DETERMINACION DE ETANOL POR MICRODIFUSIÓN.

OBJETIVO.
Identificar la presencia de alcohol y en su caso determinar la concentración de etanol en
sangre (alcoholemia) y en otras muestras de fluidos biológicos por el método de
microdifusión.

MATERIAL.
3 cámaras de Conway Papel secante
1 gradilla 3 pipetas graduadas de 5 ml
1 jeringa de 1 a 3 ml 3 pipetas Pasteur de plástico
Tubos de 75 x 12 mm Probeta
Palillos de madera 3 tubos graduados d e10 ml.

REACTIVOS.
Solución saturada de carbonato de potasio
Solución ácida de dicromato de potasio ( ó
Reactivo de Antstie)
Solución de etanol (150 mg%)

EQUIPO
Espectrofotómetro
Celdas
Horno estufa.

MUESTRA.
Sangre
Orina
Saliva y otros fluidos biológicos.

METODO.

Secuencia. Prepare simultáneamente 3 cámaras.

A. Cámara problema:
1. Compartimiento central 2 ml de sol. Ácida de dicromato de potasio.
2. Compartimiento externo (izquierda) 1 ml de la muestra problema (sangre)
3. Compartimiento externo (derecha) 1 ml de la sol. saturada de carbonato de
potasio (mezclar con un palillo de madera).
B. Cámara testigo:
1. Compartimiento central 2 ml de sol. Ácida de dicromato de potasio.
 2. Compartimiento externo (izquierda) 1 ml de agua destilada
3. Compartimiento externo (derecha) 1 ml de la sol. saturada de carbonato de
potasio (mezclar con un palillo de madera).
C. Cámara del estándar:
1. Compartimiento central 2 ml de sol. Ácida de dicromato de potasio.
2. Compartimiento externo (izquierda) 1 ml de una sol. de etanol 150 mg%
3. Compartimiento externo (derecha) 1 ml de la sol. saturada de carbonato de
potasio (mezclar con un palillo de madera).

El proceso de microdifusión se lleva a cabo durante 45 minutos a 50°C de

temperatura, en el horno estufa. Una vez transcurrido el tiempo se realiza la
cuantificación del analito.

Determinación cuantitativa.
1. Con una pipeta Pasteur transfiera la solución del compartimiento central a un
tubo cónico graduado (etiquetado como: problema, testigo o estándar), según
sea el caso.
2. Lave varias veces dicho compartimiento con agua destilada, deposítela en el
tubo y afore a la marca de 10 ml.
3. La densidad óptica de las soluciones se determina λ = 450 nm, usando agua
destilada para calibrar “Blanco”.
4. Anotar los datos obtenidos.

Cálculos:

La solución problema se cuantifica de la siguiente manera:

mg % alcohol = ( D.O. del blanco – D.O. del problema) X F

F = concentración de la solución estándar en mg% / D.O. del “blanco” – D.O. del

estándar

El método es sensible para concentraciones del alcohol que oscile entre 0 y 400
mg%

Solución ácida de dicromato de potasio.

Disuelva 3.37 g de dicromato de potasio (grado analítico) en 150ml de agua destilada y
agregue cuidadosamente 280 ml de ácido sulfúrico concentrado, al mismo tiempo que la
solución se va enfriando, diluya gradualmente con agua destilada hasta 650 ml.

Nota:
La cámara de Conway consiste en dos placas de Petri concéntricas, con una base común.
La cámara grande tiene un diámetro externo de 68mm por 13 mm de altura; tiene un
compartimiento central de 35 mm de diámetro por 5 mm de profundidad. Se cubre con un
vidrio de 6 pulgadas cuadradas por 6 mm de espesor.
La cámara pequeña tiene unas dimensiones de 44 mm de diámetro por 15 mm de altura y
una profundidad de 10 mm; el compartimiento central tiene un diámetro de 12 mm por 6
mm de profundidad.

- SOLUCIÓN ÁCIDA DE DICROMATO DE POTASIO.

Disuelva 3.37 g de dicromato de potasio (grado analítico) en 150 ml de agua destilada y
agregue cuidadosamente 250 ml de ácido sulfúrico concentrado, al mismo tiempo que la
solución se va enfriando, diluya gradualmente con agua destilada hasta 650 ml.