• Processo enzimático: os agentes transformadores são um tipo ou grupo de enzima (purificada ou não);

células mortas (que funcionam como suporte enzimático).

• Processo fermentativo: os agentes são: microrganismos vivos, as reações são consequências da atividade
metabólica das células microbianas; células de tecidos vegetais ou animais; vírus.

Em ambos processos as enzimas são os catalisadores.

• MATÉRIA-PRIMA

• Amiláceas: grãos/cereais: trigo, milho, cevada, centeio, arroz; raízes/tubérculos: mandioca, batata, batata-
doce. Produtos: glicose, maltose, dextrinas
• Sacaríneas: caldo de cana de açúcar, melaço, suco de frutas, leite, soro do leite, vinhaça.
• Celulósicas: subprodutos da indústria madeireira; bagaços; cascas de frutas; sabugo de milho; resíduos
agrícolas. A celulose é um polímero composto de glicose. • Produtos: Glicose, celobiose, oligossacarídeos.

• MEIO DE CULTURA
• Preparado no Laboratório: meio sintético utilizado para preparação e crescimento do inóculo adicionado ao
fermentador. Composição: Substratos e nutrientes, fontes de C, N, F, sais minerais e vitaminas.
• Utilizado na Fermentação: é o substrato industrial da fermentação, a matéria-prima.

• Preparo do inóculo
• Características Microrganismos: boa conversão, não produzir substâncias incompatíveis com o produto,
comportamento constante, condições simples de processos, com meio de culturas baratos, permitir a rápida
liberação do produto para o meio, não sofrer mutações, quantificável.
• Seleção e isolamento do microrganismo de interesse;
• Crescimento dos microrganismos em meio de cultivo apropriado; para aumentar a massa de MO e diminuir
o tempo de processamento.

• FERMENTADOR:

Classificação:
• Quanto ao meio: fermentação submersa (meio líquido) ou superficial (meio sólido)
• Quanto à formal: cilíndrico, paralelepípedo
• Quanto ao fechamento: fechado ou aberto
• Quanto ao material de construção madeira, aço carbono ou inoxidável, resinas, plásticos, vidro

Reatores STR • Agitação mecânica favorece a homogeneização, suspensão de sólidos, dispersão gás-
líquido, aeração e a transferência de calor e massa.

• Coluna de bolhas: mais simples, entrada de ar pelo fundo; menores tensões de cisalhamento, uso em
células animais e vegetais.

• Air lift: – Promove movimentação cíclica do fluido usando um cilindro central em cuja base é inserido o ar de
forma mais eficiente. » Aumentar a mistura axial no reator; » Reduzir a coalescência das bolhas que circulam
numa mesma direção (igual a do líquido); » Equalizar as forças de cisalhamento (é distribuída uniformemente
pelo reator).

Reatores “plug-flow” • Meio e inóculo são misturados a partir da base do reator e a cultura flui, idealmente, em
velocidade constante, sem ocorrer mistura longitudinal; • O fluxo é contínuo e o tempo dentro do reator é
curto, por isso é utilizado para reações rápidas.

