Sinalização Celular

Carolina Beltrame Del Debbio

carol.deldebbio@usp.br
 Compreensão dos Conceitos e Lógica

Ligantes e Receptores

Tipos de Sinalização Celular

Ligante
Ligante Secretados: Parácrina, Autócrina, Endócrina
Ligantes de Contato: Justácrina

Receptor
Receptores de Superfície Associados à Proteína G (GPCRs)
Receptores Associados a Enzimas (Tirosina-Cinases)
Receptores Associados a Canais Iônicos
 Para Estudar

Capítulo 15
Mecanismos da Comunicação Celular

Capítulo 16
Comunicação Celular
Sinalização Celular = Comunicação

Receber

Processar

Enviar sinais/Resposta

?
 Sinalização Celular

Para responder às mudanças no seu ambiente, as células

devem ser capazes de receber e processar sinais que se
originam fora de suas fronteiras.
As células muitas vezes recebem vários sinais ao mesmo
tempo, e elas processam as informações e elaboram
um plano de ação unificado.

As células recebem e enviam sinais

Sinalização Celular – Diferentes Informações
 Sinalização Celular - Processo

1) Síntese de moléculas sinalizadoras (ligantes)

2) Liberação das moléculas sinalizadoras (ancoradas)
3) Transporte das moléculas sinalizadoras para as células alvo

4) Ligação do ligante ao receptor específico

5) Ativação da sinalização intracelular
6) Alterações específicas no comportamento e processos celulares
7) Desativação do receptor (desativação da sinalização)
 Sinalização Celular – Relação Ligante-Receptor

Moléculas Sinalizadoras

Receptores
 Molécula Sinalizadora

Proteína Receptora

Proteínas de Sinalização Intracelular

Proteínas Efetoras

Respostas Celulares
 Sinalização Celular - Ligantes

Moléculas Sinalizadoras (Ligantes)

Quem são:
Proteínas
Pequenos peptídeos (neurotransmissores)
Derivados de aminoácidos
Moléculas hidrofóbicas (estrógeno, prolactina, ácido retinóico)
Gases (ON)

Categorias (permeabilidade):
Moléculas lipofílicas (se difundem pela membrana plasmática =
hormônios esteróides- cortisonas, estrógenos/ ácido retinóico)
Solúveis em água (não atravessam a membrana plasmática =
fatores de crescimento, necessitam receptores de membrana)
Hormônios lipofílicos que necessitam de receptores de membrana
(não atravessam as membranas = prostaglandinas)
 Sinalização Celular - Receptores

Molécula da célula alvo que se conecta ao ligante com alta afinidade e

especificidade

(ligantes são liberados em baixas concentrações, por isso os receptores necessitam

de alta afinidade para que o sinal dure o tempo necessário para desenvolver sua
função. Ex. insulina) Quantidade / Eficiência

Superfície / Intracelular

Componentes dos receptores de superfície

- Domínio extracelular (conecta-se ao ligante)

- Domínio transmembrana (ancoragem do receptor)

- Domínio citoplasmático (inicia a sinalização)

 Sinalização Celular

Receptores

Molécula da célula alvo que se conecta ao ligante com alta afinidade e

especificidade

Superfície / Intracelular

-Conectam-se aos ligantes que se difundiram

diretamente pela membrana plasmática

-Citoplasma ou Núcleo (receptores de

estrogênio/Ácido Retinóico)

- O complexo ligante-receptor regula diretamente a

expressão gênica
 Sinalização Celular - Interação

Interação: Ligante - Receptor

Especificidades:

- Interação fraca (liga/desliga)

- Dinamismo (não é permanente)
- Resposta Fisiológica ≠ Ocupação dos Receptores

R
L R+L
 Sinalização Celular (Secretado x Contato)

Sinalização por Moléculas Secretadas Sinalização por Contato

 Sinalização Celular (Secretado x Contato)

Sinalização por Moléculas Secretadas

-Proteínas Parácrina
-Pequenos peptídeos
-Aminoácidos Autócrina
-Nucleotídeos Endócrina
-Esteróides
-Derivados de Ácidos Graxos
 Sinalização Celular

Sinalização por Moléculas Secretadas

Parácrina

Ligantes secretados se Difusão limitada:

difundem por distâncias curtas
- Fatores de Crescimento
- Neurotransmissores
- captação por células vizinhas;
- Degradação; ligantes rapidamente
degradados
- Imobilizadas por moléculas da matriz
(proteoglicanas) lo que no es degradado va ser secuestrado en la
matris por medio de vesiculas ejm proteogliconos
 Sinalização Celular

Sinalização Autócrina

As células respondem a ligantes que elas mesmas secretaram

(ex. Fatores de crescimento em células tumorais)

Feedback Negativo
Sinalização Celular

Sinalização Endócrina
respuestas para longas distacias

- Insulina
- Epinefrina
- Neuropeptideos
(hipotálamo)
Sinalização Celular

hipotálamo
 Sinalização Celular

Alteração nos Receptores de Leptina do Hipotálamo

 Sinalização Celular

Sinalização por Moléculas Secretadas – Longas distâncias

una senalizacion de longa distancia lleva mas tiempo

para generar un efecto.
Diferença?????

Velocidade
Proximidade do ligante ao receptor
 Sinalização Celular – Dependente de Contato

Sinalização por Contato

o ligante de la celula efectora no se

va liberar ele te que ser emposto
Justácrina

1) A molécula sinalizadora pode ser a mesma da sinalização por secreção (domínios de

ancoragem na membrana);

2) Os ligantes secretados podem ter o mesmo efeito que os ligantes de contato (=EGF)
MESMOS RECEPTORES
3) Os ligantes secretados podem ter efeitos diferentes que os ligantes de contato (=TNF)
RECEPTORES DIFERENTES
 Sinalização Celular

TNF = Fator de Necrose Tumoral

TNF TNF
Secretado Contato
 Sinalização Celular

Via de Notch

Célula sinalizadora

Molécula Sinalizadora

Receptor

Célula Receptora

http://www.hindawi.com/journals/jir/2013/570731/fig1/
 Sinalização Celular – Após ativação

O que acontece após a ativação do Receptor?

Sinais induzem dois tipos principais de respostas celulares:

1) Alteração na atividade ou função de enzimas específicas ou

proteínas celulares pré-existentes (mais rápida); ejemplo las ATPasas, ya tem so
van ser activadas o desactivadas ,
no precisa producir mas por eso
es que es rapida.

2) Alterações na quantidade de proteínas específicas

produzidas pelas células, geralmente pela ação de fatores
de transcrição que estimulam ou reprimem a expressão
gênica (mais lenta).
 Sinalização Celular – Após ativação

Ligante

Função
RÁPIDO protéica LENTO
(<segundos a alterada (minutos a
minutos) horas)
Síntese protéica alterada

Maquinaria citoplasmática alterada

Comportamento celular alterado

 Sinalização Celular – Encerramento

Toda Sinalização deve ser Inativada após sua Ativação

Receptores são Destruição dos Proteínas intracelulares podem inativar o receptor

temporarioamente receptores
sequestrados no endocitados
endossomo
Dessensibilização
 Sinalização Celular

Receptores-Vias
(ligantes, receptores e respostas específicas)

1) Receptores de Superfície Associados à Proteína G (GPCRs)

2) Receptores Associados a Enzimas (Tirosina-Cinases)

3) Receptores Associados a Canais Iônicos

4) MAPK, Wnt e Notch

 Sinalização Celular – Proteína G

Receptores de Superfície Acoplados à Proteína G (GPCRs)

 Sinalização Celular

Receptores de Superfície Acoplados à Proteína G (GPCRs)

 Sinalização Celular - Receptor

Receptores de Superfície Acoplados à Proteína G (GPCRs)

1. Contém 7 domínios transmembrana
2. Um dos receptores mais comuns em células eucarióticas (visão, olfato, gustação)
3. Evolutivamente conservados (leveduras)
4. Liga-se a diversas moléculas sinalizadoras diferentes (adrenalina, pequenas
moléculas, proteínas)
5. Alvo de agentes farmacológicos
(câncer)
 Sinalização Celular – Elementos da Sinalização

Elementos comuns da via de sinalização mediada por Receptores de Superfície Acoplados à

Proteína G

Proteína G = complexo trimérico com 3 subunidades, sendo que a α e a γ são ligadas à

membrana
O Receptor ativa a proteína G
GTP se encontra em maior concentração na célula
Subunidade alfa ativada se desliga de β e γ
Estado Inativo Estado Ativo

Proteína Efetora

Hidrólise
Alteração Conformacional do GTP
 Sinalização Celular – Elementos da Sinalização

Estado Inativo Estado Ativo

Proteína Efetora

Hidrólise
Alteração Conformacional do GTP

1) Ligante-Receptor: Mudança conformacional no receptor

2) Receptor ativado se liga a Gα
3) Mudança conformacional em Gα – dissociação do GDP – ligação com GTP
4) Gα ativada (GTP) se liga à proteínas efetoras
5) Hidrólise do GTP e retorno de Gα à forma inativa
Sinalização Celular – Tipos de proteínas G (alguns)
 Sinalização Celular – Elementos Específicos

Ligante
Receptor de membrana (GPCRs)
Proteínas G
Proteína Efetora
Adenilil Ciclase
Fosfolipase C
Fosfodiesterase

elas van desencadenar una senalizacion

intracelular
 Sinalização Celular – Proteína Efetora

Adenilil Ciclase
Proteína de membrana grande com sítio de ativação na porção
citoplasmática

Muitas isoformas diferentes reguladas por diferentes ligantes,

GPCRs ou diferentes Gα

Catalisam a conversão de ATP para cAMP, um segundo

mensageiro (os níveis de cAMP são reduzidos por cAMP
fosfodiesterases - equilíbrio)
Sinalização Celular – Proteína G/Proteína efetora

Adenilil Ciclase

+ -

Segundo Mensageiro
 Sinalização Celular – Gs/Gi – proteína efetora

Adenilil Ciclase

+ -

Epinefrina Adenosina
Glucagon
ACTH Segundo Mensageiro
 Sinalização Celular

Ligante Epinefrina

Receptor de Receptor Alfa-

Membrana adrenérgico

Proteína G Gs

Efetor Aden Ciclase

2º Mensag. cAMP

Alvos PKA
 Sinalização Celular - PKA

Proteína Kinase A
(proteína cinase dependente de cAMP)

1) Duas subunidades Regulatórias ligadas a duas subunidades Catalíticas

2) O cAMP se liga à unidade regulatória alterando sua conformação
3) Liberação das subunidades catalíticas - Ativação
4) Fosforilação de proteínas alvos

inativa ativa
 Sinalização Celular - PKA

Proteína Kinase A
(proteína cinase dependente de cAMP)

ativa
inativa

Células diferentes exibem diferentes respostas ao PKA

Diferentes substratos de PKA – diferentes respostas fisiológicas

- Alteração da atividade enzimática das proteínas alvo (resposta rápida)

- Alteração do número de proteínas-alvo (resposta lenta)
 Sinalização Celular

Epinefrina
PKA
Receptor Alfa-
adrenérgico Fígado = aumenta a síntese de glicose (inibe
síntese de glicogênio)

Gs Músculo esquelético = aumento da conversão

de glicogênio em glicose

Coração = aumento da contração

Aden Ciclase
Tecido Adiposo = hidrólise de triglicerídeos
cAMP Intestino = aumento na secreção de fluídos

Fosforilação
PKA
 Sinalização Celular - Término

Mecanismos:

1) A afinidade dos receptores pelos ligantes diminui quando Gαs se ligam ao

GTP. Esse aumento de dissociação do ligante com o receptor limita o
número de Gα ativadas

