TEMA 6

Crecimiento microbiano y su control

Crecimiento celular vs. poblacional.

Docentes: Ana Poveda. Rommy Terán.

1
 RESULTADOS DE APRENDIZAJE
El estudiante será capaz de:

1. Describir la fisión binaria como mecanismo de

crecimiento celular y poblacional.
2. Definir las fases del crecimiento microbiano y
sus características
3. Aplicar el modelo matemático N=No. 2n que
define el crecimiento microbiano en su fase
exponencial.
4. Describir las diferencias entre los métodos de
recuento de células directo e indirecto.

2
• Crecimiento se refiere al número de células NO al tamaño de las mismas.
• El crecimiento NO es reproducción
• Microorganismos crecen en número y se acumulan en colonias.
• Poblaciones crecen en un tiempo muy corto (la mayoría).
• Conocer las condiciones necesarias para el crecimiento va a ayudar a controlarlo o inducirlo.

3
• Representar
gráficamente la enorme
población resultante del
crecimiento bacteriano
es esencial en
MICROBIOLOGIA.

• Medir la actividad
metabólica.

4
Fisión binaria.

5
6
7
Fts Z(Filamentous
temperature sensitive)
proteins.

Forman el DIVISOMA
(aparato de división celular).
Anillo FtsZ atrae otras
proteínas del divisoma.
Zip A y FtsA anclan al anillo
con la membrana
plasmática.
FtsI para síntesis de
peptidoglicano. Es una PBP.

8
Proteínas Min para
localizar el punto medio.
Min C y D previenen la
formación del anillo FtsZ
en los polos.

FtsK ayuda a que las

copias del cromosoma
vayan a cada polo.

9
FtsZ empieza a despolimerizarse,
da lugar al crecimiento de la
pared celular para formar el
septum.
FtsZ hidroliza GTP-energía.
Polimerización-despolimerización
del anillo.

10
MreB proteína que
determina la forma de las
bacterias.
Mutaciones de MreB en
bacilos...

Caulobacter crescentus
forma de Vibrio produce
crescentina.

11
12
CRECIMIENTO: aumento del número de células en una población

+ Generación

Tiempo de generación
o de duplicación es el tiempo requerido para que una célula se
divida y doble su población.

Velocidad de crecimiento: cambio experimentado en número de células o

masa celular por unidad de tiempo

13
 CRECIMIENTO EXPONENCIAL

Modelo de incremento de la población en el que en un periodo fijo

de tiempo, se duplica la población.

E.Coli tiene un tiempo de generación de 20 minutos. Después de 20

generaciones una sola célula de Ecoli dará lugar a mas de un millón
de células.

Es difícil graficar estos cambios poblacionales de tal magnitud

usando números aritméticos.

Por eso se usan escalas logarítmicas para graficar el crecimiento

bacteriano.

14
 CRECIMIENTO EXPONENCIAL

NUMERO DE GENERACION NUMERO DE CELULAS LOG10 .del numero de

células
0 1 0
5 (25) 32 1.51
10 (210) 1024 3.01
15 (215) 32768 4.52
16 (216) 65536 4.82
17 (217) 131072 5.12
18 (218) 262144 5.42
19 (219) 524288 5.72

Generación: numero de veces que la

célula se divide.
15
CRECIMIENTO EXPONENCIAL

Modelo de incremento de la
población donde el número
de células se duplica en un
intervalo de tiempo
constante.

Gráfico semilogarítmico.
Línea recta refleja que las
células están creciendo
exponencialmente.

16
• Graficos semilogarítmicos para estimar el
tiempo de generación de un grupo de datos
de crecimiento.

17
CRECIMIENTO EXPONENCIAL

18
 CRECIMIENTO EXPONENCIAL
FASES DEL CRECIMIENTO MICROBIANO
Bacterias inoculadas en medio liquido

1ra fase: Fase de latencia: o fase lag o de retraso.

2da fase: Fase Exponencial o log.
3ra fase Estacionaria:
4ta Fase de muerte

19
 CURVA DE CRECIMIENTO
Fase de latencia: o fase lag o de retraso.
• El crecimiento no inicia inmediatamente. Síntesis de enzimas y varias moléculas.
• Ej. Inoculo de un cultivo viejo, Inoculo de un cultivo dañado, Inoculo de medio rico a
medio pobre
Fase Exponencial o log.
• A partir de cada célula se forman 2 células
• Estado fisiológico óptimo: estudios enzimáticos y estructurales
• Velocidad influenciada por: condiciones ambientales, - características genéticas
• Velocidad de crecimiento constante
• Microorganismos particularmente sensibles a condiciones adversas:radiación y
antibióticos.
Fase Estacionaria:
• Nutriente del medio llega a ser factor limitante
• Se acumulan en el medio productos de desecho: inhibidores del crecimiento. Cambios
en el pH.
• No hay aumento ni descenso neto del número de células
• Número de células creciendo = número de células muriendo: equilibrio o crecimiento
críptico
Fase de muerte
• El número de muertes excede el numero de nuevas células. 20
• Casi siempre más lenta que la exponencial.
 CRECIMIENTO EXPONENCIAL

• Parámetros del crecimiento:

• Aumento en el número de células en un cultivo creciendo exponencialmente:
progresión geométrica de base 2

2 4 8 16 32 64

21
 CRECIMIENTO EXPONENCIAL
• El crecimiento microbiano en su fase exponencial puede describirse mediante el
siguiente modelo matemático N=No. 2n.

N = No.2n
Donde:
N = número final de células
No = número inicial de células
n = número de generaciones.

n= log numero final de células – log numero inicial de células

0,301
Cálculo del tiempo de generación:
g=t/n
g= Tiempo de generación o de duplicación es el tiempo requerido para que una
célula se divida y doble su población.
t=horas o minutos de crecimiento exponencial
n=número de generaciones

22
23
1. Si partimos de 104 ufc/ml en un cultivo que tiene un tiempo de
generación de 2 h, ¿cuántas células tendremos al cabo de 4, 24
y 48 h de cultivo?
2. Calcular el tiempo de generación de un microorganismo en un
cultivo que pasa de 2 x 104 ufc/ml a 7 x 105 ufc/ml en 2.5 h.
3. Grafique como seria la curva de crecimiento microbiano para
Klebsiella pneumoniae, empezando con 200 células con un
tiempo de generación de 60 minutos a 35 °C. Las células han
sido incubadas por 10 horas. Además calcule el número de
generaciones en las 10 horas y el número final de células.
4. Un chef de la pastelería Cyrano inoculo accidentalmente un
postre de fresas con 6 bacterias de Staphylococcus aureus. Si
ésta bacteria tiene un tiempo de generación de 60 minutos,
cuantas bacterias habrá en el postre luego de 7 horas?

24
 MEDIDA DEL CRECIMIENTO BACTERIANO EN EL LABORATORIO

MEDIDAS DIRECTAS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO.

1. Recuento DIRECTO de células TOTALES

2. Recuento DIRECTO de células VIABLES

MEDIDAS INDIRECTAS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO.

Turbidez y actividad metabólica

25
 MEDIDA DEL CRECIMIENTO EN EL LABORATORIO

Recuento DIRECTO de células TOTALES Células muertas y vivas

• Observación microscópica: Cámara cuentaglóbulos

Ejs: de Neubauer
de Petroff- Hausser

26
27
 MEDIDA DEL CRECIMIENTO EN EL LABORATORIO

MEDIDAS DIRECTAS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO.

1. Recuento DIRECTO de células TOTALES

• Observación microscópica: Cámara cuentaglóbulos o de Neubauer

Limitaciones:
Células muertas y vivas
Poca precisión (células pequeñas no se ven)
Baja densidad celular no es conveniente
Bacterias móviles son difíciles de contar.

2. Recuento DIRECTO de células VIABLES

• Recuento en placa o recuento de colonias (cada célula viable puede formar
una colonia)
METODOS: Método de extensión
Método de vertido en placa
ufc= Unidades formadoras de colonias.

28
Recuento en placa o recuento
de colonias

29
30
Dilución de la muestra previo
al recuento en placa
Diluciones seriadas de base 10

Válido estadísticamente:
Contar placas con ufc
(unidades formadoras de
colonias) de entre 30 a 300

El factor de dilución es el
recíproco de la dilución
31
Recuento en placa o recuento de colonias

10-3 10-6 10-9 32

Ejercicio.

33
 MEDIDA DEL CRECIMIENTO EN EL LABORATORIO

MEDIDAS INDIRECTAS DEL CRECIMIENTO

MICROBIANO.

TURBIDEZ o DO600

No siempre es necesario contar las células

microbianas para estimar su número.
Las bacterias se multiplican en un medio líquido y el
medio se vuelve turbio.

A mayor número de células mayor será la turbidez.

34
Recuento de células TOTALES: TURBIDEZ o DO600

mayor turbidez = mayor número células

A mayor TRANSMITANCIA menor número de células
A mayor ABSORBANCIA mayor número de células

35
36
 MEDIDA DEL CRECIMIENTO EN EL LABORATORIO

2. Recuento INDIRECTO de células TOTALES:

TURBIDEZ o DO600

Otros métodos indirectos

- Medición de parámetros BIOQUÍMICOS:
cantidad de DNA, RNA, proteínas,
peptidoglicano…por unidad de volumen de
cultivo.

- Medición de la ACTIVIDAD METABÓLICA:

bacterias que respiran consumen el oxigeno
del medio disminuyendo el potencial redox
(se usan colorantes sensibles a la oxidación-
reducción. Ej: azul de metileno)
O generación de CO2 indica indirectamente
el número de bacterias presentes.

37
 Revisión de conceptos para ayudar a
alcanzar los resultados del aprendizaje
1. Indicar las fases que comprenden la fisión binaria.
2. Defina lo que es el tiempo de generación y cómo se
calcula
3. Una diferencia entre la densidad óptica y el contaje de
células viables.
4. Una bacteria ha mutado en el laboratorio y no tiene la
proteína Fts K. Explique las consecuencias de esta
mutación para esta bacteria. Y si muta la Fts Z?
5. Explique qué esperaría de los valores de absorbancia
en un cultivo que esté en fase exponencial.
6. Haga el diagrama de cómo prepararía una serie 7 de
diluciones de la muestra.
38