Espectroscopia UV-visible.

Validación de métodos
analíticos. Fluorescencia. FIA.
1. Realizar el esquema de un espectrofotómetro UV-visible.

2. ¿Por qué fluorescencia es más sensible que UV?

3. Verdadero o Falso. Justifique.

(a) Las soluciones más concentradas fluorescen más.

(b) La robustez de un método analítico se mide agregando un producto de degradación a la solución de
lectura de la muestra.

4. ¿Qué método es más específico: espectrofotometría UV-visible o fluorescencia?. Explique claramente.

5. Explique el fenómeno de Stokes. ¿Cómo varía la longitud de onda en un analito fluorescente?. Ventajas y
desventajas de fluorescencia con respecto a la espectroscopia UV-visible.

6. ¿Por qué LoD y LoQ son menores en fluorescencia que en espectroscopia UV-visible?
7. Explique precisión y robustez en validación ¿Cómo se determinan?
8. Se determina la concentración de una droga por espectrofotometria siguiendo el protocolo que se describe a
continuación:
Se pesan 2 gramos de muestra y se disuelven en 250ml de buffer adecuado (SOLUCIÓN A). Una alícuota
de 5ml de la solución anteriormente preparada es diluida en un volumen final de 20ml del mismo buffer
(SOLUCIÓN B). La absorbancia de 2ml de la solución B luego agregado 2ml de reactivo colorante fue 0,1305.
Por separado se pesan 20mg de una droga patrón y se agregan a la solución B anterior, la absorbancia de 2ml
de la solución B suplementada con la droga patrón luego del agregado del reactivo color fue 0,2568. Calcular
%p/p de la droga en la muestra.

9. Se tiene una muestra de agua de la cual se quiere determinar por espectofotometria el contenido de cadmio.
Se toman 25 mL de muestra y se diluyen a un volumen final de 50 mL (solución A). Se toman 10 mL de la
solución A y se agregan 5 mL de reactivo de color y se completa con buffer hasta un volumen final de 25 mL.
Se midió la absorbancia y dio 0,260. Luego se toman 10 ml de la solución A y se agregan 2 mL de patrón
de concentración 5 μg/ml y 5 mL de reactivo de color y se lleva a un volumen final de 25 ml dando una
absorbancia de 0,580.
Calcular las ppm de Cd2+ en la muestra.
10. Realizar un esquema de un espectrofotómetro UV-visible y espectrofluorímetro, indicando sus partes y su
función. ¿Cuál posee mayor selectividad? ¿Con qué parámetro la puede estimar? ¿Cómo la evaluaría?
11. Se desea cuantificar benzopireno presente en salchicas noruegas de carne ahumada. Para ello se procesan 200
gr de salchichas extrayendo finalmente el hidrocarburo con 20 mL de cloruro de metileno. También se prepara
un blanco con 200 gr de salchichas noruegas de carne no ahumada (no contiene benzopireno). Se sigue el
siguiente protocolo:

Tubo Extracto de Extracto de Patrón 5μg% Diluyente L

muestra blanco (mL) csp (mL)
(mL) (mL)
1 2 - - 50 104
2 - 2 - 50 10
3 2 - 0,2 50 250
Calcular la concentración de benzopireno en μg/kg de salchichas noruegas de carne ahumada.

12. Se puede determinar las concentraciones de una mezcla de Fe3+ y Cu2+ formando complejos con hexacianorute-
nato (II) [Ru(CN)6 ]-4 que forma un complejo azul violaceo con el Fe3+ (λmáx = 550nm) y un complejo gris
pálido con Cu2+ (λmáx = 396nm). Las absortividades molares de los complejos de metal se resumen en la

1
 siguiente tabla:

ε ε
(550nm) (396nm)
Fe3+ 9970 84
Cu2+ 34 856
Cuando una muestra que contiene Fe3+ y Cu2+ se analizó con una cubeta de 1cm de paso óptico la ab-
sorbancia a 550nm fue de 0,183 y la absorbancia a 396nm de 0,109. ¿ Cuál es la concentración molar de Fe3+
y Cu2+ en la muestra?