2) A atividade GTPasica intrínseca de Gα é aumentada quando esta se liga à

Adenilil ciclase, trocando GTP por GDP

3) cAMP é hidrolizado por fosfodiesterases

4) Fosforilação das proteínas alvo por PKA é transiente. Estas proteínas são
rapidamente desfosforiladas por fosfatases
 Sinalização Celular

Ligante Epinefrina Bradicinina

Receptor de Receptor Alfa- Receptor 2-

Membrana adrenérgico bradicinina

Proteína G Gs Gq/Go

Efetor Aden Ciclase Fosfolipase C

ATP PIP2

2º Mensag. cAMP IP3/DAG-Ca++

Alvos PKA PKC

 Ligante

Receptor 2º Mensageiro
Proteína G

Efetor
Alvos
fótons Rodopsina Transducina PDE Hidrólise de cGMP
 Sinalização Celular

Receptores-Vias
(ligantes, receptores e respostas específicas)

1) Receptores de Superfície Associados à Proteína G (GPCRs)

2) Receptores Associados a Enzimas (Tirosina-Cinases)

3) Receptores Associados a Canais Iônicos

4) MAPK, Wnt e Notch

 Sinalização Celular

Receptores Tirosina-Kinase

Fatores de
crescimento

Um domínio
extracelular e um
transmembrana

O domínio
citoplasmático possui
atividade tirosina-
quinase (fosforilação)
esto los va diferenciar
- Diversos outros Fatores de Crescimento descobertos (FGF,
IGF, VEGF, PDGF, etc)
- Proliferação, Crescimento, Sobrevivência
- SFB
Fatores de crescimento se ligam aos Receptores Tirosina kinases (RTK)

- Muitos dos receptores dos fatores de crescimento são proteínas

transmembrana simples, que se ligam aos fatores de crescimento pelo
domínio extracelular e sinalizam pelo domínio citoplasmático;

- Os domínios citoplasmáticos contém atividade tirosina kinase que

fosforila substratos protéicos nos resíduos de tirosina
 Sinalização Celular

Os domínios citoplasmáticos contém atividade tirosina kinase que fosforilam substratos

protéicos nos resíduos de tirosina
Dimerização
1) Na ausência de ligante, os RTKs existem como monômeros. Neste estado
de repouso, a atividade kinase intrínseca é muito baixa;
2) A interação com o ligante induz a formação de dímeros (alguns receptores
RTK existem como dímeros mesmo na ausência de ligantes = receptor de
insulina);
3) Autofosforilação = os resíduos kinases se fosforilam e ativam a kinase
Autofosforilação
1) A dimerização coloca os dois domínios citoplasmáticos próximos um ao
outro;

2) A interação física entre os domínios ativa o domínio kinase (intermolecular/

intramolecular)
Fosfotirosinas e interação com outras Proteínas
1) Alguns resíduos de fosfotirosinas se ligam a domínios específicos de algumas
proteínas como SH2 e PTB;
SH2 = src homology-2 PTB = phosphotyrosine binding domain

2) As proteínas citoplasmáticas com domínios SH2 ou PTB podem se ligar a

resíduos específicos de fosfotirosinases

3) Fosforilação das proteínas ligadas ao RTK/Alteração na atividade enzimática

destas proteínas
 Ligante EGF

RTK EGFR

Dimerização
Dimerização

Autofosforilação
Autofosforilação
Grb2 (SH2-SH3) tirosina
Proteínas
Citoplasmáticas
Sos (SH3) prolina

Ras GTPase

Resposta
EGF

(GEF)
Importância dos RTK no câncer
1) Muitos cânceres humanos apresentam mutações nos RTK;

2) Muitas dessas mutações matém a sinalização no seu estado ativo fazendo

com que as células proliferem mesmo na ausência de fatores de
crescimento;

3) Alguns tipos de câncer de mama apresentam superexpressão em HER2,

receptor de EGF;

4) Alguns casos de câncer de pulmão também apresentam mutações nos

receptores de EGF
- HER: Human Epidermal Growth Factor Receptor
- 4 isoformas
- HER2 não apresenta sítio de ligação para EGF
- Forma heterodímeros com HER1, HER3 e HER4

- Células normais = baixa concentração de HER2

- Câncer de mama = aumento na expressão de HER2 (quadro severo – 25% dos
casos a sobrevivência de 6 anos cai para 1)
(Herceptin – Mab contra HER2)
 Sinalização Celular

Receptores-Vias
(ligantes, receptores e respostas específicas)

1) Receptores de Superfície Associados à Proteína G (GPCRs)

2) Receptores Associados a Enzimas (Tirosina-Cinases)

3) Receptores Associados a Canais Iônicos

4) MAPK, Wnt e Notch

 Sinalização Celular

Receptores Associados Canais Iônicos

 Sinalização Celular

Receptores Associados Canais Iônicos

 Sinalização Celular

Receptores Associados Canais Iônicos

Sinalização Celular

MAPK/ERK
Wnt
Notch
 Sinalização Celular

MAPK/ERK

Mitogen-Ativated Protein
Kinases = Extracellular signal-
Regulated Kinases

- Receptor tirosina-quinase
- Ras ativada (Sos-GEF)
- Interação efetores (Raf)
- Cascata de Sinalização
RAF (kinase)
MEK (MAPKK)
MAPK (ERK)

Jun/Fos = heterodímero
(fator de transcrição)
AP1 = activated protein 1

Proliferação
 Int1 Wingless

Roel Nusse & Harold Varmus

Wnt
- Conservada
- Responsável por controlar eventos como determinação celular, migração,
polaridade, especialização neural, organogênese durante o desenvolvimento,
renovação de células-tronco;
- Alterações na via de Wnt = câncer, defeitos no esqueleto, defeitos no nascimento
(fechamento do tubo neural – espinha bífida);
Wnt

- Moléculas inibidoras do
ligante (Dkk, WIF, SFRP,
Cerberus, Wise)
- Fz = proteína com 7 domínios
transmembrana
(+ de 10 em humanos)
- LRP = co-receptores
- DVL (Dsh) = proteína
modular (inibe GSK3)
- APC/Axina/GSK3 se ligam a
β-catenina
- Complexo de destruição
BTrcp = ubiquitina ligase
- Degradação de β-catenina
- Núcleo = co-ativador
- TCF/Lef (fatores de
transcrição – Myc, CiclinaD1)

- Proliferação
Xenopus

Eixo dorsal duplicado

Xwnt8
Dsh,
β-catenin
dominant-negative GSK3
 Via de sinalização não-canônica de Wnt
Planar Cell Polarity pathway or PCP pathway

Células Epiteliais

Polaridade (Apical, basal, basolateral)

Polaridade é alcançada pela regulação do

citoesqueleto de actina

Polaridade/Migração

Esta sinalização é independente de

transcrição

Wnt4, Wnt5a, Wnt11

Sem participação de co-receptor LRP
 Via de sinalização não-canônica de Wnt
Wnt/Ca2+ Pathway

Wnts e Fzs podem estimular a liberação de

Ca2+ pelo retículo endoplasmático e esta
sinalização é dependente de Proteínas G

Wnt5a, Wnt11 e rat Fz2

Sem participação de co-receptor LRP

Notch

Conservada

Comunicação célula-célula de curta

distância

Interferir em atividades celulares:

- proliferação;
- morte celular;
- determinação do destino celular;
- ativação de programas de
diferenciação
- auto-renovação
Os receptores de Notch são grandes proteínas
transmembrana de passagem única

Porção Extracelular Porção Intracelular

 A maioria dos ligantes de Notch também são proteínas
transmembrana de passagem única
Apresentam motifs especializados na ligação com o receptor
Notch
A ligação com o ligante induz a
clivagem de Notch pela
metaloprotease ADAM

Notch intracellular domain (NICD) se

encontra livre para translocar até o
núcleo onde iniciará a interação com
a proteína ligante de DNA - CSL
Carolina Beltrame Del Debbio carol.deldebbio@usp.br
 Para Estudar

Capítulo 15
Mecanismos da Comunicação Celular

Capítulo 16
Comunicação Celular