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TRATADA Y CRUDA

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1. Método de Ensayo

Determinación de Mercurio por Espectrofotometría de Absorción Atómica-


Vapor Frio para Aguas (Tratada y Cruda) (Tratamiento de las muestras
mediante digestión con ácido nítrico, sulfúrico y permanganato de potasio
(si se tiene materia orgánica a 100°C))
Código del Instructivo: (123-LAA-INT-51).

2. Responsable (s)

Ariel Felipe Arcila Z.

3. Materiales y Reactivos

MATERIALES REACTIVOS
Descripción Cantidad Descripción Cantidad
Beaker de 200 ml 4 Solución patrón de 1000mg/l de Hg 20 ml
Bureta de 25 ml 1 Agua destilada 20000 ml
Matraz de 200 ml 16 Acido Nítrico 65% 1240 ml
Matraz de 100 ml 2 Acido Sulfúrico 98% 1600 ml
Matraz de 250 ml 1 Permanganato de Potasio 500 g
Pipeta Graduada de1 ml 2 Sulfato de Hidroxilamina 480 g
Pipeta Graduada de 15 ml 1 Cloruro Estañoso 400 g
Pipeta volumétrica de10 ml 5
Winklers 16

3.1 Equipos

Espectrofotómetro de absorción atómica SHIMADZU AA-700


Generador de vapor frio SHIMADZU
Baño María

4. Preparación de la Curva de Calibración

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4.1. Solución madre de Mercurio (10 mg/L)

INICIO Tomar 1mL de solución estándar Aforar a 100 mL


PANREAC de 1000 ppm

FIN

Solución estándar de Mercurio (0,02 mg/L)

Tomar 1mL de solución madre de


INICIO mercurio (10 mg/L) Aforar hasta 500mL

FIN
Patrones curva de calibración Mercurio

Tomar el volumen en bureta necesario de la solución estándar de


Mercurio (0,02 mg / L) para preparar cada uno de los patrones de
INICIO
acuerdo a la siguiente tabla

Volumen de
Concentración Solución estándar
Patrón
a tomar
(µg/L) (mL)
Blanco 0,0 0,0
1 0,5 5
2 0,75 7,5
3 1 10
4 2 20
5 3 30

Aforar cada uno de los patrones a 200 mL con agua


desionizada

Pasar los patrones antes preparados a 6 winklers


previamente lavados con ácido nítrico al 10% y realizar el
FIN proceso de digestión de muestras sin materia orgánica.

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4.2. Soluciones para la verificación

üBK: Blanco de reactivos. (Agua desionizada)


üBb: Estándar de concentración baja. (0,8 µg/L para Hg)
üBa: Estándar de concentración alta. Aproximadamente el 90% del rango.
(2,5 µg/L para Hg)
üBKAT: Blanco agua tratada
üM1AT: Muestra natural para ver efectos en la matriz real. (Agua Cruda +
0,8 µg/l Hg)
üM2AT: Muestra natural para ver efectos en la matriz real. (Agua Cruda +
2,5 µg/l Hg)
üBKAC: Blanco agua cruda
üM1AC: Muestra natural para ver efectos en la matriz real. (Agua Tratada
0,8 µg/l Hg)
üM2AC: Muestra natural para ver efectos en la matriz real. (Agua Tratada
2,5 µg/l Hg)

4.2.1 Preparación de soluciones para la verificación

Tomar el volumen en bureta necesario de la solución estándar de


Mercurio (0,02 mg / L) para preparar cada uno de las soluciones de
INICIO
verificación.

Volumen de
Concentración Solución estándar
Patrón
a tomar
(µg/L) (mL)
üBK 0,0 0,0
üBb 0,8 8
üBa 2,5 25

Aforar cada uno de los patrones a 200 mL con agua


desionizada

Pasar los patrones antes preparados a 6 winklers


FIN previamente lavados con ácido nítrico al 10% y realizar el
4.2.2. proceso de digestión de muestras sin materia orgánica.

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Preparación de muestras adicionadas

Tomar el volumen en bureta necesario de la solución estándar de


INICIO Mercurio (0,02 mg / L) para preparar cada uno de los patrones de
acuerdo a la siguiente tabla

Volumen de
Concentración
Patrón Solución estándar
(µg/L)
a tomar (ml)

üBKAT 0,0 0,0


üM1AT 0,8 8
üM2AT 2,5 25
üBKAC 0 0
üM1AC 0,8 8
üM2AC 2,5 25

Aforar cada uno de los patrones a 200 mL con agua Según


la matriz de análisis.

Pasar los patrones antes preparados a 6 winklers


previamente lavados con ácido nítrico al 10%

FIN

Nota: La muestra queda lista para determinar su concentración por


espectrofotometría de absorción atómica-vapor frio.
La determinación de mercurio en el equipo de absorción atómica SHIMADZU AA-
7000 debe ser programada a través del software WizAArd, instalado en su PC. Se
recomienda atender recomendaciones del instructivo 123-LAA-INT-23.

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5 RESULTADOS

5.1 RANGO DE TRABAJO

0,50 – 3,00 µg Hg/L

5.2 MEDICIONES REALIZADAS

Se realizaron 15 curvas de calibración de Mercurio y la posterior lectura de 6


réplicas de cada solución durante 2 días diferentes para evaluar la
repetibilidad y reproducibilidad.

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REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD

Fecha üM1AT üM2AT Fecha üM1AC üM2AC


0,9026 2,6409 0,8061 2,5698
0,8339 2,7686 0,8594 2,6082
0,8732 2,6311 0,7279 2,9263
13/09/2012 08/11/2012
0,8732 2,7407 0,8011 2,6648
0,8666 2,6736 0,8195 2,6748
0,6997 2,5623 0,7945 2,6365
Media 0,8415 2,6695 0,8014 2,6800
Desviación
0,0729 0,0757 0,0428 0,1266
estándar
Coeficiente de
8,6586 2,8373 5,3443 4,7224
variación
Varianza de la
0,0053 0,0057 0,0018 0,0160
muestra
Mínimo 0,6997 2,5623 0,7279 2,5698
Máximo 0,9026 2,7686 0,8594 2,9263

Datos del porcentaje de error y porcentaje de Recuperación.

Agua Tratada

Tipo Concentración (ppb) % de Error % Recuperación


H2O Tratada + 0,8 ppb Hg (1) 0,9026 12,8250 112,825
H2O Tratada + 0,8 ppb Hg (2) 0,8339 4,2375 104,2375
H2O Tratada + 0,8 ppb Hg (3) 0,8732 9,1500 109,15
H2O Tratada + 0,8 ppb Hg (4) 0,8732 9,1500 109,15
H2O Tratada + 0,8 ppb Hg (5) 0,8666 8,3250 108,325
H2O Tratada + 0,8 ppb Hg (6) 0,6996 12,5500 87,45
Media 0,8415 9,3729 105,1896
H2O Tratada + 2,5 ppb Hg (1) 2,6409 5,6360 105,636
H2O Tratada + 2,5 ppb Hg (2) 2,7686 10,7440 110,744
H2O Tratada + 2,5 ppb Hg (3) 2,6311 5,2440 105,244
H2O Tratada + 2,5 ppb Hg (4) 2,7407 9,6280 109,628
H2O Tratada + 2,5 ppb Hg (5) 2,6736 6,9440 106,944
H2O Tratada + 2,5 ppb Hg (6) 2,5623 2,4920 102,492
Media 2,6695 6,7813 106,7813

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Agua Tratada

Tipo Concentración (ppb) % de Error % Recuperación


H2O Cruda + 0,8 ppb Hg (1) 0,8061 0,7678 100,7677703
H2O Cruda + 0,8 ppb Hg (2) 0,8594 7,4296 107,4295517
H2O Cruda + 0,8 ppb Hg (3) 0,7279 9,0167 90,98327893
H2O Cruda + 0,8 ppb Hg (4) 0,8011 0,1432 100,1432283
H2O Cruda + 0,8 ppb Hg (5) 0,8195 2,4332 102,4332156
H2O Cruda + 0,8 ppb Hg (6) 0,7945 0,6895 99,31050563
Media 0,8014 3,4133 100,1779
H2O Cruda + 2,5 ppb Hg (1) 2,5698 2,7940 102,7939511
H2O Cruda + 2,5 ppb Hg (2) 2,6082 4,3262 104,3261608
H2O Cruda + 2,5 ppb Hg (3) 2,9263 17,0502 117,0501632
H2O Cruda + 2,5 ppb Hg (4) 2,6648 6,5912 106,5911665
H2O Cruda + 2,5 ppb Hg (5) 2,6748 6,9909 106,9908734
H2O Cruda + 2,5 ppb Hg (6) 2,6365 5,4587 105,4586636
Media 2,6800 7,2018 107,2018

6 ANÁLISIS DE RESULTADOS

6.1 PRUEBA DE LINEALIDAD (Prueba de Fisher)

Se realiza un promedio de los valores obtenidos de la concentración y


la respectiva absorbancia de las ultimas siete curvas de calibración y
se grafican dichos valores promedio.

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Curva de Calibracion Promedio


0,1000
0,0900
Absorbancia Promedio

0,0800
0,0700
0,0600
0,0500
0,0400
0,0300
0,0200
0,0100
0,0000
0,0000 0,5000 1,0000 1,5000 2,0000 2,5000 3,0000 3,5000
y = 0,0292x + 0,0014 Concentracion de Hg (ppb)
R² = 0,9986

Planteamiento de la Hipótesis:

Ho: No existe correlación entre los valores de X y Y


Hi: Existe correlación ente los valores de X y Y

Datos prueba de linealidad.