13. Explique brevemente la influencia del solvente y del pH sobre la fluorescencia y fosforescencia. ¿Existen otros
factores que pueden influir sobre estos fenómenos?
14. Soluciones conteniendo aminoácidos como triptofano y tirosina pueden ser analizadas en solución alcalina
(0.1M KOH) a partir de sus espectros de absorción UV. Los coeficientes de absorción en estas condiciones a
240 y 280 nm son:

ε ε
(240nm) (280nm)
Tyr 11300 1500
Trp 1960 5380
Una muestra de 10 mg de la proteína glucagon se hidroliza hasta la obtención de los aminoácidos que la
componen diluyéndola en 100 ml de 0.1 M KOH. La absorbancia de esa solución (1 cm de paso óptico) es
0,717 a 240 nm y 0,239 a 280 nm. Calcular el contenido de triptofano y tirosina expresados en μmol/g de
proteína.
15. Se desea cuantificar una sustancia X (λabs = 610nm) presente en una muestra acuosa mediante espectrofo-
tometria visible. Se toman 5 ml de la muestra y se llevan a 10 ml con buffer adecuado, con esta dilución de
la muestra preparada se continúa con el siguiente protocolo de trabajo:

Tubo Alícuota de Patrón Rvo de color Agua csp Abs

dilución de la 2ppm (mL) (mL) (mL) (λ=610nm)
muestra (mL)
1 0,1 - 12 50 0,380
2 - - 12 50 0,050
3 0,05 0,04 12 50 0,720
Calcule el contenido en mg% y en ppm de la sustancia X analizada.
16. Mencione dos formas para aumentar la emisión de fluorescencia. Explique claramente qué produce dicho
aumento en la emisión.
17. Se toma 1 mL de muestra de un ácido HA y se lleva a volumen final de 25 mL con buffer. Se realiza una
extracción con 20 mL de hexano, se toman 10 mL del extracto y se realiza una segunda extracción con 10 mL
de buffer de pH 5,5 y se lleva a 50 mL de volumen final. Las absorbancias son 0,425 y 0,665 a λ=410nm y
λ=580nm. A pH 5,5 estan presentes ambas especies.

ε ε
(λ=410nm) (λ=580nm)
HA 2001 652
A- 0 603
Calcular las concentraciones de HA y A- y expresarlas en mM.

18. ¿Qué es la especificidad de un método analítico? Tiene una sustancia que absorbe al UV y es fluorescente.
Para tener mejor especificidad: ¿Qué espectroscopia utiliza: UV o fluorescencia? Justifique.
19. Discuta la siguiente afirmación.
validación: La exactitud de un método se evalúa con el agregado de una solución estándar.

2
20. ¿Qué diferencia hay entre validar, verificar (calibrar) y calificar.
21. Se desea calibrar a la décima de ml una pipeta de doble aforo. Para ello, se mide con dicha pipeta una solución
0,001 M de una solución coloreada, se escurre el contenido entre ambos aforos dentro de un matraz de 50 ml
y se lleva a volumen con agua destilada. Se mide la absorbancia y da 0,196. Se toma una nueva alícuota de la
misma solución con la pipeta problema, se coloca en un matraz 50 ml, se agrega 10 ml de la misma solución
con una pipeta calibrada y se enrasa con agua destilada. La absorbancia de esta segunda solución es de 0,396.
Determinar el volumen de la pipeta problema.
22. Se desea cuantificar quinidina en 5 mL de una muestra, midiendo fluorescencia. Los 5 mL de la muestra se
diluyen a 250 mL (Solución A). Se realiza el análisis según el siguiente protocolo:

Tubo Sc A Std 1ppm Buffer csp L

(mL) (mL) (mL)
1 0 0 10 8
2 2 0 10 43
3 2 2 10 70
Calcular la concentración de quinidina en mg/ml.
23. Seleccione y justifique:

(a) La cantidad mínima de una sustancia que se puede cuantificar dentro del valor estadístico adecuado
representa:
i. La desviación estándar relativa del método propuesto.
ii. El límite de detección de la sustancia.
iii. El límite de cuantificación.
iv. La selectividad del procedimiento.
(b) La utilización del método de adición de estándar está recomendada para utilizarlo:
i. Siempre que se pueda.
ii. Cuando la cantidad a medir es muy grande.
iii. Cuando se quiere utilizar un efecto de dilución.
iv. Cuando queremos minimizar el efecto matriz.
(c) Considerando que una molécula presenta fluorescencia desde el estado S1 y fosforescencia desde el estado
T1:
i. La emisión fosforescente se presenta a longitud de onda mayor que la fluorescencia.
ii. La emisión fosforescente se presenta a longitud de onda menor que la fluorescencia.
iii. La emisión fosforescente se presenta a longitud de onda igual que la fluorescencia.
iv. No hay emisión en ninguno de los casos.

24. Enumere y explique concluyentemente los pasos a seguir en la puesta a punto de una cuantificación por
espectrofluorometría.
25. Calcular el pKa de un compuesto fenólico. La Ca es 5 · 10−3 M

pH Abs
(λ=430nm)
13 1,501
4 0,085
8 0,602
26. Definir bioluminiscencia y quimioluminiscencia.
27. Corregir la siguiente frase:
validación: Si uno desea evaluar la linealidad de un método analítico realiza cambios en la técnica para
corroborar que la respuesta "n" varíe. Si desea evaluar la robustez de un método realiza agregado de estándar
a la muestra a medir.

3
28. El Ga(III) forma un complejo coloreado con la hidroxiquinolina. Para la determinación de Ga(III) en una
muestra, se toman 4 gr de la misma y se diluyen en una solución reguladora llevando a volumen final 200 mL
en un matraz aforado.
Se toman dos alícuotas de dicha solución y se procede de la siguiente manera:
1 2 3
Alícuota de la mtra (mL) - 50 50
Std Ga(III) 4,00 ppm (mL) - 4,0 -
Hidroxiquinolina 0,1% (mL) 20 20 20
Buffer HAc/AcNa pH 4,5 (mL) 15 15 15
H2 O dest (mL) 65 11 15
Absorbancia a 550 nm 0,090 0,934 0,602
Cubeta de 1 cm
Calcular las ppm de Ga(III) en la muestra.
29. ¿Cómo se evalúa la exactitud de un método analítico?
30. El 2,3-quinoxalinaditiol forma un complejo coloreado con el níquel el cual, presenta un máximo de absorbancia
en 656 nm. Para la determinación de níquel en una muestra acuosa, se utilizó un patrón de acetato de níquel
y se procedió como se indica en la tabla:

Tubo A B C
Muestra (mL) 5 5 5
Acetato de níquel 0,5 ppm (mL) - 2 -
2,3-quinoxalinaditiol (mL) 20 20 -
H2 O csp 100 100 100
Absorbancia a 656 nm 0,650 0,866 0,060
Calcule la concentración molar de níquel en la muestra.
PA Ni: 58,71; PA C: 12,011; PA H: 1,0079; PA O: 15,9994

31. La difenilcarbazida forma un complejo con Cr4+ que absorbe a 540 nm y permite la determinación de dicho
elemento por espectrofotometría. De esta manera se analizó el contenido de cromo en aceite mineral.
Una alícuota de 20 mL de aceite fue diluida a 100 mL con solvente. Luego se midieron 25 mL de la dilución,
se adicionaron 10 mL de difenilcarbazida y se llevó a 50 mL finales con solvente.
La absorbancia resultante fue 0,525.
Se preparó un blanco midiendo 25 mL de la primera dilución del aceite y llevando a 50 mL finales con solvente.
La absorbancia fue de 0,050.
El patrón se preparó midiendo 5 mL de una solución de Cr4+ 2 ppm, adicionando 5 mL de difenilcarbazida y
llevando a un volumen final de 25 mL. La absorbancia de esta solución fue de 0,632.
Calcular la cantidad de Cr4+ en la muestra de aceite expresada en μg/mL.
32. Un agente X forma con Cd(II) un complejo que absorbe radiación UV con un máximo a 347 nm, según:

Cd2+ + 2X −→ CdX22+

Dicho complejo cumple con la ley de Beer a la λ indicada en un amplio rango.

Cuando la concentración de X es por lo menos 10 veces superior a la de Cd2+ , éste último existe únicamente
como CdX2 2+ . En base a los siguientes datos, calcule la Kf del complejo.

Cd2+ (M) X (M) Abs a 347 nm (celda 1 cm)

2 · 10−4 1, 8 · 10−1 0,685
2 · 10−4 0, 8 · 10−3 0,380
33. El complejo MgA2 exhibe un máximo de absorción a 580 nm. A 0,5 mL de suero se agrega 1 mL de una
solución de buffer TRIS y luego 10 mL de cloroformo. El blanco se prepara en forma paralela sustituyendo los
0,5 mL de suero por agua. Luego se centrifuga, se elimina la capa acuosa y se trabaja con la fase clorofórmica.
Se sigue el siguiente esquema de trabajo:

4
 blanco estándar muestra
2 mL de extracto de blanco 2 mL de extracto de blanco 2 mL de extracto de muestra
0,5 mL de etanol 0,5 mL de Mg2+ (0,04mg%) 0,5 mL de etanol
5 mL de reactivo A- 5 mL de reactivo A- 5 mL de reactivo A-
Abs=0,050 Abs=0,600 Abs=0,240
Calcule la concentración de Mg2+ en el suero en mg%.
34. El hierro en su estado trivalente forma un complejo con SCN- que absorbe en 580 nm. Una sal que contiene
0,5 mg de hierro se disuelve en 100 mL de agua, agregando un oxidante para que todo el Fe pase al estado
trivalente. Una alícuota de 20 mL de esta solución se lleva a 50 mL con agua deionizada. Luego se toman
5 mL y se agrega un exceso de SCNK y se llevan a 100 mL. La absorbancia de esta solución fue de 0,251.
Posteriormente se pesan 1,5002 gr de muestra, se disuelven adecuadamente, se agrega un oxidante y se llevan
a 100 mL finales. Una alícuota de 2 mL se diluye a 50 mL. Luego se toma 1 mL de esta última dilución, se
agrega un exceso de SCNK y se lleva a 50 mL. La absorbancia de esta solución es de 0,347. En forma paralela
1 mL de la misma dilución se lleva a 50 mL y se lee su absorbancia dando 0,050. Calcular el porcentaje de
hierro presente en la muestra.
35. El hierro combinado puede determinarse por espectrofotometría utilizando como reactivo de color SCNK
0,3M. Para analizar el hierro en una muestra sólida se toman 20 comprimidos, se trituran, se pesa 0,106 gr
del pulverizado y se diluyen a 50 mL con agua destilada. Posteriormente se realiza una dilución al quinto y
se sigue el siguiente protocolo de trabajo.

Tubo Dil de mtra Fe3+ 2ppm Buffer (mL) SCNK 0,3M Agua csp Abs
(mL) (mL) (mL) (mL) (λ=580nm)
1 5 - 5 5 20 0,299
2 - 0,1 5 5 20 0,381
3 5 - 5 - 20 0,050
4 - - 5 5 20 0,020
Calcular el contenido de Fe3+ en la muestra sólida expresados como ppm.
36. Se evaluó la exactitud de un método de cuantificación de NADH en una muestra biológica por espectrometría
de fluorescencia molecular mediante la técnica de adición de estándar. Para ello se transfirieron 2 mL de
muestra a un matraz y se llevó a 100 mL. La intensidad fluorescente de dicha solución en 465 nm fue 9,01 U.
Luego se tomaron otros 2 mL de la muestra y se agregó 1 mL de la solución patrón de NADH 20 μmol/L y
se llevó a 100 mL. La intensidad fluorescente de la solución fortificada fue 13,18 U. Con base a los estudios de
linealidad, la ecuación de la recta que describe la intensidad fluorescente en función de la concentración resultó:

I = 22, 35(µmol/L)−1 · C + 3, 57 · 10−4

Calcule el % de recuperación.
37. El Cr6+ forma un complejo coloreado con difenilcarbazida (DFC), que presenta un máximo de absorción en
λ= 540nm.
Para analizar el contenido de Cr6+ en una muestra de aceite se toman 20 mL de muestra y se diluyen a 100
mL con el solvente adecuado, tomando esta dilución como la dilución madre.
A una alícuota de 20 mL de esta dilución se le agregan 5 mL de solución de DFC 0,9F y se llevan a volumen
de 30 mL con el solvente. Otra alícuota de 20 mL de la dilución madre se lleva a volumen final de 30 mL con
el solvente. Las lecturas obtenidas para estas diluciones fueron en λ= 540nm de 0,691 y 0,06 respectivamente.
Posteriormente se prepara una solución de Cr6+ de concentración 5 · 10−3 mg/mL, tomándose 3 mL de la
misma y llevándola a volumen final de 25 mL luego del agregado de DFC 0,9F. La absorbancia de esa solución
en λ= 540nm fue de 0,780.
Calcule la cantidad de Cr6+ presente en el aceite como ppm.
38. La cantidad de hierro en un suplemento dietario puede determinarse espectrofotométricamente utilizando un
reactivo de color adecuado. Para llevar a cabo la cuantificación 5 mL de la muestra se llevan a 50 mL con
buffer adecuado. Se toman 5 mL de esta dilución y se llevan a volumen final de 15 mL. Utilizando esta última

5
 dilución para la cuantificación se procede de la siguiente manera:

Tubo Dil de Fe3+ 3ppm Buffer Rvo de color Agua csp Abs
muestra (mL) (mL) (mL) (mL) (λ=580nm)
(mL)
1 2 - 5 5 20 0,619
2 - 0,5 5 5 20 0,351
3 2 - 5 - 20 0,020
4 - - 5 5 20 0,030
Calcule la cantidad de hierro en el suplemento dietario expresado como ppm.
39. Se evaluó la exactitud del método de cuantificación de quinina en comprimidos antimaláricos por espec-
trometría de fluorescencia molecular mediante la técnica de adición de estándar. Para ello se pulverizaron
varios comprimidos y se disolvieron en HCl 0,1M. Se transfirieron 4 mL de la solución concentrada a un
matraz y se llevó a 100 mL. La intensidad fluorescente de dicha solución en 347,5 nm fue 578 U. Luego se
tomaron otros 4 mL de la solución concentrada y se agregó 2 mL de solución patrón de quinina 10 mg/mL y
se llevó a 100 mL. La intensidad fluorescente de la solución fortificada fue 930 U. Con base a los estudios de
linealidad, la ecuación de la recta que describe la intensidad fluorescente en función de la concentración resultó:

I = 1, 8 (ppm)−1 · C + 1
Calcule el % de recuperación.
40. Se tiene una muestra A en la cual se quiere determinar el contenido de un principio activo por espectrofo-
tometría. La muestra se diluye al quinto y se procesa una alícuota de esta dilución con el siguiente protocolo:

Tubo Alícuota de Patrón 2 ppm Rvo de color Agua csp Abs

dilución A (mL) (mL) (mL) (mL) (λ=580nm)
1 0,05 - 10 50 0,280
2 - - 10 50 0,020
3 0,05 - - 50 0,010
4 - 0,04 10 50 0,360
Calcule el contenido en ppm del principio activo en la muestra.

41. Se evaluó la exactitud del método de cuantificación de quinina en comprimidos antimaláricos por espec-
trometría de fluorescencia molecular mediante la técnica de adición de estándar. Para ello se pulveriaron
varios comprimidos y se disolvieron en HCl 0,1M. Se transfirieron 2 mL de la solución concentrada a un
matraz y se llevó a 100 mL. La intensidad fluorescente de dicha solución en 347,5 nm fue 289 U. Luego se
tomaron otros 2 mL de la solución concentrada y se agregó 1 mL de solución patrón de quinina 10 mg/mL y
se llevó a 100 mL. La intensidad fluorescente de la solución fortificada fue 465 U. En base a los estudios de
linealidad, la ecuación de la recta que describe la intensidad fluorescente en función de la concentración resultó:

I = 1, 8 (ppm)−1 · C + 1
Calcule el % de recuperación.
42. El Fe3+ forma un complejo coloreado con SCN- que absorbe en 580 nm. Se disuelve una cantidad de sal
equivalente a 50 mg de Fe en 100 mL de agua deionizada y se agrega un oxidante para que todo el hierro
pase a su estado trivalente. Se mide una alícuota de 25 mL de esta solución y se lleva a 100 mL con agua
deionizada. Luego se toman 5 mL, se agrega un exceso de KSCN llevándose a 100 mL. La absorbancia de esta
solución fue 0,270 en 580 nm. Se pesan 3,1 gr de muestra se disuelven adecuadamente, se agrega un oxidante
y se llevan a 100 mL finales. Una alícuota de 2 mL se diluye a 50 mL. Se toma 1 mL de la última dilución y
se agrega un exceso de KSCN llevándose a volumen de 50 mL. La absorbancia de esta solución medida en 580
nm es de 0,362. Paralelamente se toma 1 mL de la última dilución y se lleva a 50 mL, dando una absorbancia
de 0,06. Calcule el porcentaje de hierro en la muestra.

43. Se evaluó la exactitud del método de cuantificación de ácido acetilsalicílico en comprimidos por espectrofo-
tometría UV mediante la técnica de adición de estándar. Para ello se pulverizaron varios comprimidos y 50

6
 mg de polvo se disolvieron en un volumen adecuado de agua destilada. Se transfirieron 2 mL de la solución
concentrada a un matraz y se llevó a 10 mL. La absorbancia de dicha solución en 274 nm fue 0,4374. Luego
se tomaron otros 2 mL de la solución concentrada y se agregó 1 mL de solución patrón de ácido acetilsalicílico
130mg/100mL y se llevó a 10 mL con agua destilada. La absorbancia de la solución fortificada fue 1,0266.
Teniendo en cuenta que con base a los estudios de linealidad, la ecuación de la recta que describe la absorban-
cia en función de la concentración resultó:

A = 8, 2343 · 102 M −1 cm−1 · b · C + 0, 0006

y que en todos los casos se utilizó una celda de 1 cm, calcule el porcentaje de recuperación.
PM ácido acetilsalicílico: 180,15 g/mol.
44. Para analizar el contenido de Cr6+ en una muestra de aceite se aprovecha la propiedad del mismo de formar
un complejo coloreado con difenilcarbazida (DFC) cuyo máximo de absorción es en 540 nm. Para realizar
el ensayo se toman 20 mL del aceite y se diluyen a 100 mL con un solvente adecuado (solución madre).
A una alícuota de 25 mL de la solución anterior, se le adicionan 10 mL de una solución de DFC 0,5M y
posteriormente se lleva a un volumen de 50 mL con el solvente. Paralelamente 25 mL de la solución madre
se llevan a 50 mL finales. Las lecturas obtenidas para la primera y segunda solución antes mencionadas 0,525
y 0,050 respectivamente. Posteriormente a 5 mL de una solución de Cr6+ 2μg/mL, se le adicionan 5 mL de
DFC 0,5M y se llevan a volumen final de 25 mL, dando una lectura de 0,632. Calcule la cantidad de Cr6+ en
la muestra de aceite expresándolo como ppm.

45. La cuantificación del hierro de unos comprimidos se puede realizar determinando fotocolorimétricamente el
contenido del mismo.
Se morterearon 20 comprimidos y se pesaron 0,106 gr del pulverizado y se diluyó a 100 mL con agua destilada.
Luego se hizo una dilución de 10 en 100 mL.
El análisis se completó tratando una alícuota de la última dilución como se indica:

Muestra Fe2+ 3,0ppm Buffer Ligando Agua csp Abs

(mL) (mL) (mL) (mL) (mL) (λ=545nm)
25,00 0,00 10,00 5,00 50,00 0,422
25,00 3,00 10,00 5,00 50,00 0,690
0,00 0,00 10,00 5,00 50,00 0,094
Exprese mg de fumarato ferroso por comprimidos sabiendo que el peso promedio por comprimido es 719,8
mg.
Datos:
Fumarato ferroso: C4 H2 F eO4
PM C: 12,011; PM H: 1,008; PM Fe: 55,847; PM O: 15,99
46. Verdadero o Falso. Justifique.
La absortividad molar de una sustancia disuelta en etanol es 1015. Se posee una muestra acuosa de dicha
sustancia cuya absorbancia medida en una cubeta de 1 cm es 0,465. Por lo tanto la concentración de la
muestra es 4,6.10-3 M.
47. Para la cuantificación de iodo molecular (I2 ) y ioduro (I- ) se emplea el método del Leuco Cristal Violeta.
Fundamento: El iodo reacciona directamente con la leuco base a pH regulado entre 3,00 y 4,00 produciendo
cristal violeta, un colorante que posee su máxima absorción a 592 nm. El agregado previo de peroximono-
sulfato de potasio transforma al ioduro existente en iodo reaccionando este último con la leuco base.
Se analizó una muestra incógnita según el siguiente protocolo:

A B C D
Sc st de ioduro* 5 mL - - -
Muestra - 50 mL 50 mL 50 mL
Sc Peroximonosulfato de K 1 mL - 1 mL 1 mL
Sc Leuco Cristal Violeta 1 mL 1 mL 1 mL -
Buffer pH= 3,5 40 mL 40 mL 40 mL 40 mL
Agua (csp) 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL
Abs (λ= 592 nm) 0,150 0,240 0,300 0,030

7
 *La solución estándar de ioduro se preparó llevando 0,1 mL de una solución stock de 1000 ppm de ioduro a
volumen de 1000 mL.

Calcular la concentración de ioduro y iodo en la muestra expresada en ppb (ng/mL).

48. El 8-hidroxiquinolinol forma un complejo coloreado tanto con el cobalto como con el níquel cuyas absortivi-
dades molares correspondientes a sus máximos de absorción se muestran en la tabla. Una solución de ambos
metales presentó una absorbancia de 0,598 a 365 nm y de 0,039 a 700 nm medidas ambas con una cubeta de
1,00 cm. Calcular las ppm de cobalto y níquel en la solución.

Absortividad molar ε
365 nm 700 nm
Co 3529 428,9
Ni 3228 10,2
PA Ni: 58,71
PA Co: 58,9332

49. Un jarabe contiene sulfato ferroso, ácido ascórbico, vitamina B1 y vitamina B6 .

Para la cuantificación del Fe2+ se procede según el siguiente esquema de trabajo:
Se tomaron 10 mL del jarabe y se diluyeron a 500 mL con agua destilada. Luego se realizó una dilución 1/4
y a esta última se la llamó solución de trabajo.

Sc de trabajo (mL) Fe2+ 2ppm (mL) Ligando (mL) Buffer csp (mL) Abs (λ= 520 nm)
10,00 0,00 10,00 50,00 0,420
10,00 2,00 10,00 50,00 0,588
0,00 0,00 10,00 50,00 0,010
PA Fe: 55,85; PA S: 32,02; PA O: 15,99

Calcular el % de sulfato ferroso en la muestra.

50. ¿Cómo influye en ancho de la cubeta en la sensibilidad de una determinación espectrofotométrica?

51. Diseñe un experimento para calcular la constante de formación del complejo B2 Ni (II) sabiendo que sólo el
complejo absorbe al visible y que cuando la concentración del agente complejante B supera a la de Ni (II) en
un factor de 5 ó más, el catión existe totalmente bajo la forma de complejo.

52. Explique cómo procedería para cuantificar los compuestos A y B presentes en una muestra por FIA teniendo
en cuenta los siguientes barridos espectrales.