STR – Maior consumo de energia; – Maior nível de espuma; – Nem sempre é compatível com alguns tipos de
células (animais e vegetais).
“Air-lift” – Extrema simplicidade; – Baixo investimento; – Maior facilidade para ampliação da escala; – Menor
consumo de energia; – Adaptação mais fácil ao cultivo de células sensíveis ao cisalhamento;
Reatores de Células Imobilizadas em Suporte • Estrutura física de confinamento que obriga as células a
permanecerem em uma região particular de um biorreator; • Vantagens: • Possibilidade de utilização de altas
concentrações celulares no volume reacional, implicando em maiores velocidades de processamento; •
Operação de sistemas contínuos com velocidade de alimentação acima da velocidade específica máxima de
crescimento da célula (não imobilizada); • Eliminação de problemas com reciclo externo de células
(sedimentadores, filtros, centrífugas); • Provável obtenção de maiores fatores de conversão de substrato ao
produto desejado; • Possibilidade de utilização de projetos de biorreatores mais adequados à cinética do
sistema biológico utilizado;
• Maior proteção ao sistema biológico em relação ao estresse ambiental, ocasionado por elevadas
concentrações de substratos, pH e cisalhamento. • Permite a utilização de biorreatores de configurações
bastante diferenciadas. • A maior parte dos biorreatores estudados para sistemas de células imobilizadas
consistem-se de colunas operadas continuamente, contendo leito fixo ou fluidizado das partículas com as
células imobilizadas.
• Características do suporte: • Não ser tóxico para as células; • Ter alta capacidade de retenção; • Ser
resistente ao ataque químico e microbiano; • Ter pouca sensibilidade às possíveis solicitações mecânicas
(compressão por peso, tensões de cisalhamento ou pressões internas ou externas de gases); • Alta
difusividade de substratos e de produtos.
Fermentadores - Descontínuos • Substrato e inóculo são dispostos no fermentador nas condições de
processamento preestabelecidas; • Durante o processo não há adição de substrato ou microrganismo; No
entanto, podem ser adicionados: – Oxigênio (processos aeróbios); – Antiespumante; – Ácido ou base (corrigir
pH);
Sem recirculação de células:
Vantagens: • Fácil operação; • Menor risco de contaminação; • Construção e instrumentação simples e barata;
• Processo adequado para curtos períodos de tempo; • Versatilidade de usos. Desvantagens: • Esgotamento
do meio de cultivo; • Acúmulo de compostos tóxicos ou degradação do produto; • Menor produtividade
volumétrica; • Preparo do reator entre uma batelada e outra reduz tempo útil e aumenta custos.
Com recirculação de células: • Há o reaproveitamento como inóculo, do micro-organismo da batelada anterior;
• Tendência de aumento no número de contaminantes a cada nova batelada; • Utilização de procedimentos
para eliminá-los.
Descontínuo Alimentado • Um ou mais nutrientes continuamente adicionados; – A alimentação do substrato
pode ocorrer continuamente (uma etapa) ou em pulsos (várias etapas). • Os produtos permanecem até o final
da fermentação; • O volume do reator é variável; • Desvantagens: – Maior risco de contaminação; – Maior
necessidade de controle do processo (adição nutrientes).
Semicontínuo Definição: • O processo chama-se sernicontínuo, porque são intermitentes tanto o fluxo de
entrada do meio no reator quanto o de saída de material ferrnentado. • Pode haver ou não a recirculação das
células removidas neste processo
Sem Recirculação de Células: Uma vez colocados no reator o meio e o inóculo... 1) Aguarda-se o término da
fermentação; 2) Retira-se parte do meio fermentado, mantendo-se, no reator o restante de mosto fermentado;
3) Adiciona-se ao reator um volume de meio de fermentação igual ao volume de meio fermentado retirado
anteriormente.
Com Recirculação de Células: Uma vez colocados no reator o meio e o inóculo... 1) Aguarda-se o término da
fermentação; 2) Retira-se parte do meio fermentado, mantendo-se, no reator o restante de mosto fermentado.
O meio retirado do fermentador pode ser centrifugado e as células reaproveitadas; 3) Adiciona-se ao reator
um volume de meio de fermentação mais as células reaproveitadas, em igual ao volume de meio fermentado
retirado anteriormente.
Vantagens: • Possibilidade de operar o biorreator por longos períodos de tempo (meses) sem que seja
necessário preparar um novo inóculo; • Possibilidade de, uma vez conhecidas as melhores condições de
operação, conseguir produtividade significativamente maior do que a obtida em processo descontínuo.
Contínuo • O meio é adicionado de forma contínua e os produtos de fermentação também são continuamente
removidos; • Volume constante → estado estacionário → X, S, P = constante ao longo do tempo; • Pode
