LABORATORIO DE BIOQUIMICA

YENNI CAROLINA SALAZAR GOMEZ

CC 1140821769

TUTOR

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD

ECISALUD
MAYO 8 DE 2018
 Introducción

La Bioquímica constituye un pilar fundamental de la biotecnología, y se ha

consolidado como una disciplina esencial para abordar los grandes problemas y
enfermedades actuales y del futuro, tales como el cambio climático, la escasez de
recursos agroalimentarios ante el aumento de población mundial, el agotamiento de
las reservas de combustible fósil, la aparición de nuevas formas de alergias, el
aumento de cáncer, las enfermedades genéticas, la obesidad.

La bioquímica es una ciencia experimental y por ello recurrirá al uso de numerosas

técnicas instrumentales propias y de otros campos, pero la base de su desarrollo
parte del hecho de que lo que ocurre en vivo a nivel subcelular se mantiene o
conserva tras el fraccionamiento subcelular, y a partir de ahí, podemos estudiarlo y
extraer conclusiones.

En los contenidos de las guías para la realización de los laboratorios se revisan

conceptos y procedimientos de importancia para el trabajo en el laboratorio. Se
deberá previamente haber leído, entendido, comprendido todas las guías y los
procedimientos a realizar. Las actividades de laboratorio constituyen una parte
importante del aprendizaje de la bioquímica y complementan las actividades de la
materia impartidas en la clase.
 Objetivos

 Leer las guías del laboratorio para entender los procedimientos a realizar.
 Cumplir con las normas de bioseguridad dentro del laboratorio.
 Desarrollar los procedimientos referidos en las guías de laboratorio de
Bioquímica.
 Practica 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO

En el laboratorio se realiza, para el caso del curso de bioquímica, prácticas

experimentales: en donde se aprenden a manipular equipos, reactivos químicos,
conformándose pequeños grupos de trabajo para el desarrollo de la actividad. Para
llevar a cabo las prácticas de laboratorio se requiere que el estudiante tenga un
conocimiento teórico básico sobre el tema y lea detenidamente la guía de
laboratorio.

NORMAS PERSONALES

 La vestimenta deberá ser apropiada y cómoda, que facilite la movilidad para

la actividad que se desarrolla en los laboratorios. Debe cubrir áreas
considerables de la piel con pantalones (jeans), blusas con mangas, la bata
y guantes.
 Use calzado cerrado que cubra completamente el pie. El alumno debe portar
en todo momento Bata blanca de Laboratorio.
 Nunca ingerir alimentos, beber o masticar chicle dentro del laboratorio,
igualmente evitar tocar partes del rostro y llevar las manos a la boca o
introducir lapiceros u otros en boca nariz y oídos.
 Asistir puntualmente en la fecha y hora programada, igualmente al entrar a
las instalaciones del laboratorio.

NORMAS PARA LA UTILIZACION DE PRODUCTOS QUIMICOS

 Cuando se tiene que hacer una reacción química se debe escoger el

recipiente adecuado a la cantidad que se va a usar. Los ensayos se hacen
en tubos de ensayo o en placas de gotas, nunca en vasos, matraces, etc.
 No usar recipientes alimenticios para contener productos químicos e
igualmente cualquier recipiente que se utilice para la recepción productos es
necesario rotular.
 No utilice vidrio agrietado, el material de vidrio en mal estado aumenta el
riesgo de accidente. No deben utilizarse para pipetear jeringuillas provistas
de aguja hipodérmica o aspirar con la boca pipetas de vidrio.
 No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos
utilizados.
NORMAS PARA LA UTILIZACION DE INSTRUMENTACION

 Se debe mantener perfectamente limpio y seco el lugar donde se encuentre

situado cualquier instrumento con contactos eléctricos.
 Debe revisarse el material de vidrio para comprobar posibles fisuras,
especialmente antes de su uso a vacío o presión.

NORMAS DE EMERGENCIA

 En caso de tener que evacuar el laboratorio, cerrar la llave del gas y salir de
forma ordenada siguiendo en todo momento las instrucciones que haya
impartido el Profesor. Localizar al iniciar la sesión de prácticas los diferentes
equipos de emergencia en el correspondiente laboratorio: Duchas y lavaojos,
Botiquín, Absorbente para derrames, Alarma de emergencia, Salida de
emergencia y Recipiente para el vidrio roto.
 Al finalizar la práctica, limpia el área de trabajo y entrega los materiales
utilizados limpios y en buenas condiciones. Por ultimo esperar las
indicaciones para retirarse de las instalaciones del laboratorio.

Practica 2: PROPIEDADES BIOQUÍMICAS DE LOS AMINOÁCIDOS.

Los aminoácidos se denominan así por tener un grupo amino (-NH2) y un grupo
carboxilo (-COOH).

Es posible agrupar los aminoácidos en clases principales basadas en las

propiedades de sus grupos R, en especial de su polaridad, o tendencia a
interaccionar como el agua a pH biológico (cerca del pH 7.0). La polaridad de los
grupos R varía enormemente desde totalmente apolar o hidrofobico (insoluble en
agua) hasta altamente polar o hidrofilico (soluble en agua).

Materiales

Tubos de ensayo Pinza para tubos

Gradilla Pipetas Pauster con bulbo

Beaker o vasos de precipitados Cámara de flujo laminas
de 500 mL
Pipetas de vidrio
Estufa
Pera de goma para pipetas

Reactivos

Reactivo ninhidrina
α Naftol
NaOH
Hipoclorito de sodio
Sulfato cúprico (CuSO)
Reactivo de Hopkins- Cole
Ácido acetico(CH3COOH)
Ácido sulfúrico (H2SO)
Cloruro de sodio (NaCl)
Reactivo de Millon
Albumina
Aminoacidos: Glicina, tirosina,
Ácido nítrico (HNO3) triptofano, fenilalanina y arginina

Hidroxido de sodio (NaOH) Fenol

Acetato de Plomo Albumina de huevo

REACCION CON LA NINHIDRINA

El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma complejos coloreados con la

ninhidrina: violeta azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo grupo amino es
primario, amarillo para la prolina e hidroxiprolina y café para la asparagina que tiene
un grupo amido en la cadena lateral. Esta reaccion tambien identifica los grupos
alfa-amino libres presentes en péptidos y proteínas. Precauciones la ninhidrina es
toxica.

Esta reacción también identifica los grupos alfa-amino libres presentes en péptidos
y proteínas. Precauciones la ninhidrina es toxica.
 TUBOS CANTIDAD REACTIVOS

1 CON 2 ML DE GLICINA NINHIDRINA

2 CON 2 ML DE ALBUMINA NINHIDRINA

3 CON 2 ML DE GELATINA NINHIDRINA

4 CON 2 ML DE AGUA NINHIDRINA

Procedimiento:

Agregue a cada tubo de ensayo 2 ml de la solución correspondiente.

Agregar 5 gotas de solución de ninhidrina a cada tubo.

Poner los tubos de ensayo en un baño de agua por unos 5 minutos hasta dejar
hervir.

Observación:

Cuando se incorporan al baño maría van cambiando de tonalidad cada uno de los
tubos como se observa en la imagen [foto]

La glicina, la albumina, la gelatina fue la que más se oscureció, morado azulado

como se puede observar en la imagen [foto].

Conclusiones:

El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma complejos coloreados con la

ninhidrina: violeta azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo grupo amino es
primario, amarillo para la prolina e hidroxiprolina y café para la asparagina que tiene
un grupo amido en la cadena lateral. Esta reacción también identifica los grupos
alfa-amino libres presentes en péptidos y proteínas.

REACCION DE BIURET

Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya
que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse
los aminoácidos. El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa. El Cu, en
un medio fuertemente alcalino, se une con los enlaces peptídicos formando un
complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la
concentración de proteínas.

TUBOS CANTIDAD REACTIVOS

NaOH2.5N ml
1 CON 2ML DE GLICINA +
Sulfato cúprico 3 gotas
NaOH2.5N ML
2 CON 2 ML DE ALBUMINA +
Sulfato cúprico
NaOH2.5N ml
3 CON 2 ML DE GELATINA +
Sulfato cúprico 3 gotas
NaOH2.5N ml
4 CON 2 ML DE LECHE +
Sulfato cúprico 3 gotas

Procedimiento:

Agregue a cada tubo de ensayo agregue 1 ml de NaOH 2,5N de la solución

correspondiente.

Agregue 3 gotas de solución de sulfato cúprico al 1% a cada tubo de ensayo.

Agite cada tubo de ensayo.

Observación:

Se observa como luego del agitarlos se transforma a colores pasteles, la glicina de

color azulado claro, la leche, gelatina y la albumina de color violeta. [foto].

Análisis:

Debido a dicha reacción fue que observamos que al agregar el reactivo de sulfato
cúprico más solución de proteína (leche, gelatina o albumina) precipito una
coloración violeta. Quedando en el fondo del tubo una tonalidad azulado cielo
reacción positiva. Al agregar el reactivo de sulfato cúprico más la solución de glicina
la reacción fue negativa, ya que la glicina no es una proteína.
Conclusiones:

La reacción con el reactivo de Biuret observamos coloración de diferentes

tonalidades.

La reacción de Biuret se basa, el mismo que es un sulfato de cobre en una base

fuerte tienden a reaccionar con los enlaces del péptido, para finalmente cambiar de
color cuando entran en contacto con otra sustancia.

REACCION XANTOPROTEICA.

Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos reaccionan con ácido

nítrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo o anaranjado por lo
cual esta reacción permite reconocer la presencia de Tirosina, Fenilalanina y
Triptófano.

TUBOS CANTIDAD REACTIVOS

1 CON 2ML DE GLICINA HNO3 1 ml

2 CON 2 ML DE ALBUMINA HNO3 1 ml

3 CON 2 ML DE GELATINA HNO3 1 ml

4 CON 2 ML DE LECHE HNO3 1 ml

Procedimiento:

Agregue a cada tubo de ensayo 2 ml de la solución correspondiente.

Agregar 1 ml de solución de ácido nítrico a cada tubo.

Poner los tubos de ensayo en un baño de agua por unos 2 minutos hasta dejar
hervir.
 TUBOS CANTIDAD REACTIVOS

1 CON 2ML DE GLICINA NaOH 3 gotas

2 CON 2 ML DE ALBUMINA NaOH 3 gotas

3 CON 2 ML DE GELATINA NaOH 3 gotas

4 CON 2 ML DE LECHE NaOH 3 gotas

Procedimiento:

Agregue a cada tubo de ensayo 2 ml de la solución correspondiente.

Agregar 1 ml de solución de hidróxido de sodio a cada tubo.

Poner los tubos de ensayo en un baño de agua por unos 2 minutos hasta dejar
hervir.

Observación:

Cuando se incorporan al baño maría van cambiando de tonalidad cada uno de los
tubos como se observa en la imagen [foto]

Análisis:

Debido a dicha reacción fue que observamos que al agregar el reactivo de ácido
nítrico más solución de (leche o albumina) precipito una coloración. Quedando en
los tubos una tonalidad amarillo reacción positiva.

Conclusiones:

Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos reaccionan con ácido

nítrico concentrado formando nitro derivados de color amarillo o anaranjado por lo
cual esta reaccion permite reconocer la presencia de Tirosina, Fenilalanina y
Triptófano.
REACCION DE MILLON

El anillo fenólico tiene un comportamiento característico frente a las sales de

Mercurio a pH acido, formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenólico de
la tirosina y las proteínas que la contienen.

