SEMANA 10

MICROBIOLOGIA
Separación de Microorganismos:
Filtración, Decantación, Centrifugación
30/05/2017

DRA. SONIA HERRERA SANCHEZ

 Ultrafiltacion
Microorganismos retenidos en una membrana de Ultrafiltración.
Los poros son de menor tamaño que los microorganismos.

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 Filtración (1)
• Membranas con poros de un tamaño determinado o
materiales filtrantes. El tamaño del poro dependerá del
uso al que se va a someter la muestra.

• Los microorganismos quedan retenidos en parte por el

pequeño tamaño de los poros del filtro y en parte por
adsorción a las paredes del poro durante su paso a
través del filtro debido a la carga eléctrica del filtro y de
los microorganismos.
 Filtración (2)

• Debido al pequeño tamaño de los virus, nunca es posible tener

certeza de que, por los métodos de filtración que dejan libre de
bacterias una solución, se van a eliminar también los virus.
• Son difíciles de utilizar en líquidos con muchos sólidos suspendido

• Según el tamaño del poro se puede lograr esterilidad o

reducción de los microorganismos
• En las plantas de tratamiento de agua se logra remover hasta
el 90-99% de los microorganismos filtrando el agua
previamente floculada y sedimentada
 Filtración (3)

La filtración se utiliza para

• Emulsiones oleosas, aceites, algunos tipos de
pomadas.
• soluciones termolábiles: líquidos biológicos (suero de
animales, soluciones de enzimas, algunas vitaminas y
antibióticos).
• Esterilizar soluciones oftálmicas, soluciones
intravenosas, drogas diagnósticas, radiofármacos,
medios para cultivos celulares, y soluciones de
antibióticos y vitaminas.
 Existen tres tipos básicos de filtros:

• Filtros profundos o Filtros de profundidad:

consisten de un material fibroso o granular prensado,
plegado, activado, o pegado dentro de los canales de
flujo.
En este tipo de filtros la retención de las partículas se
produce por una combinación de absorción y de
retención mecánica en la matriz.
 Filtros HEPA

• Un filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air)

• Está compuesto por pliegues de acetato de
celulosa que retienen las partículas (incluídos los
microorganismos) del aire que sale de una
campana de flujo laminar.
• Membranas filtrantes: tienen una estructura continua,
y la retención se debe principalmente al tamaño de la
partícula.
Los filtros de membranas son discos de ésteres de
celulosa con poros tan pequeños que previenen el
paso de los microorganismos
Partículas más pequeñas al tamaño del poro quedan
retenidas en la matriz del filtro debido a efectos
electrostáticos.
• Estos filtros son desechables.
Los filtros de membrana se utilizan en:
• La esterilización de líquidos
• En el análisis microbiológico de aguas ya
que concentran los microorganismos
existentes en grandes volúmenes de
agua.
Filtro de Filtros de
microfibras de membrana de Millipore
vidrio. nitrocelulosa PVDF membrane.
Electron Electron
micrograph Electron
micrograph
micrograph
Whatman Schleicher
and Schuell
Filtros de huella de nucleación (Nucleoporo): son
películas muy delgadas de policarbonato que son
perforadas por un tratamiento conjunto con
radiación y sustancias químicas.
Son filtros con orificios muy regulares que
atraviesan la membrana verticalmente.
Funcionan como tamices, evitando el paso de
toda partícula con un tamaño mayor al del poro.
 SEPARACION POR FILTRACION
• Las preparaciones que contienen productos sensibles al calor
se esterilizan mejor por filtración.
• El material filtrante se prepara con un éster de celulosa u otros
polímeros con poros de tamaño preciso y uniforme. Es muy

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delgado, con un espesor de unos 150 mm y por eso se le
denomina membrana filtrante.

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• Los filtros más usados tienen un diámetro de poro de 0,2 mm ó
de 0,45 mm. Para su uso se suele colocar la membrana
preesterilizada sobre el disco que la soporta en la unidad de
filtración estéril.
• Los filtros de aire de elevada eficiencia (HEPA) permiten
suministrar aire libre de polvo y microorganismos a una cámara 12
de siembra, y están acoplados a un sistema de flujo laminar
Separación de Microrganismos: Filtración

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Materiales filtrantes sueltos

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 Equipos de Filtración

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Antes de utilizar cualquier sistema de filtración hay que determinar que
los filtros no presenten ninguna ruptura, ya que esto puede ocasionar 16
fallas en el proceso de filtración.
 MICROFILTRACION

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FILTRACION POR DIATOMEAS

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FILTRACION POR CARTON

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 FILTRACION DE PLACAS

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 SEDIMENTACION
• Es un método por el cual los microorganismos son
eliminados de depósitos hídricos.
• Se fundamenta en el hecho de que la densidad de muchas

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bacterias es algo mayor de 1.0; en consecuencia, se
depositan en el fondo del recipiente que las contiene

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quedando el líquido sobrenadante no estéril del todo, pero
su población microbiana disminuye notablemente. En el
laboratorio la sedimentación se acelera por centrifugación.
• Es utilizado este método para identificar microorganismos
en muestras de agua potable y otras sustancias
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 Separación de Microrganismos:
Decantación
• Es la separación mecánica de un sólido de grano grueso,
insoluble, en un líquido; consiste en verter cuidadosamente el

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líquido, después de que se ha sedimentado el sólido. Por este
proceso se separan dos líquidos miscibles, de diferente
densidad, por ejemplo, agua y aceite

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Separación de Microrganismos: Centrifugación

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 Separación de Microrganismos:
Centrifugación
• Las bacterias son normalmente demasiado pequeñas como para ser
separadas con filtros sencillos. Su separación por centrifugación también

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es difícil debido a las pequeñas diferencias en densidad entre las
partículas y la suspensión.

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La centrifugación no sólo se utiliza para separar partículas sólidas de la
fase líquida sino también para la separación de fluido/fluido.

Si bien la separación fluido/partícula es de la mayor importancia, la

separación fluido/fluido también es importante como es el caso en la
producción de penicilina para la separación del solvente que extrae el
antibiótico de la fase acuosa mediante una contracorriente continua en dos
etapas con acetato de amilo o de butilo a 0-3°C y pH: 2,5-3,0. 25
 Separación de Microrganismos:
Centrifugación
• La separación eficiente de las células por centrifugación se ve favorecida
por un tamaño grande de las partículas, una gran diferencia entre la
densidad de las partículas y el líquido, una baja viscosidad del líquido, un

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radio elevado del rotor de la centrífuga y una alta velocidad angular.
• Tanto el tamaño de las partículas, su densidad así como la viscosidad del
líquido normalmente no se pueden controlar.

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• Además, el radio del rotor de la centrífuga no puede incrementarse
indefinidamente ya que el estrés mecánico incrementa con el cuadrado del
radio por lo que los límites de seguridad se alcanzan fácilmente. Por todo
esto y cuando se trabaja con grandes volúmenes se debe recurrir a
centrífugas de flujo continuo. En este tipo de centrífugas la separación de
partículas es más eficiente cuanto más lento sea el flujo de la suspensión a
clarificar ya que se incrementa el tiempo que cada partícula está expuesta a
la fuerza centrífuga. 26
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