HISTORIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

La primera información sobre el uso de cultivos fue de Nova Plantarum Genera, publicado en 1929
por Pier Antonio Micheli, en Florencia, quien logro establecer cultivos de hongos de los géneros
Mucar, Botrytis y Aspergillus en el interior de melones, peras y membrillos, demostrando que se
reproducen por medio de sus semillas. Inoculo también hojas muertas en el bosque con esporas de
Agaricales.

A mediados del siglo XIX, Oscar Berfled observo el desarrollo de micelio a partir de una espora y
concluyo que los cultivos puros por definición debían iniciarse a partir de una sola célula. Brefeld y
Anton de Bary, ambos famosos micólogos, optaron por el uso de cultivos puros.

Pasteur en 1860 publico sobre el uso de un medio de cultivo líquido para levadura (10g de sacarosa,
1g de ceniza de levadura, 0,1g tartrato de amonio dextrógiro), y un año después demostró
experimentalmente la nulidad del concepto de generación espontánea ( esterilizo y mantuvo estéril
un medio de cultivo). Joseph lLister, un cirujano inglés, publico en 1878 un trabajo sobre la
fermentación láctea con lo cual comprobó que era una bacteria la causa de este fenómeno y
consiguió cultivos puros por medio de un proceso de dilución. Asumió que de las bacterias que viera
al microscopio, la que predominaba era la responsable. Con una microjeringa ubico en el campo de
visión del microscopio una microgota de volumen calculado y determino el número de células
bacterianas por volumen de cultivo. Calculo la dilución necesaria para conseguir que una de cada
dos transferencias con la microgeringa diera un cultivo originado de una sola célula bacteriana. Sus
transferencias las hizo a copas previamente calentadas en un horno por dos horas, las cuales
contenían leche hervida y estaban tapadas con una fuente de vidrio invertida. Para mayor seguridad
las mantuvo bajo campanas de vidrio. Cinco de diez transferencias resultaron en fermentación, y
comprobó que eran cultivos puros de una bacteria que denomino Bacteriunm lactis.

El uso de medios solidos comenzó en Alemania con Jens Frederik Schroeter quien en 1872 uso papa,
pan, pasta de almidón, y clara de huevo para cultivar bacterias. El microbiólogo Brefeld (1881) utilizo
gelatina para sus hongos. Robert Koch, un médico alemán, comenzó trabajando con rodajas de papa
estéril en vasijas de vidrio estériles, las cuales inoculaba con bacterias. Luego encontró ventajoso
solidificar sus mejores medios líquidos con gelatina, vertiendo su preparación sobre láminas de
vidrio protegidas de la contaminación por medio de una campana. Usando una aguja de platino
inicio la práctica de hacer estriados sobre el medio, para luego escoger los distintos tipos de colonias
que se desarrollaban y establecer cultivos puros en tubos con medio solidificado en posición
inclinada. Modifico luego este procedimiento incorporando las bacterias al medio antes de verter.

La gelatina fue remplazada en los laboratorios de Koch por agar, un agente solidificante que fue
sugerido por la esposa de uno de sus colegas que había vivido en el oriente donde se le usa en
repostería. Un paso gigantesco en la técnica de cultivos fue la innovación de E. J. Petri quien trabajo
con Koch diseño una placa de cultivo, cuyo uso describió en 1887, y que sigue usándose sin
modificación en el diseño hasta la fecha.

La primera noticia de la utilización de medios de cultivo nos llega del micólogo Brefeld, que consiguió
aislar y cultivar esporas de hongos en medios sólidos realizados a base de gelatina.
Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamaño) y no fue hasta
el año 1878 cuando Lister popularizó un método enfocado al cultivo puro basado en diluciones
seriadas en un medio líquido.

Koch realizó sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como soporte
nutritivo sólido, pero no tardó en recurrir al caldo de carne líquido, diseñado por Loeffler, al que, en
1881, añadió gelatina, logrando un medio sólido transparente ideal para la observación de la
morfología macroscópica de las colonias microbianas.

En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en relación con los medios
de cultivo: el médico alemán Walter Hesse introduce el agar-agar (polisacárido extraído de algas
rojas) como solidificante.

En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas, que se
llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clásicas bandejas de vidrio cubiertas con
campanas que se usaban hasta entonces.

Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre las bacterias
quimioautótrofas (utilización de nitrógeno y azufre sobre todo) tuvieron gran importancia en el
desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento. Diseñaron este tipo de medios de tal
forma que su especial composición química favorecía el crecimiento de ciertos tipos de
microorganismos que, en función de sus procesos metabólicos, eran los únicos capaces de utilizar
para su desarrollo ciertos nutrientes del medio.
En 1892 Würtz impulsó el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores de pH a la
composición de ciertos medios con lo cual se podía observar la producción de ácidos en la
fermentación en ciertos microorganismos.

MEDIOS DE CULTIVO. CLASIFICACION

Los medios de cultivo pueden clasificarse atendiendo a diferentes criterios:

1.- ESTADO FÍSICO:

Líquidos

Semisólidos

Sólidos

Cuando se desea obtener un medio sólido o semisólido se añade un agente solidificante, como el
Agar. Este es un polisacárido natural, complejo, de elevado peso molecular, derivado de un alga
marina que ha sido ampliamente utilizado para espesar alimentos (jaleas, sopas y helados). Este
polisacárido de galactosa, posee propiedades particularmente importantes que son idóneas para su
uso en Microbiología. Un medio líquido se denomina caldo. Ejemplo: Caldo Soya Tripticasa (CST),
Caldo Thioglicolato (CT), Aminoácidos, Carbohidratos, etc. Como se mencionó anteriormente, los
medios semisólidos contienen agar (<0.5%) y se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias
o en pruebas de fermentación-oxidación de carbohidratos. Los medios sólidos, también contienen
agar; pero en mayor concentración (1-2%). Ejemplo: Triple Azúcar Hierro (TSI), Agar Sangre Humana
(ASH), Mac Conkey (MC), Lisina Hierro Agar (LIA), etc.