TUBOS CANTIDAD REACTIVOS

1 CON 2ML DE GLICINA Reactivo de Millón

2 CON 2 ML DE ALBUMINA Reactivo de Millón

3 CON 2 ML DE GELATINA Reactivo de Millón

4 CON 2 ML DE LECHE Reactivo de Millón

5 CON 2 ML DE ARGEMINA Reactivo de Millón

Procedimiento:

Agregue a cada tubo de ensayo 2 ml de la solución correspondiente.

Agregar 5 gotas de Reactivo de Millón a cada tubo.

Poner los tubos de ensayo en un baño de agua por unos 2 minutos hasta dejar
hervir.

Observación:

Cuando se incorporan al baño maría van cambiando de tonalidad cada uno de los
tubos como se observa en la imagen [foto]

Análisis:

Debido a dicha reacción fue que observamos que al agregar el reactivo de Reactivo
de Millón más solución de (leche, albumina, gelatina) precipito una coloración.
Quedando en los tubos una tonalidad rojo ladrillo reacción positiva.
Conclusiones:

El anillo fenólico tiene un comportamiento característico frente a las sales

de Mercurio a pH acido, formando complejos color rojo ladrillo con el anillo
fenólico de la tirosina y las proteínas que la contienen.

REACCION DE SAKAGUCHI

El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona con

soluciones de alfa naftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando
complejos coloreados rosados o rojos.

TUBOS CANTIDAD REACTIVOS

1 CON 2 ML DE ALBUMINA NaOH + alfa-naftol

2 CON 2 ML DE GELATINA NaOH + alfa-naftol

3 CON 2 ML DE LECHE NaOH + alfa-naftol

4 CON 2 ML DE ARGEMINA NaOH + alfa-naftol

Procedimiento:

Agregue a cada tubo de ensayo 2 ml de la solución correspondiente.

Agregar 1ml de Reactivo de NaOH + 1ml alfa-naftol.

Poner los tubos de ensayo en un baño de agua por unos 2 minutos hasta dejar
hervir.

Observación:

Cuando se incorporan al baño maría van cambiando de tonalidad cada uno de los
tubos como se observa en la imagen [foto]

Análisis:

Debido a dicha reacción fue que observamos que al agregar el reactivo de NaOH +
alfa-naftol más solución de leche, arginina y albumina precipito una coloración.
Quedando en los tubos una tonalidad amarillo para la leche y rojo para la arginina,
albumina reacción positiva.

Conclusiones:

El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona con

soluciones de alfa naftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando
complejos coloreados rosados o rojos.

Practica 3. BIOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS

Reactivos

NaOH

Acetato de Plomo

Materiales

Tubos de ensayo Pera de goma para pipetas

Gradilla Vidrios reloj grandes

Pinza para tubos Probeta 100 ml

Pipetas Pauster con bulbo Balón aforado de 25 ml

Beaker o vasos de precipitados de 500 Agitador de vidrio

mL
Espectrofotometro
Estufa
Micropipeta
Cámara de flujo laminas
Agitador vortex múltiple para tubos
Pipetas de vidrio

REACCION DE AMINOACIDOS AZUFRADOS

Se pone de manifiesto por la formación de un precipitado negruzco de sulfuro de

plomo. Se basa esta reacción en la separación mediante un álcali, del azufre de los
aminoácidos, el cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el
sulfuro de plomo.

TUBOS CANTIDAD REACTIVOS

Hidróxido sódico +
1 CON 2 ML DE ALBUMINA
acetato de plomo

Hidróxido sódico +
2 CON 2 ML DE GELATINA
acetato de plomo

Hidróxido sódico +
3 CON 2 ML DE LECHE
acetato de plomo

Hidróxido sódico +
4 CON 2 ML DE GLICINA
acetato de plomo

Procedimiento:

Añadir 2 ml de solución de hidróxido sódico al 20%.

Añadir 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%.

Calentar el tubo hasta ebullición.

Observar los cambios.

Observemos los cambios:

El precipitado de color negruzco indica que se ha formado sulfuro de Plomo,

utilizándose el azufre de los aminoácidos.

Conclusiones:

Los Aminoácidos azufrados como Metionina, Cisteína y Cistina se reconocen por la

formación de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro que se
forman cuando reacciona con Acetato de Plomo en medio alcalino.
PREGUNTAS

¿Cuáles son los principales métodos colorimétricos usados en la determinación

de proteínas?

Los principales métodos empleados para la determinación de proteínas totales son los
siguientes:

· Método del Biuret

En solución alcalina el Cu+2 reacciona con el enlace peptídico de las proteínas dando un
color purpúreo que se cuantifica espectrofotométricamente (540nm). Como estándar se
utiliza una solución de albúmina.

Proteína + Cu+2 Complejo Cu-Proteína (púrpura)

Muestra: suero o plasma (heparina o EDTA). Separar el suero del coágulo o el plasma de
las células antes de 3h. Si el paciente está acostado durante la extracción el resultado será
menor.

· Método de Lowry

Dependen de la concentración de tirosina y triptófano de la muestra.

Consiste en dos reacciones:

1. Reacción de Biuret

2. Reacción de Folin: característica de los grupos –OH reductores de los aminoácidos

tirosina y triptófano que, junto con los complejos Cu+2, reducen el reactivo de Folin
generando un color azul.

Está sujeto a muchas interferencias. Se utiliza fundamentalmente en orina.

· Turbidimetría

Medición de la turbidez resultante de la precipitación de proteínas

· Absorción en el ultravioleta

Se mide la absorbancia a 270nm originada fundamentalmente por los

anillos aromáticos de triptófano y tirosina.

· Métodos de unión a colorantes

NOTA: para semicuantificar la concentración de proteínas en orina se utilizan tiras

reactivas.
¿Cuáles la reacción de un alfa-aminoácido y ninhidrina ?

¿Cuáles la reacción con el reactivo de Biuret?

¿Qué proteínas dan positivas con la prueba de Hopkins-cole?

Los derivados indol dan productos de condensación cuando se tratan con 9 aldehídos
aromáticos en presencia de ácido sulfúrico o clorhídrico. El aminoácido triptófano 10
contiene un grupo indol y por eso la reacción es específica para triptófano. El resultado
positivo 11 de esta prueba se puede evidenciar con el anillo indolico que degrada el
aminoácido triptófano a 12 Indol produciendo compuestos de color rojizo-anaranjado. 13
Los resultados obtenidos para esta prueba resultado son correctos ya que en ninguna
muestra a 14 excepción del Triptófano hay presencia de este, todas las demás muestras
están libres en su 15 estructura de este aminoácido (Triptófano) por ende dio un resultado
(rojizo-anaranjado)

¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo?

¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?

Con el ácido sulfúrico se tiene mayor poder de desnaturalización ya que tiene mayor
pérdida de estructura nativa por ser éste un ácido fuerte.

¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?

Si es un líquido, primero se agregan ácidos (como el ácido acético) para desnaturalizar la

proteína. Después, a ese precipitado se le agrega el reactivo de biuret, que cambia a
violeta en presencia de proteínas, y a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena
corta.

¿Qué coloración da la reacción del Biuret? .

Morado – violeta

Práctica 4: IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

Los hidratos de carbono constituyen el grupo de biomoleculas más abundante sobre

la superficie terrestre, representando aproximadamente el 75 % de la materia
orgánica existente. En ocasiones, se denominan también carbohidratos, azucares,
sacáridos o glúcidos. Todos son términos que hacen referencia a su sabor dulce, o
a que poseen la composición Cn (H2O)n. Estas moléculas usualmente contienen
carbono, hidrógeno y oxígeno en una proporción de 1:2:1. Los carbohidratos se
clasifican como monosacáridos, disacáridos o polisacáridos, dependiendo del
tamaño y la complejidad de la molécula. Los monosacáridos se componen de una
sola molécula de azúcar. Cuando dos monosacáridos se unen se produce un
disacárido, y cuando dos o mas se unen se produce un polisacárido.

Reactivos

Reactivo Fehling A

Glucosa

Sacarosa

Almidón

Fructosa

Materiales

Tubos de ensayo Pipetas de vidrio

Gradilla Pera de goma para pipetas

Pinza para tubos Vidrios reloj grandes

Pipetas Pauster con bulbo Probeta 100 ml

Beaker o vasos de precipitados Balon aforado de 25 ml

de 500 mL
Agitador de vidrio

Estufa Balanza analítica

Camara de flujo laminas

PRUEBA DE BENEDICT

Es similar a la reacción de Fehling, el medio básico débil y el estabilizante (citrato

sodico) utilizados hacen que este test sea más sensible y estable.

TUBOS CANTIDAD REACTIVOS

 CON 2 ML DE Reactivo de
1
FRUCTUOSA Benedict

Reactivo de
2 CON 2 ML DE SACAROSA
Benedict

Reactivo de
3 CON 2 ML DE GLUCOSA
Benedict

Reactivo de
4 CON 2 ML DE CEBOLLA
Benedict

CON 2 ML DE Reactivo de
5
GALACOTOSA Benedict

Reactivo de
6 CON 2 ML DE ALMIDON
Benedict

Procedimiento:

Preparar los tubos de ensayo.

Agregue a cada tubo de ensayo 2 ml de reactivo de Benedict.

Lleve los Tubos de ensayo en un baño de agua hirviente por unos 10 minutos.

Conclusión:

La reacción fue positiva para la glucosa, lo que quiere decir que se trata de azucares
reductores y negativa para la sacarosa, lo que indica que es un azúcar no
reductor.Se comprueba de una forma práctica, que la sacarosa, es un disacárido
que en reacciones de oxidación como la reacción de Benedict.

REACCION DE FEHLING

Los azucares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el ion Cu2+ de
color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del azúcar se oxida a
grupo carboxilo.

TUBOS CANTIDAD REACTIVOS

 CON 2 ML DE Reactivo Fehling A
1
FRUCTUOSA Reactivo Fehling B

Reactivo Fehling A
2 CON 2 ML DE SACAROSA
Reactivo Fehling B

Reactivo Fehling A
3 CON 2 ML DE GLUCOSA
Reactivo Fehling B

Reactivo Fehling A
4 CON 2 ML DE CEBOLLA
Reactivo Fehling B

CON 2 ML DE Reactivo Fehling A

5
GALACOTOSA Reactivo Fehling B
Reactivo Fehling A
6 CON 2 ML DE ALMIDON Reactivo Fehling B

Procedimiento:

Preparar los tubos de ensayo.

Añadir 1 ml del reactivo Fehling A y 1 ml del Reactivo Fehling B.

Lleve los tubos de ensayo al agua hirviente por unos 10 minutos.

Conclusiones

Las soluciones de azucares reductores como la glucosa, galactosa y la fructuosa,

arrojaron resultados positivos ya que se reaccionaron y tomaron color rojo ladrillo;
frente a la sacarosa y almidón que no reacciono a la prueba, esto indica que se
trata de un azúcar no reductor.

REACCION DE MOLISCH

La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto por la reacción

de Molisch, que a cierto punto es la reacción universal para cualquier carbohidrato.
Se basa en la acción hidrolizante y deshidratante del ácido sulfúrico sobre los
hidratos de carbono. En dicha reacción el ácido sulfúrico cataliza la hidrolisis de los
enlaces glucosidicos de la muestra y la deshidratación a furfural (en las pentosas)
o hidroximetilfurfural (en las hexosas). Estos furfurales se condensan con el alfa
naftol del reactivo de Molisch (reacción de Molisch) dando un producto coloreado.
 TUBOS CANTIDAD REACTIVOS

CON 2 ML DE Reactivo de Molisch

1
FRUCTUOSA + H2SO4

Reactivo de Molisch
2 CON 2 ML DE SACAROSA
+ H2SO4

Reactivo de Molisch
3 CON 2 ML DE GLUCOSA
+ H2SO4

Reactivo de Molisch
4 CON 2 ML DE CEBOLLA
+ H2SO4

CON 2 ML DE Reactivo de Molisch

5
GALACOTOSA + H2SO4
Reactivo de Molisch
6 CON 2 ML DE ALMIDON + H2SO4

Procedimiento

Preparar los tubos de ensayo.

Agregue dos gotas de reactivo de Molisch

Mezcle bien

Incline el tubo y deposite 1 mL de H2SO4 concentrado deslizándolo lentamente por

la pared del tubo.

No mezcle. Sólo coloque el tubo en posición vertical y observe la formación del anillo
rojo violeta que aparece en la zona de contacto de los dos líquidos.

Conclusiones.

La sacarosa, fructuosa, cebolla, glucosa y galactosa que fueron los azúcares

usados dieron un resultado positivo con el reactivo de Molish, a pesar de que la
glucosa es monosacárido y de que la sacarosa y la maltosa son disacáridos, esto
hace que dicha clasificación se deba al tiempo que tarda en formarse el anillo color
purpura violeta. En las muestras que son de sacarosa y fructuosa precipita de
forma más lenta con el óxido cuproso(Cu2O) la cual nos indica que estamos en
presencia de disacáridos, después con la adición de una cierta cantidad de ácido
sulfúrico (H2SO4) en un tiempo prolongado se dio la formación de anillo purpura-
violeta en la interface, la cual nos indica la presencia de un carbohidrato. En las
muestras de los azúcares de la Glucosa, nos da una reacción positiva, debido a que
las muestras de los azúcares están en forma deshidratada, y al reaccionar con el
ácido sulfúrico (H2SO4) se dio la formación del anillo purpura- violeta en la interface
de manera inmediata la cual nos indica la presencia de un carbohidrato. (Que
identificamos con el reactivo de Molish).

PRUEBA DE TOLLENS

En primer lugar, hemos de limpiar el tubo de ensayo donde se realizara el

experimento, hirviendo en este NaOH al 10%. Entonces, se añaden 3 gotas de la
muestra problema (o bien 50 mg de solido), y 2,5 ml de reactivo de Tollens recién
preparado. Agitar el tubo y dejarlo estar durante 10 minutos. Si al cabo de este
tiempo no se observa reacción, se calienta el tubo en un baño de agua caliente.

TUBOS CANTIDAD REACTIVOS

CON 2 ML DE
1 NaOH + AgNO3
FRUCTUOSA

2 CON 2 ML DE SACAROSA NaOH + AgNO3

3 CON 2 ML DE GLUCOSA NaOH + AgNO3

4 CON 2 ML DE CEBOLLA NaOH + AgNO3

CON 2 ML DE
5 NaOH + AgNO3
GALACOTOSA

6 CON 2 ML DE ALMIDON NaOH + AgNO3

PREGUNTAS

Explique por qué el monosacárido gliceraldehido da negativa la prueba

Molish.
La Prueba de Molish es una reacción general para carbohidratos que contienen más
de 5 átomos de carbono, y el gliceraldehido tiene un carbono. Para identificar
monosacáridos se utiliza la Prueba de Barfoed.

Defina los siguientes términos: carbono anomérico, centro quiral,

levorrotatorio.

Carbono anomerico: Un carbono anomérico es aquel átomo de carbono que en la

estructura lineal no es asimétrico, pero cuando se cicla la molécula, pasa a ser
asimétrico, dando origen a dos isómeros ópticos (α y ß). Se identifica porque
algunos de sus 4 sustituyentes en sus enlaces son iguales (dos o más elementos
enlazados con el átomo de carbono son los mismos).

Centro quiral: Un centro quiral es un átomo de carbono con cuatro sustituyentes

distintos. La estereoquímica es una parte de la química que toma como base el
estudio de la distribución espacial de los átomos que componen las moléculas y el
como afecta esto a las propiedades y reactividad de dichas moléculas.

Levorrotatorio: Formas dextro y levo:Enantiómeros.

Un enantiómero que rota el plano de la luz polarizada hacia la derecha (en el sentido
de las agujas del reloj), se dice que es dextrorrotatorio, dextrógiro o una forma
dextro, y suele colocársele al nombre de éste una letra "de" minúscula (d), o un
signo positivo (+). Si lo hace hacia la izquierda, es levorrotatorio, levógiro o una
forma levo, y suele colocársele como prefijo al nombre una letra "ele" minúscula (l),
o un signo negativo (–5 ).

Dibuje los monosacáridos glucosa, galactosa, ribosa y fructosa, clasifíquelos

según el número de átomos de carbono y la función principal
 Hexosas Función Pentosa función

es la fuente principal de energía de las células,

Glucosa
mediante la degradación catabolica

La galactosa se convierte en glucosa en el hígado e

intestinos, de manera que sirva de combustible
metabólico para las células. Es sintetizada en las Principal fuente de
Galactosa
glándulas mamarias para la producción de lactosa.
Ribosa energía para el
Además es constituyente de glucolipidos y
corazón
glucoproteinas.

La fructosa se convierte en glucosa en el hígado e

Fructosa intestinos, de manera que sirva de combustible
metabólico para las células.

Efectué un enlace hemiacetálico y uno hemicetálico, escriba las diferencias

entre ambos enlaces.
La estructura ciclada se consigue en aldopentosas y hexosas. El enlace de ciclación
se genera entre el carbono que posee el grupo funcional y el carbono asimétrico
más alejado del grupo funcional. Cuando el carbono tiene un grupo aldehído, como
grupo funcional, el enlace recibe el nombre de hemiacetálico. Cuando el carbono
tiene un grupo cetona, como grupo funcional, el enlace recibe el nombre de
hemicetálico.

Escriba las funciones: aldehídica, cetónica, alcohólica, ácida, colóquelas en

orden de reactividad y explique el porqué de ese orden.
Explique en qué consiste la hidrólisis ácida de disacáridos.

Disacáridos: (ejemplo, la sacarosa), producen dos moléculas de monosacárido por

hidrólisis. Rompimiento de enlace glucosidico.

La sacarosa (enlace α (1 → 2) O), es un disacárido que no posee carbonos

anoméricos libres puesto que están siendo utilizados en el enlace glucosídico, por
lo que carece de poder reductor. Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente,
la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molécula de agua y se descompone
en los monosacáridos que la forman, glucosa y fructosa, que sí son reductores, lo
cual demuestra que se rompió el enlace O-glucosídico de esta.

Defina los siguientes términos: azúcar reductor y azúcar no reductor, cite

ejemplos.

Azucares reductores: son los monosacáridos (todos las aldosas, es decir aquellos
que presentan un grupo aldehído en su estructura lineal, por ejemplo: glucosa,
manosa, fructosa, galactosa, ribosa, etc.) y los disacáridos (no todos, ejemplos son
la maltosa, lactosa y celobiosa).

Experimentalmente se puede demostrar que son reductores mediante un ensayo

sencillo como Fehling o Tollens.

Azucares no reductores: Los azúcares No Reductores son aquellos que se unen

por enlaces glucosídicos de tipo Alfa o Beta, cuando 2 monosacáridos iguales o
diferentes se unen forman un Disacàrido, los Disacàridos por condensación liberan
una molécula de agua y son azúcares no reductores ya que el grupo Oxidrilo ( OH
) de una hexosa se combina con el grupo Aldehído ( CHO ) de otra hexosa liberando
1 molécula de H20, el licor de Feeling no tiene efecto sobre ellos lo cual los
determina como azúcares no reductores, por ej la Sacarosa ( glucosa + fructosa )
Maltosa ( 2 unidades de alfa glucosa), Trehalosa, etc.

Efectué un enlace glucosídico.