Criterio de
Coeficiente de Prueba de
2 Tcal Ttabla rechazo de Ho:
correlación (r ) linealidad
Tcal>Ttabla
r 2 (n  2) Existe
0,9986 t 53,37 2,36 correlación entre
(1  r 2 ) XyY

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6.2 CARACTERÍSTICAS DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN

Pendiente Ordenada Denominación


0,0292 0,0014 Yb
Desviación Estándar
Sb
de la pendiente
2
R 0,9986 Sy/x
R 0,9992
Limite de detección de Limite de detección en
la señal mg/L

6.3 REPETIBILIDAD (Precisión)

Para este atributo del método de ensayo se considera el coeficiente de variación


obtenido de las lecturas de las muestras adicionadas en agua cruda y agua
tratada.
El criterio de aceptación es que el coeficiente de variación debe ser menor a 10%:

Coeficiente de variación Muestra adicionada (Agua Cruda + 0,8 µg/l Hg): 5,3443%

Coeficiente de variación Muestra adicionada (Agua Cruda + 2,5 µg/l Hg): 4,7224%

Coeficiente de variación Muestra adicionada (Agua Tratada 0,8 µg/l Hg): 8,6586%

Coeficiente de variación Muestra adicionada (Agua Tratada 2,5 µg/l Hg): 2,8373%

6.4 EXACTITUD

El porcentaje de Exactitud se determina a partir las muestras adicionadas en agua


cruda y agua tratada.
El criterio de aceptación es que el % de error debe ser menor a 10%:

Para la muestra adicionada de (Agua Cruda + 0,8 µg/l Hg):


% Error = 3,4133%.

Para la muestra adicionada de (Agua Cruda + 2,5 µg/l Hg):


% Error = 7,2180%.

Para la muestra adicionada de (Agua Tratada + 0,8 µg/l Hg):


% Error = 9,3729%.

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Para la muestra adicionada de (Agua Tratada + 2,5 µg/l Hg):


% Error = 6,7813%.

6.5 PORCENTAJE DE RECUPERACIÓN

El porcentaje de recuperación para el Mercurio en aguas tratada y cruda se


determina a partir las muestras adicionadas en agua cruda y agua tratada.
El criterio de aceptación es que el % de recuperación debe estar entre 75 y 125%:

Para la muestra adicionada de (Agua Cruda + 0,8 µg/l Hg):


% de Recuperación = 100,1779%.

Para la muestra adicionada de (Agua Cruda + 2,5 µg/l Hg):


% de Recuperación = 107,2018%.

Para la muestra adicionada de (Agua Tratada + 0,8 µg/l Hg):


% de Recuperación = 105,1896%.

Para la muestra adicionada de (Agua Tratada + 2,5 µg/l Hg):


% de Recuperación = 106,7813%.

6.6 LIMITE DE DETECCIÓN

El límite de detección se calcula teniendo en cuenta 3 veces la desviación de la


muestra adicionada de (Agua Cruda + 0,8 µg/l Hg) para agua cruda y 10 veces la
desviación estándar de la muestra adicionada de (Agua Tratada + 0,8 µg/l Hg)
para agua tratada:

L.D Agua Cruda = 0,1284 µg de Hg/L


L.D Agua Tratada = 0,2187 µg de Hg/L

6.7 LIMITE DE CUANTIFICACIÓN

El límite de cuantificación se calcula teniendo en cuenta 10 veces la desviación de


la muestra adicionada de (Agua Cruda + 0,8 µg/l Hg) para agua cruda y 10 veces
la desviación estándar de la muestra adicionada de (Agua Tratada + 0,8 µg/l Hg)
para agua tratada:

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L.C Agua Cruda = 0,428 µg de Hg/L


L.C Agua Tratada = 0,729 µg de Hg/L

7 CONCLUSIONES

Para las condiciones de trabajo establecidas en el proceso de verificación para


la determinación de Mercurio en muestras de Agua cruda y tratada (µg Hg/L)
por el método de espectrofotometría de absorción atómica-vapor frio
(Tratamiento de las muestras mediante digestión con ácido nítrico, ácido
sulfúrico y permanganato de potasio a 100 °C) del Laboratorio de Análisis de
Aguas y Alimentos se establecieron las siguientes conclusiones:

El rango de trabajo para el método está entre 0,5 y 3,0 mg/L utilizando estádar
de 1000 mg/L de Mercurio.

El límite de detección del método es de:

L.D Agua Cruda = 0,1284 µg de Hg/L


L.D Agua Tratada = 0,2187 µg de Hg/L

El límite de cuantificación del método es de:

L.C Agua Cruda = 0,428 µg de Hg/L


L.C Agua Tratada = 0,729 µg de Hg/L

Características Expresada en Muestra Datos obtenidos


Agua cruda + 0,8 ppb Hg 5,3443
Agua cruda + 2,5 ppb Hg 4,7224
Precisión % coeficiente de variación
Agua Tratada + 0,8 ppb Hg 8,8568
Agua Tratada + 2,5 ppb Hg 2,8373
Agua cruda + 0,8 ppb Hg 3,4133
Agua cruda + 2,5 ppb Hg 7,2180
Exactitud % error
Agua Tratada + 0,8 ppb Hg 9,3729
Agua Tratada + 2,5 ppb Hg 6,7813
Linealidad Coeficiente de correlación 0,9986
Agua cruda + 0,8 ppb Hg 100.1779
Agua cruda + 2,5 ppb Hg 107.18
% de recuperación Porcentaje
Agua Tratada + 0,8 ppb Hg 105.1896
Agua Tratada + 2,5 ppb Hg 106.7813

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LABORATORIO DE ANÁLISIS DE AGUAS Y ALIMENTOS

Establecer el procedimiento para determinar la concentración de Mercurio en aguas por el


método de absorción atómica-vapor frio en el Laboratorio de Análisis de Aguas y
Alimentos de la Universidad Tecnológica de Pereira

1. CONTENIDO
La espectrofotometría de absorción atómica está fundamentada en la capacidad que
tienen los elementos, en su estado atómico basal, de absorber radiación electromagnética
a longitudes de onda específicas para cada elemento. La cantidad de energía absorbida
es directamente proporcional a la concentración de los átomos del metal analizado, de
acuerdo con la Ley de Lambert-Beer. los límites de detección logrados son del orden de
ppm (partes por millón).
En esta técnica, los metales disueltos son llevados a su forma atómica elemental
mediante calentamiento por una llama generada por una mezcla de gases combustibles.
Las mezclas más empleadas son: aire-acetileno y óxido nitroso-acetileno. Las
temperaturas de la llama van de 1900 °C a 2800 °C.
Los átomos en forma de nube gaseosa, son irradiados por un haz de luz de una longitud
de onda específica, de acuerdo con el metal analizado; esto se logra mediante el empleo
de lámparas con cátodo del metal de interés o con lámparas de descarga sin electrodo.
Los átomos absorben una fracción de la radiación proveniente de la lámpara y la fracción
restante es captada por un fotodetector y un dispositivo transductor, que la convierten en
una señal eléctrica, que posteriormente es registrada por un software.
Como se mencionó anteriormente, el valor de señal obtenido es proporcional a la
concentración de los átomos presentes en la nube de gases; de este modo es posible
construir una curva de calibración analizando soluciones patrón de concentración
conocida y midiendo la magnitud de la absorción de cada una de ellas.

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Un caso particular en la técnica de absorción atómica, lo constituye el mercurio, ya que


gracias a su volatilidad, no requiere el uso de llama para atomizarse y puede determinarse
en forma de vapor frío. Mediante esta técnica se alcanzan límites de detección del orden
de 1 ppb.
La determinación se realiza adicionando un agente reductor (cloruro estañoso o
borohidruro de sodio), al digerido. La reacción del mercurio en solución con el agente
reductor produce mercurio atómico muy volátil.
El vapor de mercurio es conducido hacia una celda colocada en el paso del haz de luz,
donde ocurre la interacción entre los átomos de mercurio y la radiación, produciéndose la
absorción.
Para la determinación de mercurio en agua se utiliza el espectrómetrofotometro de
absorción atómica SHIMADZU AA-7000 y un generador de vapor frio SHIMADZU ####
ubicado en la zona de análisis instrumental del laboratorio de Aguas y Alimentos.

2. INFORMACION ANTES DE INICIAR EL PROCESO

2.1 Interferencias
Interferencia es el efecto de un concomitante presente en la muestra sobre la señal
generada por el analito. La presencia de un interferente conduce en todos los casos a
un error sistemático.

Las interferencias más comunes para la determinación de mercurio en muestras de agua


cruda y tratada por espectroscopia de absorción atómica son:

 Las interferencias por materia orgánica, las cuales se reducen por medio de
digestiones con ácido nítrico concentrado, ácido sulfúrico concentrado,
permanganato de potasio y calor durante 1.5 horas, posteriormente se elimina el
color con cloruro de hidroxilamina y se procede a realizar la medición.
 Las interferencias por coloración en los vapores generados a la hora de la
medición.

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2.2. Recolección y Preservación de Muestras


2.2.1. Recolección de la Muestra
Lavar los recipientes para la recolección de muestras antes de usarlos con jabón y
enjuagarlos muy bien para quitar impurezas, luego enjuagarlos con agua desionizada.
Limpiar los recipientes para la recolección muestras con suficiente ácido nítrico al 10%
para eliminar rastros de analitos que puedan interferir con la determinación y enjuagar
con agua desionizada.

2.2.2. Preservación de la muestra


A la muestra recolectada se le debe adicionar ácido nítrico concentrado hasta obtener un
pH de 1, monitorear el pH en este valor y guardar la muestra refrigerada para ayudar con
su conservación, pero se debe tener en cuenta que las muestras deben ser analizadas
antes de dos meses, para mejores resultados.

2.3. Características del método


2.3.1. Límite de Detección: Para las muestras cuya concentración sea inferior al límite de
detección del método de acuerdo a 123-INT-LAA-017, reportar el mercurio como menor a
dicho valor.

2.3.2. Incertidumbre: Se debe seguir el procedimiento descrito en 123-INT-LAA-05


Instructivo para el cálculo de la Incertidumbre.

2.3.3. Robustez: Se realizara mediante pruebas F de acuerdo a 123-INT-LAA-017.

2.3.4 Precisión: De acuerdo a resultados obtenidos para coeficientes de variación de


acuerdo a 123-INT-LAA-017

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3. DESCRIPCIÓN DE MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS


3.1 Reactivos

Nombre Almacén P D R S CAS

Permanganato de O,Xn 8-22 ---


7722-64-7
Potasio
Cloruro de 20/22-
Xn 13-26-36 5470-11-1
Hidroxilamina 35/38
Ácido Sulfúrico
C 12 35 26-30-45 7664-93-9
Concentrado
Ácido nítrico 23-26-
Blanco C 12 35 7697-37-2
concentrado 36/37/39-45

22- 10025-69-
Cloruro Estañoso Xn 26
36/37/38 1
Estándar PANREAC 20/21/22
Xn -33- 26-36/37 7697-37-2
de Mercurio 1000 mg/L
36/38
Agua Desionizada
--- --- --- --- --- ----
Tipo I

D: Desactivación
R: Información de riesgo
S: Información de seguridad
P: Pictograma de seguridad
3.1.1 Residuos Generados
Código de Riesgos Consejos de
Nombre
colector específicos prudencia
Solución ácida D 35 26-30-45
Solución de sales de
35 26-30-45
metales pesados E
23-26-30-
Residuos de sales
H
metálicas regenerables 35 36/37/39-45

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3.2 Materiales
 Balones aforados de: 100 mL, 200 mL, 250 mL y 500 mL
 Pipetas aforadas de 1 mL, 5 mL, 25 mL, 50 mL y 100 mL.
 Pipetas graduadas de 2 mL, 5 mL, 10 mL
 Bureta de: 25 mL
 Beakers de: 50 mL, 100 mL
 Winklers
 Frasco lavador

3.3 Equipos

 Espectrofotómetro de absorción atómica.


 Lámpara de cátodo hueco de mercurio.
 Balanza analítica de precisión.
 Baño María.
 Generador de vapor frio.

4. NORMAS DE SEGURIDAD Y PRECAUCIONES

Lavar todo el material de vidrio con ácido nítrico al 10% para evitar contaminación de la muestra,
también se debe lavar los recipientes que se utilizaran en la toma de la muestra con ácido nítrico
al 10%. (Llevar el residuo generado al Colector D
Se debe tener en cuenta el uso de guantes y gafas de seguridad para evitar accidentes.
Se debe trabajar en la cabina de extracción de gases por los vapores generados durante
la conservación de la muestra, ya que estos pueden ser tóxicos.

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5. PROCEDIMIENTO
5.1 Preparación soluciones curva de calibración.
5.1.1 Solución madre de Mercurio (10 mg/L)

Tomar 1mL de solución


Aforar a 100 mL
estándar PANREAC de 1000
INICIO ppm

FIN

5.1.2 Solución estándar de Mercurio (0,02 mg/L)

Tomar 1mL de solución madre


INICIO de mercurio (10 mg/L) Aforar hasta 500mL

FIN

5.1.3 Patrones curva de calibración Mercurio


Tomar el volumen en bureta necesario de la
INICIO solución estándar de Mercurio (0,02 mg / L)
para preparar cada uno de los patrones de
acuerdo a la siguiente tabla

Volumen de
Concentración Solución estándar
Patrón
a tomar
(µg/L) (mL)
Blanco 0,0 0,0
1 0,5 5
2 0,75 7,5
3 1 10
4 2 20
5 3 30

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Tomar el volumen correspondiente y aforar cada


uno de los patrones a 200 mL con agua
Desionizada

Pasar los patrones antes preparados


a 6 winklers previamente lavados con
ácido nítrico al 10%

Agregar 4 mL de Ácido Nítrico


Concentrado y 4 mL de Ácido
Sulfúrico concentrado.

FIN

Rótulos para las soluciones estándar

LABORATORIO DE ANÁLISIS DE AGUAS Y ALIMENTOS

Fecha de preparación:
Metal, unidades
Fecha de expiración :

5.2 Preparación de las muestras

5.2.1. Preparación de solución de Permanganato de Potasio (0,05 g/mL)

INICIO Pesar 10 g de KMnO4 puro Diluir en 20 mL de agua


desionisada.

FIN Aforar hasta 200mL

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5.2.2. Preparación de solución de Cloruro de Hidroxilamina

INICIO Pesar 24 g de cloruro de Diluir en 20 mL de agua


Hidroxilamina puro desionisada.

FIN Aforar hasta 100mL

5.2.3. Digestión de las muestras de agua tratada.

Agregar 4 ml de Ácido
Adicionar 200 mL de agua Nítrico Concentrado y 4 mL
INICIO de ácido sulfúrico
en un winkler.
concentrado

Dejar reposar por 1


FIN hora.

