LAPORAN PRAKTIKUM BIOFARMASETIKA

ANALISIS BIOEKIVALENSI (BE) IN VITRO:

UJI DISOLUSI TERBANDING (UDT

Selasa, 13 Maret 2018

Kelas B
Pukul 10.00 – 13.00 WIB

Naomy Octavinna
260110150059

LABORATORIUM BIOFARMASETIKA
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS PADJADJARAN
JATINANGOR
2018
 UJI DISOLUSI TERBANDING

I. TUJUAN
Mempelajari perbedaan profil disolusi berbagai obat generik yang sudah beredar
dan membandingkan kemiripan (bioekivalensi/BE) antar obat generik tersebut
menggunakan Microsoft Office Excel dan Software PhEq Bootstrap

II. PRISIP
2.1 Bootstrap
Adalah alat perangkat lunak gratis yang menggunakan faktor kemiripan (f2)
untuk menilai kemiripan profil disolusi dalam kasus variabilitas data yang
besar. (Mendyk, 2013)
2.2 Uji Disolusi Terbanding
Adalah pengujian yang dapat digunakan untuk memastikan ekivalensi dan
sifat-sifat produk obat. (Winsa, 2017)

III. TEORI DASAR

Disolusi obat adalah suatu proses pelarutan senyawa aktif atau obat dari
bentuk sediaan padat ke dalam media pelarut. Sediaan obat yang harus diuji
disolusinya adalah bentuk padat atau semi padat, seperti kapsul, tablet atau salep
agar suatu obat diabsorbsi, mula-mula obat tersebut harus larutan dalam cairan pada
tempat absorbsi. Sebagai contoh, suatu obat yangdiberikan secara oral dalam
bentuk tablet atau kapsul tidak dapat diabsorbsi sampai partikel-partikel obat larut
dalam cairan pada suatu tempat dalam saluran lambung"usus. Dalam hal dimana
kelarutan suatu obat tergantung apakah medium asam atau medium basa, obat
tersebut akan dilarutkan. (Ansel, 1985)
Disolusi berkaitan erat dengan bioekuivalensi maupun bioavaibilitas. Dua
produk obat disebut bioekivalen jika keduanya mempunyai ekivalensi farmaseutik
atau merupakan alternatif farmaseutik dan pada pemberian dengan dosis moral
yang sama akan menghasilkan biovailabilitas yang sebanding sehingga efeknya
akan sama, dalam hal efikasi maupun keamanan. Sedangkan bioavailibilitas adalah
persentase dan kecepatan zat aktif dalam suatu produk obat yang mencapai /
tersedia dalam sirkulasi sistemik dalam bentuk utuh/ aktif setelah pemberian produk
obat tersebut, diukur dari kadarnya dalam darah terhadap waktu atau dari
ekskresinya dalam urin (BPOM RI, 2004)
Uji disolusi terbanding dilakukan dengan menggunakan metode basket pada
100 rpm atau metode paddle pada 50 rpm dalam media pH 1.8 (larutan HCI), pH
4,5 (bufer sitrat) dan PH 6.8 (bufer fosfat); waktu pengambilan sampel untuk
produk obat lepas cepat: 10,15,30,45 dan 60 menit. Digunakan produk obat minimal
12 unit dosis. Profil disolusi dibandingkan dengan menggunakan faktor kemiripan
f 2 yang dihitung dengan persamaan berikut:

Rt = persentase kumulatif obat yang larut pada setiap waktu sampling dari
produk pembanding (R = reference) Tt = persentase kumulatif obat yang larut pada
setiap waktu sampling dari produk uji (T = test) . Jika nilai f2=50 atau >50 (50-
100) menunjukkan kesamaan atau ekivalensi ke 2 kurva, yang berarti kemiripan
profil disolusi ke 2 produk. Kika produk “ Copy” dan produk pembanding memiliki
disolusi yang sangat cepat (> 85 % melarut dalam waktu < 15 menit dalam ke-3
media dengan metode uji yang dianjurkan), perbandingan profil disolusi tidak
diperlukan. (BPOM, 2014)
Uji Disolusi dan penetapan kadar zat khasiat merupakan faktor penting
dalam pengendalian mutu obat. Pengujian ini dipersyaratkan pada produk farmasi
berbentuk tablet. Uji disolusi ini pada industri farmasi merupakan informasi
berharga untuk keseragaman kadar khasiat dalam satu produksi obat (batch),
perkiraan BA dari zat khasiat dalam suatu formulasi,variabel kontrol proses dan
untuk melihat pengaruh perubahan formulasi (Kun Nie et. All, 2009)
 BPOM mempersyaratkan UDT (profil disolusi) berdasarkan perbandingan
antara obat inovator dan obat 'copy' untuk memastikan kualitas dan sifat produk
obat dengan perubahan minor dalam formulasi atau pembuatan setelah izin
pemasaran obat. Sebelum melakukan BE, BPOM juga menganjurkan untuk
melakukan uji disolusi in vitro yang dilaporkan dalam bentuk profil disolusi antara
obat uji da pembanding / inovator (BPOM, 2014)
Kendala utama untuk perbandingan dua produk atau formulasi atau bentuk
sedian adalah in vitro (disolusi terbanding) sebagai perbandingan in vitro disolusi
profil, persamaan (similarity dan perbedaan) faktor ditekankan oleh FDA USA.
1. Faktor perbedaan
Berfokus pada perbedaan dalam persen terlarut antara refensi dan uji pada
berbagai interval waktu. Oleh karena itu faktor langsung membandingkan
perbedaan antara obat persen terlarut persatuan waktu untuk obat uji dan produk
referensi.
2. Faktor Kesamaan
Sebagai mana menetapkan, menekankan pada perbandingan kedekatan dari
dua perbandingan formulasi.

Secara umum, metode untuk pengujian uji disolusi terbanding in vitro ini
terbagi menjadi tiga kelompok utama; yaitu metode berbasis analisis varians
(ANOVA) (Mauger, 1986; Pollo, 1997), metode model-independen (Sathe, 1996;
Shah, 1997) dan metode model dependen (Podczeck, 1993: Moore, 1996)

IV. ALAT DAN BAHAN

4.1 Bahan
4.1.1. Dapar fosfat pH 4,5
4.1.2. Dapar fosfat pH 6,8
4.1.3. Dapar pH 1,2 atau HCl
4.1.4. Microsoft Excel
4.1.5. Panadol
4.1.6. Pamol
 4.1.7. Software PhEq Bootstrap
4.1.8. Sanmol

4.2 Alat
4.2.1. Alat disolusi tipe 2
4.2.2. Laptop
4.2.3. Spektrofotometer UV-Vis

V. PROSEDUR
5.1 Menggunakan perangkat lunak PhEq Bootstrap
 Install file installer perangkat lunak PhEq Bootstrap sesuai dengan
spesifikasikasi perangkat komputer yang digunakan. Spesifikasi dapat
dilihat pada: My Computer > System properties (tab dibagianatas) > System
type: 32-bit Operating System atau 64-bit Operating System
 Buka perangkat lunak notepad pada perangkat komputer. Masukkan data
persen hasil disolusi sesuai format
 Buat file notepad terpisah untuk data obat referensi dan obat uji (2 file
berbeda)
 Buat file notepad kosong, simpan dengan nama file “hasil perhitungan f2
obat x”
 Buka perangkat lunak PhEq Bootstrap. Upload file yang telah dibuat sesuai
dengan bagiannya masing-masing seperti terlihat pada bagian muka
perangkat lunak tersebut.
 Pilih opsi “sampling mode” dan “f2 auto-rule” sesuai kebutuhan
 Pilih “bootstrapping parameters” sesuai kebutuhan
 Klik Start
 Hasil yang keluar adalah original value f1 dan f2 (ini merupakan nilai f2
rata-rata dengan CI 90%). Hasil yang digunakan merupakan nilai f2* yang
berwarna hijau atau merah dibagian bawah (Nilai f2* ini menunjukkan nilai
f2 batas bawah dengan CI 90%)
 Klik tab “graph” (dibagian atas) untuk mendapatkan kurva persen disolusi.
Sumbu vertical menandakan persen terdisolusi. Sumbu horizontal
menandakan titik-titik waktu pengambilan sampel

 5.2 Menggunakan Software Microsoft Excel untuk factor similaritas (f2)

Microsoft Excel
 Cari rata–rata dari ke 12 batch data di tiap menitnya baik reference maupun
test (menggunakan =Average)
 Cari selisih dari rata–rata reference dengan test dari 12 batch di tiap
menitnya
 Kuadratkan hasil selisih dari rata–rata reference dengan test dari 12 batch di
tiap menitnya
 Masukan rumus secara manual untuk mencari nilai f2

VI. DATA PENGAMATAN

Software PhEq Bootstrap:
 Ms. Excel
  Faktor similiritas dan factor perbedaan

VII. PEMBAHASAN
PhEq_bootstrap adalah alat perangkat lunak gratis untuk membantu
perhitungan kesamaan faktor (f2) untuk menilai kesamaan profil disolusi dalam
kasus variabilitas profil disolusi yang besar. Dasar teoritisnya meliputi teknik
bootstrap dan analisis nilai f2 yang diharapkan. Hal ini memungkinkan baik
pembenaran profil kesamaan dan simulasi prospektif untuk pembentukan titik akhir
pengembangan formulasi. PhEq_bootstrap tersedia dengan lisensi GPLv3 (6) dari
sourceforge.net (1), oleh karena itu bebas digunakan untuk keperluan pribadi dan
komersial.
Teknik lain yang dapat digunakan selain bootstrap adalah Mahalanobis.
Analisis matriks kovarian digunakan dalam teknik jarak Mahalanobis dari
perbandingan profil langsung. Karena teknik multivariat menderita pembatasan
teknik inversi matriks, yang sensitif terhadap karakteristik matriks kovarian;
Dengan demikian terkadang data tidak nyata. Selain itu, interpretasi oh jarak
Mahalonobis memerlukan perhitungan interval kepercayaan yang rumit. Oleh
karena itu, pendekatan ini tidak serba guna dan mudah ditafsirkan sebagai f2.
Berbeda dengan teknik jarak Mahalanobis, teknik bootstrap memungkinkan
penggunaan f2; Namun itu juga digunakan bukan sebagai estimator titik tapi
sebagai interval kepercayaan. Teknik bootstrap secara matematis dan algoritmik
jauh lebih sederhana daripada teknik jarak Mahalanobis. Selain itu, lebih mudah
untuk menafsirkan berdasarkan aturan umum yang diketahui yang menjelaskan
nilai f2 dan artinya untuk keputusan mengenai kemiripan profil yang dianalisis.
Ph_Eq Bootstrap adalah Program yang dikembangkan sebagai bantuan
dalam membangun ekuivalensi farmasi dengan menggunakan koefisien FDA f2. Ini
dirancang untuk membantu perhitungan f2 dalam kasus ketika variabilitas intra dan
antar-batch besar, yaitu RSD> 10%. Penggunaan teknik bootstrap statistik
memungkinkan untuk menerapkan confidence interval (CI) ke dalam koefisien f2
yang menghasilkan penanganan kelemahan utama mereka dalam metrik
aslinya. Algoritma ini memungkinkan "skenario kasus terburuk" dari nilai f2,
sehingga mendukung klaim tentang kesetaraan farmasi. Berikut fitur bermanfaat
yang ditawarkan Ph_Eq Bootstrap:
 perhitungan otomatis f1 dan f2 berdasarkan profil disolusi obat individual

 bootstrap digunakan untuk estimasi distribusi f1 / f2

 laporan lengkap dari keseluruhan proses komputasi

 representasi grafis dari profil

Karena kesederhanaan matematika dan kurangnya asumsi mekanistik,

faktor kemiripan (f2) saat ini adalah salah satu metode yang paling umum
digunakan untuk membandingkan profil disolusi. Meski merupakan metode
sederhana, f2 dibatasi pada kondisi berikut
1. Minimal 3 poin di profil
2. 12 unit untuk setiap refrence dan produk uji
3. Tidak lebih dari 1 point diatas 85%
4. RSD untuk titik disolusi kurang dari 10% (titik pertama kurang dari 20%)

PhEq_bootstrap adalah perangkat lunak yang menangani pembatasan F2

yang disebutkan di atas mengenai RSD dari titik disolusi. Teknik bootstrap
digunakan untuk mensimulasikan distribusi f2 untuk menilai skenario terburuk
sebagai interval kepercayaan yang lebih rendah dari nilai yang diharapkan dari f2.
Komputasi nilai yang diharapkan dan estimator tak bias f2 didasarkan pada
publikasi Shah et al. (5), dimana bukti matematis dari konsep ini disajikan dan
didiskusikan. Untuk melakukan perhitungan, populasi baru profil disolusi
dihasilkan secara numerik dengan teknik bootstrap, dimana sampel baru merupakan
hasil random sampling dengan penggantian profil disolusi. Prosedur ini dilakukan
untuk referensi dan profil uji. Dua mode prosedur sampling ("mode sampling")
diimplementasikan dalam perangkat lunak ini (Gambar 1). Mereka didasarkan pada
definisi sampel, yang terdiri dari keseluruhan profil dan masing-masing poin.
Dalam Mode 1, profil disolusi "baru" adalah replikasi sederhana profil dari
data asli. Satu-satunya perbedaan adalah kumpulan profil untuk masing-masing
sampel bootstrap yang ditugaskan untuk referensi dan obat uji. Ini berarti bahwa
sampel khusus tertentu untuk referensi atau obat uji mengandung profil disolusi dari
profil asli yang dipilih secara acak dengan kemungkinan replikasi. Dalam kasus
ekstrim, satu sampel mungkin berisi 12 profil identik dari profil yang sama yang
dipilih oleh sistem 12 kali.
Dalam Mode 2, profil disolusi dibuat de novo, berdasarkan sampling dari
masing-masing titik. Untuk setiap titik waktu yang tersedia dalam data asli, jumlah
obat yang dilepaskan diperlakukan sebagai kolam dari mana nilai yang dipilih
secara acak digunakan untuk profil disolusi numerik yang baru dibuat (Gambar 3).
Kedua mode ini dilakukan secara terpisah untuk tes dan referensi obat dengan
sampling berdasarkan distribusi datar (seragam). Jumlah profil disolusi buatan
(nomor bootstrap) adalah subjek optimasi individu. Ini berarti bahwa pengguna
harus menjalankan beberapa perangkat lunak secara berurutan, dengan jumlah
bootstraps yang meningkat (yaitu, 500, 1000, 2000, dll.) Dan amati hasilnya.
Biasanya 1000 bootstraps atau lebih cukup untuk menstabilkan hasilnya. Default
perangkat lunak adalah 5000 dan dapat ditingkatkan jika diperlukan.
Nilai default lainnya adalah confidence interval (CI) diatur ke 90%, yang
mungkin berubah dengan diskusi yang sesuai. Pertimbangan yang disajikan di atas
sangat penting untuk validasi perangkat lunak. Perangkat lunak ini didasarkan pada
teknik probabilistik (bootstrap) dimana bilangan random (pseudo) adalah basis dari
perhitungan interval keyakinan. Ini menyiratkan bahwa menjalankan analisis
beberapa kali akan menghasilkan hasil yang sedikit berbeda. Semakin banyak
bootstraps yang ditetapkan untuk 1 putaran, semakin kecil perbedaan antara hasil
putaran berturut-turut, namun pada tingkat akurasi tertentu, mereka akan selalu ada.
interpretasi dari hasil didasarkan pada aturan umum kemiripan profil disolusi f2
harus lebih besar dari 50
Karakteristik hasil disolusi asli adalah dasar untuk estimasi nilai
"sebenarnya" dari f2 yang dinyatakan sebagai simulasi CI dengan teknik bootstrap.
Pada akhirnya, seseorang memilih nilai CI yang paling tidak menguntungkan;
Karena f2 harus > 50, itu adalah nilai CI yang lebih rendah. Penafsiran tersebut
dilakukan secara otomatis oleh perangkat lunak, dan hasilnya akan segera
ditampilkan pada akhir penghitungan. Ini adalah keputusan go / no-go yang
sederhana. Namun, informasi berharga lainnya yang berasal dari perhitungan
sampel bootstrap adalah selisih antara nilai rata-rata f2 dan nilai interval confidence
yang sesuai. Hal ini memberikan perkiraan kasar tentang titik akhir nilai f2 rata-rata
yang harus dicapai untuk menjaga kesamaan profil dalam kasus ketika analisis
bootstrap menunjukkan kurangnya kesamaan.
Adapun syarat dari f1 adalah mendekati 0 atau dalam rentang 0-15 dan nilai
dari f2 adalah mendekati 100 atau dalam rentang 50-100. Hasil faktor f2 yang
didapat dari microsoft excel dan bootstrap adalah sama, yaitu 49,89, yang artinya
kedua obat tersebut memiliki kemiripan sekitar 49,89%. Hasil faktor f1 yang
didapat dari microsoft excel adalah 15,14, hasil yang berbeda ditunjukan oleh
Software PhEq 17,83, hasil tersebut tidak memenuhi syarat dari faktor perbedaan
yang seharusnya dimiliki dari kedua obat tersebut tidak lebih dari 15

VIII. SIMPULAN
Dapat mempelajari perbedaan profil disolusi obat dagang dan obat generik,
serta dapat membandingkan kemiripan (bioekivalensi/BE) antar obat generik
tersebut dengan nilai f1=17,83 (software PhEq Bootstrap); 15,14 (Microsoft Excel)
dan nilai f2=49,89 dimana dari hasil yang didapat dapat dikatakan bahwa profil
disolusi obat tersebut tidak memenuhi syarat.
DAFTAR PUSTAKA

Abdou, H. M. 1989, Dissolution, Bioavailability & Bioequivalence. Pesnylvania :

Mack. Publishing
Ansel. 1985. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. UI Press: Jakarta.
BPOM RI. 2004. Pedoman Uji Bioekivalensi. Jakarta: BPOM RI
Kun Nie et. All. 2009. Monitoring Ambroxol Hydrochloride Sustain Release Tablet
Release by Fiber-Optic Drug Dissolution In Situ Test System, Available at
http://www.pharmainfo.net, [16 Maret 2018, 3:19 PM]
Mendyk et al. 2013. PhEq_bootstrap: Open-Source Software for the Simulation of
f2 Distribution in Cases of Large Variability in Dissolution Profiles.
Dissolution Technologies dx.doi.org/10.14227/DT200113P13
Winsa et al. 2017. Uji Disolusi Terbanding Tablet Ofloxacin Berlogo dan Generik
Bermerek Terhadap Inovator Dalam Media Dapar HCl pH 4,5. Jurnal
Pharmascience, Vol. 04 , No.01, Februari 2017, hal: 25 - 33