción de la Xantoproteica caracteriza a los aminoácidos aromáticos.

Esta reacción se debe la presencia de un grupo fenilo en la molécula
proteica, indicado por la coloración amarilla.

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8. RECOMENDACIONES

 Preparar adecuadamente la albúmina, batir solo hasta que este algo

espumosa, no llevar a punto de nieve. Filtrar la albúmina para eliminar
impurezas.

 Lavar correctamente los tubos de ensayo, para evitar la contaminación de

los reactivos.

 Debido a que todas son pruebas cualitativas, no es necesario medir con

exactitud los volúmenes a usar para cada reactivo ni de la muestra.

 Usar en todo momento guantes.

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9. BIBLIOGRAFÍA

 Anderson Guarnizo Franco, Pedro Nel Martínez Yepes, Experimentos

de Química Orgánica, ELIZCOM, pag 181-187
 Silvia Quesada Mora, Manual de experimentos de laboratorio para
bioquímica, EUNED, pag 20, 21, 27.
 Eva Irma Véjar Rivera, Prácticas de Bioquímica Descriptiva, USON,
2005, pag 165, 168, 177,179

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