2. PROCEDENCIA:

Naturales

Artificiales

Los naturales, como su nombre lo indica, contienen sustancias de origen natural, bien sea: vegetal
(Agar o Caldo con jugo de tomate para Lactobacillus) o de origen animal (Suero sanguíneo, sangre,
leche). Ejemplo: Amarillo de Huevo Agar, Löeffler, Lowestein-Jensen.

Los artificiales son aquellos cuya composición química se conoce exactamente. Son denominados
también Sintéticos o químicamente definidos. Son los más utilizados actualmente.

3. COMPLEJIDAD DE FÓRMULA:

Simples
Complejos

Los simples son aquellos que contienen únicamente una fuente de energía y Carbono (Glucosa –
Ácido Láctico), una fuente inorgánica de Nitrógeno y sales inorgánicas.

Los Complejos, incorporan además de los constituyentes anteriores, aminoácidos. La mayoría de los
microorganismos heterótrofos (bacterias y hongos) son cultivados de rutina, en medios complejos.
Estos se preparan con nutrientes, tales como: extractos de levaduras, extracto de carne o plantas,
digestos de proteínas o de otras fuentes.

4. FINALIDAD BACTERIOLÓGICA:

a) Comunes o Basales: son aquellos que tienden a satisfacer el desarrollo de la bacteria; pero sin
satisfacer ninguna condición especial de ésta. Ejemplo: Agar Nutritivo (AN), Müeller-Hinton (MH),
Caldo Soya Tripticasa (CST), Caldo MH, etc.

b) Enriquecidos: son los medios preparados para satisfacer los requerimientos nutricionales de las
bacterias más exigentes para crecer, por medio de la adición de sustancias, tales como: sangre,
suero, leche, líquido ascítico, huevos, vitaminas, etc. Ejemplo: Agar Sangre Humana (ASH), Gelosa
Chocolate (GC), Müeller Hinton Sangre (MHS), Müeller Hinton Chocolate (MHCH), Agar Sangre
Anaerobiosis (ASA), Caldo Thiglicolato (CT), etc.

c) Selectivos: aquellos que tienen por objeto permitir un crecimiento más rápido de las bacterias
que se desean aislar de una mezcla. Estos medios contienen sustancias químicas específicas
(colorantes, sales biliares, antibióticos) que actúan como inhibidores de un grupo de bacterias; pero
no afectan el crecimiento del microorganismo que interesa. Por ejemplo, el cristal violeta, en
concentraciones específicas, previene el crecimiento de las bacterias Gram positivas, sin afectar el
desarrollo de las Gram negativas.

Son medios que generalmente no se autoclavan; ya que son tan selectivos que difícilmente se
contaminan. Ejemplos: Tiosulfato Citrato Bilis Sucrosa (TCBS) y Bismuto Sulfito Agar (BSA) son
medios altamente selectivos, también denominados de Único Propósito; Xilosa Lisina Desoxicolato
(XLD) es un medio moderadamente selectivo; Salmonella Shigella Agar (SSA), también es un medio
selectivo.

d) Diferenciales: son medios que contienen ciertos reactivos o sustancias químicas (azúcares,
colorantes, indicadores de pH, etc.) que traen como resultado determinado tipo de crecimiento
bacteriano, o de cambios después de la inoculación e incubación del medio, lo que permite al
observador, diferenciar entre distintos tipos de bacterias. Por ejemplo: el Mac Conkey (MC) permite
diferenciar a los bacilos Gram negativos en Fermentadores o no de la Lactosa. Otros medios
diferenciales, incluyen: Eosina Azul de Metileno (EMB), Triple Azúcar Hierro (TSI), Lisina Hierro Agar
(LIA), etc.

e) Indicadores son aquellos medios de cultivo que contienen sustancias que cambian visiblemente
como resultado de la actividad metabólica de los microorganismos. Ejemplo: Caldo para
fermentación de Carbohidratos, Indol, Citrato, Malonato, etc.

f) De Enriquecimiento: como su nombre lo indica, un medio de enriquecimiento se usa para

incrementar el crecimiento de ciertas especies bacterianas e inhibir el desarrollo de
microorganismos no deseados. En laboratorios, los medios de enriquecimiento se utilizan con
mayor frecuencia para la recuperación de especies de Salmonella y Shigella de muestras fecales.
Estos medios se basan en el principio de que los microorganismos que forman parte de la flora fecal
normal son mantenidos en fase de latencia prolongada por las sustancias químicas inhibidoras
presentes en el caldo. Las especies de interés, son mucho menos inhibidas, entran en una fase de
crecimiento exponencial y se recuperan con mayor facilidad de muestras fecales. Sin embargo,
después de varias horas, los medios de enriquecimiento ya no suprimen el crecimiento de los
organismos entéricos normales y, finalmente, llenan el cultivo. Por lo que se recomienda que estos
caldos sean sub-cultivados como máximo a las ocho horas. Ejemplos: Caldo Selenito F, Agua
Peptonada Alcalina, Campythio, etc.

g) De Transporte: en esencia, estos medios son una solución buffer, sin carbohidratos, peptonas y
otros nutrientes y factores de crecimiento, diseñados para conservar la viabilidad de las bacterias
durante el transporte sin una multiplicación significativa de los microorganismos. Ejemplos: Cary &
Blair, Amies & Stuart.