RECOMENDACIONES:

- La muestra debe ser pesada con exactitud y la balanza analítica debe estar
correctamente calibrada.
- Evitar que la muestra se quede en el cuello del matraz.
- Durante la digestión debe controlarse la producción de espuma en las muestras.
- Se debe tener los reactivos listos y correctamente preparados, cualquier error en
su preparación puede afectar el resultado final.
- Al colocar los valores, tener cuidado en el número de decimales a usar ya que
esto puede generar una fuente de error.
-Todos los materiales volumétricos deben ser calibrados para obtener mejores
resultados.
-El tamaño de la muestra no debe ser muy pequeño ni tampoco muy alto, en este
último debido a que en la valoración se gastaría un volumen que sobrepasa el
valor nominal de la bureta, siendo ambos casos una fuente de error.
- En todo momento se debe estar atento a las indicaciones del profesor o del
técnico encargado, si es que algún material se rompe o una sustancia se derrama
avisar inmediatamente y no tratar de limpiarlo por cuenta propia.
- La práctica debe realizarse bajo las pautas de buenas prácticas de laboratorio,
de gestión ambiental y de gestión de seguridad y salud ocupacional. Ya que hay
peligros de quemadura por calor y salpicaduras de NaOH y H2SO4 por lo tanto se
debe contar con la vestimenta apropiada y utilizando guantes en todo momento.

5. Investigue el fundamento analítico para la determinación de proteínas por

cada uno de los siguientes métodos:
- Método de Biuret:
Es un método el cual permite detectar la presencia de péptidos de más de dos
aminoácidos y proteínas. Esta prueba se basa en la reacción que se produce entre
los nitrógenos de los grupos animo que participan en los enlaces peptídicos y los
iones cúprico (Cu2+) del CuSO4, lo que da lugar a la formación de un compuesto,
llamado biuret, cuyo color oscila entre azul, violeta y rosa, dependiendo de la
naturaleza de la proteína detectada.
-Método de Lowry:
Es un método colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. A la
muestra se añade un reactivo el cual forma un complejo coloreado con las
proteínas, siendo la intensidad de color proporcional a la concentración de
proteínas, según la ley de Lambert-Beer. Este método consta de dos etapas:
1) Los iones Cu2+, en medio alcalino, se unen a las proteínas formando complejos
con los átomos de nitrógeno de los enlaces peptídicos. Estos complejos Cu2+-
proteína tienen un color azul claro. Además, provocan el desdoblamiento de la
estructura tridimensional de la proteína, exponiéndose los residuos fenólicos de
tirosina que van a participar en la segunda etapa de la reacción. El Cu2+ se
mantiene en solución alcalina en forma de su complejo con tartrato.
2) La reducción, también en medio básico, del reactivo de Folin-Ciocalteau, por los
grupos fenólicos de los residuos de tirosina, presentes en la mayoría de las
proteínas, actuando el cobre como catalizador. El principal constituyente del
reactivo de Folin-Ciocalteau es el ácido fosfomolibdotúngstico, de color amarillo,
que al ser reducido por los grupos fenólicos da lugar a un complejo de color azul
intenso.
- Método del ácido Bicinconínico (BCA):
Se basa en el principio de que las proteínas reducen los iones cúpricos a iones
cuprosos bajo condiciones alcalinas. Los iones cuprosos reaccionan con el BCA
(verdoso) para formar un color morado. El color formado es proporcional al
contenido proteico de la muestra.
- Método de absorción UV a 280 nm:
Las proteínas muestran un fuerte grado de absorción a 280nm en UV,
principalmente debido a los residuos de triptófano y la tirosina de las proteínas.
Ya que las concentraciones de estos aminoácidos en las proteínas son
francamente constante se puede utilizar la absorbancia a 280nm para estimar la
concentración de proteínas usando la ley de Beer.
- Método de adhesión de colorante:
La muestra proteica se mezcla con una cantidad excesiva conocida de un
colorante aniónico en una solución buffer. Las proteínas se unen al colorante para
formar un complejo insoluble, se mide el colorante no adherido, soluble posterior al
equilibrio de la reacción y la remoción del complejo insoluble por centrifugación y
filtración. El colorante no adherido está inversamente relacionado al contenido
proteico de la muestra.
-Método de Bradfort:
El método Bradfort, consiste en la formación de un compuesto de adsorción de
coloración azul entre los residuos de aminoácidos básicos de las proteínas y el
colorante azul Coomassie.
La absorbancia se lee a 595 nm y la intensidad de la absorción depende del
contenido de aminoácidos básicos y aromáticos.
-Método de la Ninhidrina:
Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno
carboxilo libre, reaccionarán con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la
aparición de un color violáceo o amarillo. Debido a que las proteínas y los
aminoácidos, poseen esta característica, la reacción sirve para identificarlos.
Algunas soluciones de amonio y aminas, dan la coloración característica,
aparentemente debido a una oxidación y reducción intramolecular de la ninhidrina
en presencia de amoníaco. Los aminoácidos porina e hidroxiprolina, que no
poseen grupo amino sino imino (-NH-), dan un color rojo que pasa rápidamente a
amarillo.
- Método turbidimétrico
Mide la reducción de la intensidad de la luz al pasar por una suspensión de
partículas de proteínas. Este cambio se relaciona con el contenido de proteína.
Referencia: www.fao.org
8. Una muestra de 0.5 g de un embutido es analizada por la técnica de
Kjeldahl (modificación: ácido bórico). El gasto de HCl 0.116 M fue de 7.2 mL.
Calcular el % de proteínas totales en la muestra.
1 H2BO3- + 1HCl -> H3BO3
- M= mmol/ mL -> 0,116 M = mmol/ 7.2 mL -> moles= 0.8352 mmoles HCl
MOLES DE HCl = MOLES DE NH3 = MOLES DE NITRÓGENO EN LA MUESTRA

- Entonces tendríamos también 0.8352 mmoles de Nitrógeno en la muestra

n = w(g) de N en la muestra / Peso fórmula -> W(g) de N= 11.6928 mg
%N = w(g) de N en la muestra / w(g) de la muestra x 100
%N = 11.6928 mg / 0.5 g x 100 = 2.3386
%N X 6.25 = %PROTEÍNA
Entonces 2.3386 x 6.25 = 14.6163 % proteínas totales en la muestra.