operar em longos períodos no E.E. • O produto é produzido continuamente;
Objetivo da cultura contínua é controlar o crescimento celular em um nível de produtividade ótima; • Sistema
aberto; • Estado de Equilíbrio: Concentração de células e nutrientes são constante;
Processos contínuos versus processos descontínuos
Vantagens: – Aumento da produtividade do processo, em virtude de uma redução dos tempos mortos ou não-
produtivos; – Obtenção de caldo fermentado Uniforme → facilita o projeto das operações unitárias de
recuperação e purificação do produto de interesse (downstream); – Manutenção das células em um mesmo
estado fisiológico (devido ao EE);
Desvantagens: – Maior investimento inicial na planta; – Possibilidade de ocorrência de mutação genética
espontânea, → seleção de mutantes menos produtivos; – Maior possibilidade de ocorrência de contaminação,
por se tratar de um sistema essencialmente aberto, necessitando de manutenção de condições de assepsia
nos sistemas de alimentação e retirada de meio;
Vantagens: – Possibilidade de associação com outras operações contínuas na linha de produção; – Maior
facilidade no emprego de controles avançados; – Menor necessidade de mão de obra. Desvantagens: –
Dificuldade de manutenção de homogeneidade no reator a baixas vazões; – Dificuldade de operação em EE
em determinadas situações (formação de espuma, crescimento do microrganismo nas paredes de reator ou
nos sistemas de entrada e saída de líquido).
• Classificação; • Escala; • Formas de Condução: – Batelada; – Batelada alimentada; – Semi-contínuo; –
Contínuo; • Fase Aquosa
Meio Não-aquoso Definição: "processos que referem-se a cultura de microrganismos sobre ou dentro de
partículas em matriz sólida (substrato ou material inerte), onde o conteúdo de líquido (substrato ou meio
umidificante) ligado a ela está a um nível de atividade de água que, por um lado, assegure o crescimento e
metabolismo das células e, por outro, não exceda à máxima capacidade de ligação da água com a matriz
sólida."
Características do meio: • O termo remete à ideia de dois tipos de materiais insolúveis em água, sobre o qual
os MO irão crescer: • suporte sólido atua como fonte de nutrientes; • os nutrientes são solúveis em água, os
MO estão aderidos a um suporte (inerte ou não), que irá absorver o meio de cultura líquido; • Forma natural:
bagaço da cana, sabugo de milho, produtos ou resíduos agroindustriais de baixo ou nenhum valor comercial;
• Forma sintética: argila;
• Alto grau de acessibilidade do microrganismo a todo o meio: • Tamanho da partícula X tamanho do poro: ↓
tamanho ↑ área superficial → ↑ conversão Porosidade: tamanho de poro grande o suficiente para garantir
fluxo de massa e energia → O 2, CO 2, calor; • Altura do substrato e camada do meio: definida a partir do
equilíbrio entre conversão e fluxo de massa e energia; • Porosidade: capacidade de absorção de água →
facilita a interação entre o meio e os MO;
• Pré-tratamento do substrato para se adequar as condições necessárias ao crescimento e produção de
metabólitos pelos MO. • esmagamento, quebra, moagem e peneiramento, visando adequar o meio à
granulometria mais adequada do processo; • suplementação de nutrientes e correção de pH, para suprir a
falta de algum nutriente ou adequar às melhores condições de crescimento microbiano; • hidrólise ácida ou
alcalina de material celulósico, visando facilitar a atuação enzimática; • embebição, para regular o teor de
umidade inicial do processo; • vaporização ou aquecimento, visando a gelatinização ou inchamento do
substrato; • adição de agente sequestrante; com o objetivo de retirar íons metálicos do meio, que podem
diminuir o rendimento do processo; • processo de esterilização, que visa a diminuição ou eliminação de
possíveis contaminações.
Meios de cultivo empregados em FES: • Celulose, hemicelulose e lignina → produção de compostos
orgânicos; • Farelo e palha de trigo, farinha e farelo de soja, palha de arroz, bagaço de cana → Produção de
enzimas; • Bagaço da maçã, de uva, bagaço e melaço de cana-de-açúcar →produção de álcool; • Bagaço de
cana, água de maceração de milho, farelo de milho → produção de antibióticos; • Soja →miso, shoyo.
Controle dos Processos: • Umidade • Película de água sobre a superfície da partícula → difusão de
nutrientes; • Atividade de água (AW ) • água não ligada ao substrato e disponível ao microrganismo,
temperatura e pH, aeração
Reatores para fermentação em meio não-aquoso: • Tanques circulares: • Esteira Rolante: • Tubular horizontal:
• Tubular vertical; • Sacos Plásticos ;
A Importância da Transferência de Oxigênio: • A grande maioria dos processos biotecnológicos é do tipo
aeróbio; • Tais processos exigem um adequado dimensionamento do sistema de transferência de oxigênio
para o meio;
Aeração superficial: • fermentadores de bandejas ou lagoas de oxidação para o tratamento biológico de
resíduos → difusão do O 2 presente no ar atmosférico para o líquido;
Aeração em profundidade: borbulhamento de ar • H>>L para que as bolhas de ar permaneçam mais tempo
em contato com o líquido;
• Utilização de chicanas para aumentar regime turbulento; • Utilização de duto central para impulsionar a
formação de vórtice e ampliar a transferência de oxigênio;
Aerados: • Objetivos de operações de mistura podem ser: • Tornar ou manter homogênea uma solução; •
Manter sólidos em suspensão; • Tornar eficiente o transporte de calor e massa;
Esterilização e Desinfecção Higiene, limpeza e sanitização: • Higiene: preservação da saúde e prevenção das
doenças; • Limpeza: remoção de sujidades; • Sanitização: manutenção das condições de higiene;
Contaminações da fermentação: • Desvio de uso do substrato → queda de rendimento fermentativo; •
Produção de substâncias indesejáveis → queda de produtividade • Modificação das condições de
fermentação; • Decomposição do produto de fermentação;
Produtos utilizados na limpeza e sanitização de equipamentos: • Água: • Ação mecânica: limpa a superfície do
equipamento, remove partículas em suspensão ou solução; • Ação química: solubiliza detergentes e
sanitizadores; • Detergentes: • Facilitam a remoção de sujidades; • Molhagem: redução da tensão superficial
da água; • Penetração: em poros, orifícios e fissuras da sujidade; • Saponificação de gordura: formação de
sabão; • Emulsificação de gorduras: formação de colóides solúveis; • Peptização de proteínas: formação de
colóides solúveis;
• Detergentes: Tipos de detergentes: • Alcalinos: removem proteínas, boa capacidade emulsificante. Ex.:
Soda cáustica, soda, bórax; • Ácidos Minerais: remoção de crostas endurecidas (corrosivos e perigosos). Ex.
ácido clorídrico, ácido nítrico, ácido fosfórico; • Ácidos Orgânicos: menos corrosivos e perigosos. Ex. ácido
cítrico, ácido lático, ácido acético; • Surfactantes: removem gorduras, produtos umectantes e de penetração.
Ex. sulfonatos (aniônicos), amônio quaternário (catiônico), não iônicos.
• Sanitizantes: • Antisépticos: previne/interrompe crescimento microbiano; • Bactericidas: eliminam bactérias; •
Bacteriostáticos: inibem o crescimento de bactérias; • Fungicidas: eliminam fungos; • Fungiostáticos: inibem o
crescimento de fungos; • Desinfetantes: eliminam germes sobre superfícies; • Germicida: elimina flora banal e
patogênica; • Cloro: bactericida, efetivo contra esporos, fungos e bacteriófagos; • Iodo: bactericida; • Amônio
quaternário: bactericida; • Compostos fenólicos: fungicida; • ácidos (propiônico e benzóico): fungos, leveduras
e bactérias;
Operação de limpeza e sanitização: • Pré-lavagem: • Material: água (fria, morna, quente, vapor); • Função:
dissolver resíduos de superfície • Técnica: imersão em água/pressão jato d’água ou vapor (CIP); • Aplicação
do detergente: • Material: água e detergente; • Função: remoção de sujidades; • Técnica: CIP; • Aplicação do
sanitizante: • Material: água e sanitizante; • Função: eliminação de MO na superfície do equipamento; •
Técnica: CIP; • Enxágue ou lavagem final: Material: água; Função: eliminação resíduos de detergente e
sanitizante; Técnica: CIP;
Esterilização: • Esterilização é o processo físico ou químico que destrói ou inativa todas as formas de vida
presentes em um determinado material, especialmente microrganismos; • Uma substância ou material não
pode ser parcialmente estéril. Um material estéril é totalmente isento de qualquer organismo ativo;
Podem ser por métodos físico ou químicos: • Calor úmido: vapor sob pressão (autoclave) → desnaturação
das proteínas; • Calor seco: oxidação dos constituintes e coagulação de proteínas; • Irradiação por luz
ultravioleta: ácidos nucleicos asbosrverm a radiação (220 a 300 nm); • Radiação Ionizante: do tipo α, β, γ,
raios x, prótons neutrons e eletrons → quebram as fitas de DNA; • Oxido de etileno (EtO): éter cíclico que
mata as células; • Glutaraldeído: reage com grupos aminas das proteínas → interfere no transporte de aa.
Esterilização de Ar: • Evitar contaminação do fermentador por MO provenientes do ar ambiente utilizado para
aeração do meio; • Existem diversos métodos, no entanto a filtração é o mais eficiente; • Esterilização por ar
seco: elevadas temperaturas e baixa eficiência; • Esterilização por Radiações: lâmpadas UV, necessitam
longos tempos de exposição → custo alto; • Esterilização por Filtração: baixo custo, confiabilidade, elevada
vazão; uso de membranas cerâmicas e poliméricas • Filtro de lã de vidro; • Filtro de membranas; • Filtro HEPA
(high efficiency particulate air): placas de acetato de celulose ou lã de vidro em camadas (99,96 % de
remoção);

• controle
– Fatores externos : – pH – Temperatura – Oxigênio – Produtos – Inibidores/ativadores
– Conversão

Monitoramento de parâmetros, físicos, químicos e Biológicos : Parâmetros Físicos Tempo Temperatura

Atividade de água Pressão Vazão de líquidos Vazão de gases Velocidade de agitação Parâmetros Químicos
pH e acidez Sólidos solúveis (°Brix) O2 dissolvido O2 na fase gasosa CO2 na fase gasosa Parâmetros
Biológicos crescimento da biomassa Medida de contaminação
Recuperação: • Consiste nos processos de separação, purificação e concentração; Localização dos Produtos
de Fermentação: • Intracelular: ácidos nucleicos, vitaminas, enzimas, antibióticos; • Extracelular: AA, ácidos
orgânicos, enzimas, alcoóis, antibióticos; • Intra e extracelular: antibióticos e vitaminas;
Operações Unitárias Usadas na recuperação de Produtos: • Floculação → flotação e sedimentação • Filtração
profunda ou convencional → separação de micélios de • fungos; • Filtração absoluta em membrana ou
tangencial • Microfiltração → 0,1 - 10 mm → bactérias e leveduras • Ultrafiltração → 0,001 - 0,1 mm → PM >
1000 → macromolécula • Osmose reversa
• Centrifugação • Sistema líquido / sólido → separação de células • Sistema líquido / líquido → separação de
solvente • Extração → solventes → alguns antibióticos • Destilação → ponto de ebulição → etanol •
Cristalização • Desidratação • Uso do calor → produto sem vida → levedura seca • Liofilização → produto vivo
→ inóculos
— Após a fermentação:
• Processos de separação
• Tratamento dos resíduos