5.2.4. Digestión de las muestras de agua cruda.


Agregar 2 ml de Ácido
Adicionar 200 mL de agua Nítrico Concentrado y 4 mL
INICIO
en un winkler. de ácido sulfúrico
concentrado

Calentar en baño maria a Agregar 15 ml de solución de


temperatura de 90°C durante 2 KMnO4 (0,05 g/mL).
horas

Dejar enfriar y agregar 4 ml de FIN


la solución de cloruro de
Hidroxilamina

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5.2.5. Preparación de la muestra


5.2.5.1. Preparación de solución de Cloruro Estañoso (0,1 g/mL)

INICIO Pesar 20 g de cloruro Diluir en 20 mL de Ácido


Estañoso puro Clorhídrico Concentrado.

FIN Aforar hasta 200mL

5.2.5.2. Preparación de la muestra para la medición.

Agregar 200 mL de la
INICIO solución patrón acidificada o Agregar 10 mL de solución
del agua tratada acidificada de cloruro estañoso
o del agua cruda digerirá en preparada
un vial del generador de
vapor frio.
Proceder a medir en el
equipo de absorción
FIN
atómica.

Nota1: La determinación de Mercurio se realizara en el equipo de absorción atómica


SHIMADZU AA-7000 debe ser programada a través del software WizAArd, instalado en su
PC. Se recomienda atender recomendaciones del instructivo 123-LAA-INT-23.
El software WizAArd permite realizar automáticamente controles para garantizar la calidad
de los datos, tales como coeficientes de correlación, verificación inicial de calibración,
verificación continúa de calibración en el transcurso de las lecturas de concentración de
las de las muestras, valores del blanco menores al límite de detección, entre otras.
Para la implementación de esta configuración en las condiciones de análisis de Mercurio
se expone a continuación cuáles serán las condiciones de calidad analítica adoptadas por
el laboratorio de Aguas y Alimentos para la aceptación de los datos entregados mediante
el software wizAArd.
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Se da clic en el botón [calibration curve setup] en la ventana de preparación de soluciones


estándar [preparation parameter], luego da click en la opción QC blank/ QCStandar Setup

5.3 Condiciones para el análisis mediante el software WizAArd

4 [CORR] Se determinara el valor ≥0.99 y las opciones “retry” y “pause “


(Correlation )

5 [%TV] (Self-
determined true Se determinara el valor entre 90% y 110% seleccionando la opción de
value) “retry” y “mark & continue”

6[ [ICV]initial Se tomara para esta verificación del estandar de la carta de control


calibration con un valor de 1,2 mg/l de calcio Los límites de tolerancia para este
validation valor fueron estipulados entre el 90% y 110 % de la solución
preparada

7 [ICB] (Initial Se adoptara el valor recomendado por la EPA es cual es de 0,5 mg/l
Calibration blank

8CCV]continuing Se tomara como valor de calibración el valor de 1,2 mg/l de Mercurio


calibration dando la opción de detener el análisis si no se cumplen los criterios de
verification aceptación.
9 CCB]
(Continuing Se adoptara el valor recomendado por la EPA es cual es de 0,5 mg/l
CALIB

10 ICV/CCV Se asignara la posición de la solución en el automuestreador.

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5.4 CARTAS DE CONTROL


En cada lectura realizada de mercurio a cualquier muestra se registrara el valor reportado
por el estándar de 1,2 µg/ L de Hg.

Tomar 12 mL de
Aforar a 200 mL con
INICIO solución estándar de
agua desionizada.
Mercurio de 20 ppb

Realizar la medición Realizar


FIN procedimiento
como se describe en el
digestión descrito en
numeral 5.2.5.2. el numeral 5.2.3.

Nota:
El valor obtenido de la concentración se registra y se grafica en el formato (123-LAA-F07).

6.0 CALCULOS Y RESULTADOS


En caso de que se haga dilución de la muestra, calcular la concentración de mercurio a
partir de la ecuación de la curva guardada en el equipo o graficada durante la realización
de la curva de calibración.

Si hubo dilución de la muestra aplicar la siguiente relación:

( g Metal / L)  Volumen final (mL)


g Metal / L 
Alícuota (mL)

Reportar el valor promedio de la concentración de mercurio en µg / L

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7.0 DOCUMENTO DE REFERENCIA

NTC-ISO 9000:2000 Sistema de gestión de calidad. Fundamentos y vocabulario.


Standard Methods For The Examination of Water And Wastewater. American Public Health
Association. 21st Edition. Washington, 2005. EATON, Andrew D. CLESCERI, Lenore S.
GREENBERG, Arnold E. Sección 3111 D. Método Directo llama Acetileno – Oxido Nitroso
Página 3-20.
Instructivo de operación de Espectrómetro de Absorción Atómica. 123-LAA-INT-23
Cook book. Equipo Absorción Atómica. Marca Shimadzu.

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Personal UTP Jefe de Calidad Director del Laboratorio de


Análisis de Aguas y Alimentos

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LABORATORIO DE ANÁLISIS DE AGUAS Y ALIMENTOS

Establecer el procedimiento para determinar la concentración de Mercurio en pescados


por el método de absorción atómica-vapor frio en el Laboratorio de Análisis de Aguas y
Alimentos de la Universidad Tecnológica de Pereira

1. CONTENIDO
La espectrofotometría de absorción atómica está fundamentada en la capacidad que
tienen los elementos, en su estado atómico basal, de absorber radiación electromagnética
a longitudes de onda específicas para cada elemento. La cantidad de energía absorbida
es directamente proporcional a la concentración de los átomos del metal analizado, de
acuerdo con la Ley de Lambert-Beer. Los límites de detección logrados son del orden de
ppm (partes por millón).
En esta técnica, los metales disueltos son llevados a su forma atómica elemental
mediante calentamiento por una llama generada por una mezcla de gases combustibles.
Las mezclas más empleadas son: aire-acetileno y óxido nitroso-acetileno. Las
temperaturas de la llama van de 1900 °C a 2800 °C.
Los átomos en forma de nube gaseosa, son irradiados por un haz de luz de una longitud
de onda específica, de acuerdo con el metal analizado; esto se logra mediante el empleo
de lámparas con cátodo del metal de interés o con lámparas de descarga sin electrodo.
Los átomos absorben una fracción de la radiación proveniente de la lámpara y la fracción
restante es captada por un fotodetector y un dispositivo transductor, que la convierten en
una señal eléctrica, que posteriormente es registrada por un software.
Como se mencionó anteriormente, el valor de señal obtenido es proporcional a la
concentración de los átomos presentes en la nube de gases; de este modo es posible
construir una curva de calibración analizando soluciones patrón de concentración
conocida y midiendo la magnitud de la absorción de cada una de ellas.

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Un caso particular en la técnica de absorción atómica, lo constituye el mercurio, ya que


gracias a su volatilidad, no requiere el uso de llama para atomizarse y puede determinarse
en forma de vapor frío. Mediante esta técnica se alcanzan límites de detección del orden
de 1 ppb.
La determinación se realiza adicionando un agente reductor (cloruro estañoso o
borohidruro de sodio), al digerido. La reacción del mercurio en solución con el agente
reductor produce mercurio atómico muy volátil.
El vapor de mercurio es conducido hacia una celda colocada en el paso del haz de luz,
donde ocurre la interacción entre los átomos de mercurio y la radiación, produciéndose la
absorción.
Para la determinación de mercurio en pescados se utiliza el espectrómetrofotometro de
absorción atómica SHIMADZU AA-7000 y un generador de vapor frio SHIMADZU ####
ubicado en la zona de análisis instrumental del laboratorio de Aguas y Alimentos.

2. INFORMACION ANTES DE INICIAR EL PROCESO

2.1 Interferencias
Interferencia es el efecto de un concomitante presente en la muestra sobre la señal
generada por el analito. La presencia de un interferente conduce en todos los casos a
un error sistemático.

Las interferencias más comunes para la determinación de mercurio en muestras de


pescados por espectroscopia de absorción atómica son:

 Las interferencias por materia orgánica, las cuales se reducen por medio de
digestiones con ácido nítrico concentrado, ácido sulfúrico concentrado,
permanganato de potasio y calor durante 2 horas, posteriormente se elimina el
color con cloruro de hidroxilamina y se procede a realizar la medición.
 Las interferencias por coloración en los vapores generados a la hora de la
medición.

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2.2. Recolección y Preservación de Muestras


2.2.1. Recolección de la Muestra
Lavar las nevera para la recolección de muestras antes de usarlos con jabón y
enjuagarlos muy bien para quitar impurezas, luego enjuagarlos con agua desionizada.
Limpiar las neveras para la recolección muestras con suficiente ácido nítrico al 10% para
eliminar rastros de analitos que puedan interferir con la determinación y enjuagar con
agua desionizada.

2.2.2. Preservación de la muestra


A la muestra recolectada se debe congelar y tener en cuenta que las muestras deben ser
analizadas antes de seis meses, para mejores resultados.

2.3. Características del método


2.3.1. Límite de Detección: Para las muestras cuya concentración sea inferior al límite de
detección del método de acuerdo a 123-INT-LAA-017, reportar el mercurio como menor a
dicho valor.

2.3.2. Incertidumbre: Se debe seguir el procedimiento descrito en 123-INT-LAA-05


Instructivo para el cálculo de la Incertidumbre.

2.3.3. Robustez: Se realizara mediante pruebas F de acuerdo a 123-INT-LAA-017.

2.3.4 Precisión: De acuerdo a resultados obtenidos para coeficientes de variación de


acuerdo a 123-INT-LAA-017

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3. DESCRIPCIÓN DE MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS


3.1 Reactivos

Nombre Almacén P D R S CAS

Permanganato de
O,Xn 8-22 ---
7722-64-7
Potasio
Cloruro de 20/22-
Xn 13-26-36 5470-11-1
Hidroxilamina 35/38
Ácido Sulfúrico
C 12 35 26-30-45 7664-93-9
Concentrado
Ácido nítrico 23-26-
Blanco C 12 35 7697-37-2
concentrado 36/37/39-45

22- 10025-69-
Cloruro Estañoso Xn 26
36/37/38 1
Estándar PANREAC de
Xn 20/21/22-
26-36/37 7697-37-2
Mercurio 1000 mg/L 33-36/38
Agua Desionizada
--- --- --- --- --- ----
Tipo I

D: Desactivación
R: Información de riesgo
S: Información de seguridad
P: Pictograma de seguridad

3.1.1 Residuos Generados


Código de Riesgos Consejos de
Nombre
colector específicos prudencia
Solución ácida D 35 26-30-45
Solución de sales de
35 26-30-45
metales pesados E
Residuos de sales 23-26-30-

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metálicas regenerables H 35 36/37/39-45

3.2 Materiales
 Balones aforados de: 100 mL, 200 mL, 250 mL y 500 mL
 Pipetas aforadas de 1 mL, 5 mL, 25 mL, 50 mL y 100 mL.
 Pipetas graduadas de 2 mL, 5 mL, 10 mL
 Bureta de: 25 mL
 Beakers de: 50 mL, 100 mL
 Soxleth de 250 mL
 Condensador
 Balón de digestión de 200 mL
 Soporte universal
 Pinzas
 Nueces
 Frasco lavador

3.3 Equipos

 Espectrofotómetro de absorción atómica.


 Lámpara de cátodo hueco de mercurio.
 Balanza analítica de precisión.
 Estufa
 Generador de vapor frio.

4. NORMAS DE SEGURIDAD Y PRECAUCIONES

Lavar todo el material de vidrio con ácido nítrico al 10% para evitar contaminación de la muestra,
también se debe lavar los recipientes que se utilizaran en la toma de la muestra con ácido nítrico
al 10%. (Llevar el residuo generado al Colector D).
Se debe tener en cuenta el uso de guantes y gafas de seguridad para evitar accidentes.
Se debe trabajar en la cabina de extracción de gases por los vapores generados durante
la conservación de la muestra, ya que estos pueden ser tóxicos.

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5. PROCEDIMIENTO
5.1 Preparación soluciones curva de calibración.
5.1.1 Solución madre de Mercurio (10 mg/L)

Tomar 1mL de solución


Aforar a 100 mL
estándar PANREAC de 1000
INICIO ppm

FIN

5.1.2 Solución estándar de Mercurio (0,02 mg/L)

Tomar 1mL de solución madre


INICIO de mercurio (10 mg/L) Aforar hasta 500mL

FIN

5.1.3 Patrones curva de calibración Mercurio


Tomar el volumen en bureta necesario de la
INICIO solución estándar de Mercurio (0,02 mg / L)
para preparar cada uno de los patrones de
acuerdo a la siguiente tabla

Volumen de
Concentración Solución estándar
Patrón
a tomar
(µg/L) (mL)
Blanco 0,0 0,0
1 0,5 5
2 0,75 7,5
3 1 10
4 2 20
5 3 30

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Tomar el volumen correspondiente y aforar cada


uno de los patrones a 200 mL con agua
Desionizada

Pasar los patrones antes preparados


a 6 winklers previamente lavados con
ácido nítrico al 10%

Agregar 4 mL de Ácido Nítrico


Concentrado y 4 mL de Ácido
Sulfúrico concentrado.

FIN

Rótulos para las soluciones estándar

LABORATORIO DE ANÁLISIS DE AGUAS Y ALIMENTOS

Fecha de preparación:
Metal, unidades
Fecha de expiración :

5.2 Preparación de las muestras

5.2.1 Preparación de solución de Cloruro de Hidroxilamina

INICIO Pesar 24 g de cloruro de Diluir en 20 mL de agua


Hidroxilamina puro desionizada.

FIN Aforar hasta 100mL


.

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5.2.2. Digestión de las muestras de Pescados

Adicionar 1 g del pescado al Agregar al embudo de


balón de digestión y lavar separación 20 ml de HNO3 y
INICIO con 20 ml de agua 10 ml de H2SO4
desionizada.

Calentar durante una Dejar enfría y Calentar durante una hora


hora adicionando agregar 1 g de adicionando porciones de
porciones de agua KMnO4 agua desionizada por el
desionizada por el condensador.
condensador

Dejar enfriar y agregar 12 Filtrar la solución por Aforar el filtrado a 200 ml


ml de Hidroxilamina gravedad y proceder a medir.

FIN
5.2.3. Preparación de la muestra
5.2.3.1. Preparación de solución de Cloruro Estañoso (0,1 g/mL)

INICIO Pesar 20 g de cloruro Diluir en 20 mL de Ácido


Estañoso puro. Clorhídrico Concentrado.

FIN Aforar hasta 200mL

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5.2.3.2. Preparación de la muestra para la medición.

Agregar 200 mL de la
INICIO solución patrón acidificada o Agregar 10 mL de solución
de la solución resultante de de cloruro estañoso
la digestin del pescado un preparada.
vial del generador de vapor
frio.
Proceder a medir en el
equipo de absorción
FIN atómica.

Nota1: La determinación de Mercurio se realizara en el equipo de absorción atómica


SHIMADZU AA-7000 debe ser programada a través del software WizAArd, instalado en su
PC. