UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL

CURSO BIOQUIMICA, CICLO 2018-I

PRÁCTICA 6
DETERMINACION DE COLESTEROL TOTAL EN SUERO/PLASMA.

INTRODUCCIÓN

El colesterol es una molécula grasa presente en las células del organismo y necesaria para
mantener los procesos bioquímicos. Sus funciones son estructurales, formación de la bilis, la
vitamina D, hormonas esteroideas, entre otras.
La elevación de colesterol en la sangre por encima de los niveles normales, puede asociarse a
problemas metabólicos.

Fundamento del método enzimático (según casa Valtek): El colesterol libre se obtiene a partir
del colesterol esterificado por la acción de la enzima colesterol ester hidrolasa (CEH), este
colesterol libre es oxidado por la enzima colesterol oxidasa (CHOD) produciéndose agua
oxigenada (H2O2), esta última, en presencia de la enzima peroxidasa (POD) reacciona con el
ácido p-hidroxibenzoico (p-HBA) y la 4-aminoantipirina (4-AAP), dando lugar a la formación de un
complejo coloreado (rojo cereza) que es directamente proporcional a la cantidad de glucosa
presente en la muestra.

Colesterol éster CEH Colesterol + ácidos grasos

Colesterol + O2 CHOD Colesterol-4-en-3-ona + H2O2

2H2O2 + 4-AAP + p-HBA POD Complejo coloreado + 4H2O

COMPETENCIAS

COGNITIVA:
- Conoce la importancia de los niveles de colesterol y su determinación en el suero/ plasma
sanguíneo.

PROCEDIMENTAL:
- Demuestra experimentalmente la concentración de colesterol de una muestra problema
mediante el método enzimático.

ACTITUDINAL:
- Valora el trabajo en grupo y la interacción con los profesores.

MATERIALES

- Reactivo de trabajo, estándar de colesterol ……… mg/dl, agua destilada, suero/plasma de

alumnos(as), materiales diversos.
- 01 plumón rotulador, 02 pares de guantes (por mesa).
PROCEDIMIENTOS

OBTENCION DE LA MUESTRA PROBLEMA (SUERO o PLASMA)

Extraer 3 mL. de sangre (con sistema al vacío, aguja libre o jeringa) y separar el suero o plasma
previa centrifugación.

PROTOCOLO

Preparar la siguiente batería de tubos: Blanco (B), el Estandar (St) y Muestra Problema (MP):

TUBO MP St B
mL. Suero o plasma 0.01 - -
mL. Estándar de colesterol ……. mg/dl - 0.01 -
mL. Reactivo de trabajo colesterol 1.0 1.0 1.0

Mezclar e Incubar en baño maría a 37°C por 5 minutos (10 minutos a temperatura ambiente).
Terminado el tiempo, leer las absorbancias en el espectrofotómetro a 505 nm.

Encontrar la concentración de colesterol (mg/dL o mg%) en la muestra problema (suero o plasma),

mediante la siguiente fórmula:

[COLESTEROL mg/dL] = [ St ] x A MP - B x Fd
A St - B

Comparar con los VALORES NORMALES: 140 a 200 mg/dl

(La reacción es lineal hasta 600 mg/dl.)

Reforzar:

1. Método enzimático de la determinación de colesterol.

2. Fracciones del colesterol. Propiedades fisiológicas y metabolismo del colesterol “bueno” y el
colesterol “malo”.
3. Importancia de la determinación de colesterol en muestras medioambientales.

BIBLIOGRAFÍA:

 Bohinski, R.C. 1991. Bioquímica Addison- Wesley Iberoamericana S.A. Wilmington, Delaware,
USA.
 Biochemical Nomenclature Committes. Web: www.chem.qmul.ac.uk/iupac/jcbn/index.html#6.
 Christensen H.N, Palmer G.A. 1980. Cinética Enzimática. Editorial Reverté S.A. Barcelona.
España.
 Villavicencio M. Texto de bioquímica; volúmenes 1 y 2. Concytec. 2010.

Mg Blgo. Oscar Acosta C.

Responsable
Bioquímica
Ing. Ambiental 2018-I