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PRÁCTICA 7
DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA.
INTRODUCCIÓN
Proteínas totales: El método se basa en la reacción de Biuret, en la cual los enlaces peptídicos
reaccionan, en medio alcalino, con sulfato de cobre para formar un complejo azul-violeta. La
intensidad del color es proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.
Albúmina: El método se basa en la unión de la albúmina al indicador Verde de bromo cresol.
COMPETENCIAS
COGNITIVA:
- Establece la importancia de los niveles proteínas y su determinación en el suero o plasma.
PROCEDIMENTAL:
- Determina la concentración de proteínas totales y albumina de una muestra problema (suero o
plasma) mediante el método enzimático.
ACTITUDINAL:
- Discute sobre la determinación de los niveles de proteínas y albúmina y su importancia.
- Promueve el trabajo en grupo y la interacción con los profesores.
MATERIALES
- Reactivos Biuret y Verde de Bromocresol, estándar de proteínas totales (6.0 g/dL) y albúmina
(3.1 g/dL), agua destilada, suero o plasma alumnos(as) u otras personas, materiales diversos.
- 01 plumón rotulador (por mesa).
PROCEDIMIENTOS
Extraer 3 mL. de sangre (con sistema al vacío, aguja libre o jeringa) y separar el suero o plasma
previa centrifugación.
Preparar la siguiente batería de tubos: Blanco (B), el Estandar (St) y Muestra Problema (MP):
TUBO B St MP
mL. Suero o plasma puro - - 0.01
mL. Estándar de proteínas 6.0 g/dL - 0.01 -
mL. Reactivo Biuret 1.0 1.0 1.0
Mezclar e Incubar en baño maría a 37°C por 10 minutos. Terminado el tiempo, leer las
absorbancias de los tubos a 540 nm. Encontrar la concentración de proteínas totales (g/dL o g%)
en la muestra problema (suero o plasma), mediante la siguiente fórmula:
[Proteínas g/dL] = [ St ] x A mp - bl x Fd
A st - bl
Preparar la siguiente batería de tubos: Blanco (B), el Estandar (St) y Muestra Problema (MP):
TUBO B St MP
ml. Suero o plasma puro - - 0.01
ml. Estándar de albúmina 3,1 g/dL - 0.01 -
ml. Reactivo Verde Bromo Cresol 1.0 1.0 1.0
Mezclar y dejar a temperatura ambiente por 3 minutos. Terminado el tiempo, leer las absorbancias
a 620 nm. Encontrar la concentración de albúmina (mg/dL o mg%) en la muestra problema (suero
o plasma), mediante la siguiente fórmula:
[Albúmina g/dL] = [ St ] x A mp - bl x Fd
A st - bl
Reforzar: