FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS

1Diego Alejandro Fonseca1, Johan Nicolás Quintero2, Daniela calderon3

(Estudiantes cuarto Semestre De Biología, Facultad De Ciencias Básicas,
Universidad De La Amazonia)
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RESUMEN

La práctica se realizó en el laboratorio de Química de la Universidad de la Amazonia

donde fue posible observar el efecto de la temperatura y el pH en la digestión salival
de almidón y se determinó la actividad de amilasa por iones metálicos.

Palabras Claves: Temperatura, pH, Saliva, Almidón.

1. INTRODUCCIÓN

Las enzimas son biomoléculas especializadas en la catálisis de las reacciones

químicas que tienen lugar en la célula. Son muy eficaces como catalizadores ya que
son capaces de aumentar la velocidad de las reacciones químicas mucho más que
cualquier catalizador artificial conocido, y además son altamente específicos ya que
cada uno de ellos induce la transformación de un sólo tipo de sustancia y no de
otras que se puedan encontrar en el medio de reacción.( Kimball, J :1986)

Por lo tanto las reacciones químicas que se dan en los seres vivos no podrían tener
lugar sin la presencia de las enzimas. Estas macromoléculas, que generalmente
son proteínas, catalizan las reacciones bioquímicas, permitiendo que los sustratos
se conviertan en los productos que necesita la célula. Como todo catalizador, las
enzimas no se consumen en las reacciones que catalizan, pero a diferencia de otros
catalizadores de naturaleza inorgánica, las reacciones que catalizan son muy
específicas: sólo interaccionan con determinados sustratos, y sólo facilitan el curso
de determinadas reacciones.

Un enzima que podemos encontrar en todos los seres vivos es la catalasa,

necesaria para descomponer el peróxido de hidrógeno, un compuesto tóxico, que
se produce durante el metabolismo celular (Rodrigo leviman, 2012)
En esta práctica tuvo como objetivo Determinar la inhibición de la actividad de la
amilasa por iones metálicos y a la vez Observar el efecto de la temperatura y el pH
en la digestión salival de almidón.

2. METODOLOGÍA

2.2 Tabla 1. Elementos para el desarrollo de la práctica

MATERIALES REACTIVOS
2 Vasos precipitados de 250 ml Reactivo lugar
2 Vasos precipitados de 150 ml Hielo
1 Termómetro Solución de cloruro de mercurio
1 Baño María Solución de nitrato de plomo II
1 Escobilla para tubo de ensayo Solución de sulfato de cobre
3 Vidrios de reloj
1 Pipeta de 5 ml
1 Agitador de vidrio
4 Tubos de ensayo
1 Gradilla para tubos de ensayo
1 Erlenmeyer de 50 ml

2.3 PROCEDIMIENTO

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA DIGESTIÓN SALIVAL

DEL ALMIDÓN: Se tomaron 15 ml de solución de almidón al 1%,
dividiendo esta cantidad en tres tubos de ensayos limpios, seguidamente
se colocó un tubo en baño de agua maría a 70°C, otro en baño de agua
maría a 37°C y un tercero en baño con hielo, mientras tomaban la
temperatura deseada se preparaban soluciones diluidas de saliva con 25
ml de agua destilada y 5 ml de saliva, se transferían porciones de 5 ml a
tubos de ensayos y se colocaba uno en baño de agua a 70°C, otro en
baño de agua a 37°C y el ultimo en baño con hielo, cuando habían
adquirido la temperatura deseada se vertía la solución de almidón a la
misma temperatura, se mezclaba y se le añadían 3 gotas del reactivo
lugar para realizar la prueba del yodo.
 Efecto del pH en la digestión salival de almidón: Se transfería 1 ml de
saliva a un matraz con 25 ml de agua destilada mezclando su contenido,
seguidamente en 3 tubos de ensayo se dividían porciones de 5 ml de
soluciones amortiguadoras de pH, 5, 7 y 9, añadiéndole 1 ml de
soluciones saliva y dejándolos en un baño de agua de 37°C, se les agrego
tres gotas de reactivo lugol para realizar la prueba del yodo para almidón
hasta que el color azul oscuro desapareciera.

Inhibición de actividad amilasa por iones metálicos (tóxicos): Se

transferían porciones de 5 ml de solución de saliva a tres tubos de ensayo,
a cada uno se le agregaron dos gotas de solución al 1% de cloruro de
mercurio II, nitrato de plomo II y sulfato de cobre, colocando los tubos en
baño de agua a 37°C , tomando 15 ml de almidón al 1%, dividirlo en los
tres tubos y dejarlo en el baño de agua, al alcanzar la temperatura
deseada se vertía el contenido de cada sal a ensayar con la solución de
almidón y se hizo la prueba con tres gotas del reactivo lugol.

3. RESULTADOS

3.1 EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA DIGESTIÓN SALIVAL

DEL ALMIDÓN:

Temperatura 37°C Temperatura 70°C Hielo

Coloración amarillosa. Coloración azul Coloración azul
Positivo prueba de oscuro. oscuro.
yodo Negativo prueba de Negativo prueba de
yodo yodo

3.2 Efecto del pH en la digestión salival de almidón

 pH 5 pH 7 pH 9
Tres gotas de lugol y Tres gotas de lugol y Tres gotas de lugol y
dio una coloración dio una coloración dio una coloración azul
café oscuro lo que verdosa lo cual indica oscuro lo cual indica
indica positivo para positivo para prueba negativo para prueba
una prueba de yodo de yodo de yodo

3.3 Inhibición de actividad amilasa por iones metálicos (tóxicos)

Cloruro de mercurio II Nitrato de plomo II Sulfato de Cobre

ANÁLISIS
Efecto de la temperatura en la acción enzimática.
En el experimento del efecto de la temperatura sobre la acción de la amilasa,
se mide la actividad enzimática a diferentes temperaturas, en las cuales se
mostraron reacciones diferentes.
A temperaturas de 70°C y 3°C, la prueba de yodo fue negativa(Azul oscuro),es
decir que el almidón no sufrió ningún cambio, ya que a estas temperaturas las
enzimas, y en particular las amilasas disminuyen su acción y se inhiben
totalmente, debido a la desnaturalización de la molécula proteica, de la cual
están conformadas las enzimas.
La desnaturalización de una proteínas no es más que la pérdida de las
estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando
la cadena poli peptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna
estructura tridimensional fija (Moreno, 2014)
A 37°C, la prueba de yodo fue positiva (Amarillo), hubo cambios en la
estructura del almidonada que la temperatura es cercana a la temperatura
corporal, en la cual las enzimas presentan su mejor funcionamiento, es decir,
se encuentran en un rango óptimo de temperaturas.
Cuando se desmulle demasiado la temperatura, los choques entre las
moléculas disminuyen también, por lo que la actividad enzimática baja hasta
el punto en el que no se puede ver en el experimento. Por el contrario, al
aumentar la temperatura de incubación a 70°-90° C, los choques entre las
moléculas se van a acrecentar de tal forma que la enzima se va a
desnaturalizar. Es por ello que se presume que no se observaron cambios en
el tubo.
Efecto de pH en la acción enzimática.
A un pH 5 y 7, la prueba de yodo fue positiva, es decir que hubo cambios en
el almidónalo que indica que este pH es óptimo para que la enzimas realicen
la rompimiento de la molécula.
En el caso del pH 9, dio negativo, ya que la reacción básica provoco la
desnaturalización de la enzima, impidiendo su acción sobre el sustrato, de
esta manera no se formó productos (Azúcar reductores).
Por otro lado los iones H+ y OH- del agua provocan efectos parecidos, pero
además de afectar a la envoltura acuosa de las proteínas también afectan a la
carga eléctrica de los grupos ácidos y básicos de las cadenas laterales de los
aminoácidos. Esta alteración de la carga superficial de las proteínas elimina
las interacciones electrostáticas que estabilizan la estructura terciaria y a
menudo provoca su precipitación. La solubilidad de una proteína es mínima en
su punto isoeléctrico, ya que su carga neta es cero y desaparece cualquier
fuerza de repulsión electrostática que pudiera dificultar la formación de
agregados (Figueroa; 2016)
Inhibición de la actividad enzimática por Iones metálicos.
La inhibición de la actividad enzimática por iones metálicos como el HgCl2, Pb
(NO3)2, y CuSO4, se da frecuentemente como ejemplo de inhibición no
competitiva reversible, en donde la molécula del sustrato no puede unirse a la
enzima.

Imagen 1.Desnaturalizacion de proteína.

4. CONCLUSIONES
-En esta práctica se permitió Observar el efecto de la temperatura y el pH
en la digestión salival de almidón y ala vez Determinar la inhibición de la
actividad de la amilasa por iones metálicos.

-La temperatura es un factor determinante en las reacciones enzimáticas

porque acelera o retarda la acción de las enzimas.

-Se pudo visualizar en el proceso de la digestión salival del almidon que

a 37°C dio una coloración amarillosa dando haci positiva para prueba de
yodo.

5. BIBLIOGRAFÍA

-Figueroa (2016) Efectos del pH en la acción enzimática.Biología

Básica.Recuperado el 14 de ábril de 2017
de:http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/velocidad%20reaccion
%20enzimatica4.html.

-Kimball, J (1986). Biología. Editorial: Addison - Wesley Iberoamericana,

S. A. Cuarta Edición
-Moreno, J (2014).Desnaturalización de proteínas. Bioquímica para la
vida. Recuperado el 14 de ábril de 2017
de:http://www.ehu.eus/biomoleculas/proteinas/desnaturalizacion.htm

-Rodrigo, l (2012).actividad enzimática. Recuperado el 14 de abril de 2018

De:https://www.academia.edu/13037480/Informe_Cientifico_Actividad
Enzimatica