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ISSN: 1870-0195
rmcf@afmac.org.mx
Asociación Farmacéutica Mexicana, A.C.
México
1Departamentode Química
2Departamento de Farmacología, Centro de Investigación y de Estudios Avanzados
Instituto Politécnico Nacional
Resumen
El Docetaxel es un antineoplásico cuya presentación comercial es Taxotere. La unión de Docetaxel a las proteínas
plasmáticas para su distribución son etapas críticas en la farmacocinética que determinan los efectos adversos. La
distribución de Docetaxel depende mayoritariamente de la proteína plasmática albúmina sérica humana (del inglés,
HSA). El presente estudio evaluó la unión de Docetaxel a la HSA, utilizando la técnica de absorción electrónica. Se
realizaron pruebas de tiempo de incubación proteína-fármaco, concentración de Docetaxel y paso óptico. Se concluye
que las condiciones óptimas para estudiar la interacción Docetaxel-HSA implica utilizar concentraciones de 4 a 28 µM de
Docetaxel, 2 µM de proteína, sin incubar los reactivos y utilizando un paso óptico de 0.5 cm. En este trabajo se evaluó la
unión de la HSA al Docetaxel en presentación Taxotere, y en principio, esta prueba podría ser implementada para evaluar
la unión Docetaxel-HSA cuando el fármaco se encuentra en diferentes formulaciones.
Abstract
Docetaxel is an antineoplastic commercially called Taxotere. The union of Docetaxel to plasmatic proteins for its
distribution is a critical step of the pharmacokinetics process that determines their adverse effects. The main plasma
protein involved is human serum albumin (HSA). In this study, we evaluated the binding of Docetaxel to HSA using
electronic absorption spectroscopy. The effects of incubation time after the addition of Docetaxel to HSA, reagents
concentration and optical path length were evaluated. We concluded that the best conditions to evaluate Docetaxel-HSA
interaction are: 4 to 28µM of Docetaxel, 2 µM protein, without incubation of reagents, and using a 0.5 cm path length. In
this work, we evaluated the binding of HSA to Docetaxel in Taxotere presentation, and the probe here developed could
be applied to evaluate Docetaxel-HSA binding in different formulations.
Palabras clave: espectroscopia, Docetaxel, proteínas Key words: spectroscopy, Docetaxel, plasma proteins.
plasmáticas.
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investigaciones para evaluar la unión de este fármaco y para
implementar una técnica que evalúe una determinada
formulación y la unión de Docetaxel a las proteínas plasmáticas.
Material y método
Preparación de las muestras
Se utilizó Docetaxel en la presentación Taxotere 80 mg, la cual
consiste de dos ámpulas: una contiene Docetaxel con
polisorbato 80 y la otra contiene etanol al 13%. Para su uso, se
mezclaron ambas ámpulas y se obtuvo el espectro
inmediatamente después de preparar la muestra. Las muestras
fueron almacenadas a 4 °C y protegidas de la luz. Para las
técnicas espectroscópicas se utilizó albúmina sérica humana
(HSA, A1887, Sigma-Aldrich) en concentración de 2 µM en
buffer de fosfatos 0.01 M, pH 7.4.
Resultados y discusión
La técnica de absorción electrónica permite identificar el
espectro de Docetaxel y también es útil para explorar el cambio
que puede sufrir una proteína al formar un complejo con un
fármaco u otra molécula.
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Al adicionar Docetaxel a la HSA se observó un desplazamiento señal y permite observar el efecto de la modificación de la
en la longitud de onda de absorción máxima de la proteína, de proteína en presencia de Docetaxel es el de 0.5 cm.
2±1 nm y un decremento en la absorbancia (Figura 1B). Estos
efectos son consistentes con lo reportado por Cheng y
colaboradores 18, aunque en dicho trabajo los efectos no fueron
cuantificados. En este trabajo, el decremento en absorbancia se
reporta como la relación del cambio en la absorbancia respecto
de la concentración de Docetaxel, dA/dD, donde A es la
absorbancia y D es la concentración de Docetaxel. Con la
adición de Docetaxel a la HSA, el dA/dD observado fue de
-18,031 ±4,522 M-1, la desviación estándar representa el error
experimental asociado a la medición de al menos diez
experimentos diferentes.
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Conclusiones
La espectroscopia de absorción electrónica constituye una
herramienta útil para estudiar la unión fármaco-proteína por ser
una técnica sensible, reproducible, precisa y de fácil acceso. La
unión de Docetaxel a la HSA ocasiona un decremento en su
absorbancia, el cual ha sido cuantificado en este estudio.
Mediante absorción electrónica se evaluaron los coeficientes de
extinción molar de Docetaxel y la interacción del fármaco con
la proteína plasmática HSA, concluyendo que las condiciones
experimentales óptimas para su estudio son de 4 a 28 µM de
fármaco, 2 µM de proteína, sin necesidad de incubar los
reactivos y utilizando un paso óptico de 0.5 cm. En el presente
trabajo se evaluó la unión de la HSA al Docetaxel en
presentación Taxotere, y en principio, la prueba aquí
desarrollada usando absorción electrónica podría ser
implementada para evaluar la unión de Docetaxel a la HSA
cuando el fármaco se encuentra en diferentes formulaciones.
Agradecimientos
Se agradece a Sanofi-Aventis por la aportación de las unidades
de Taxotere a este estudio, a CONACYT por el apoyo
económico (beca a M.M y proyecto No.CB2009-128255 a LQ)
y a Gabina Dionisio Cadena por su colaboración en este trabajo.
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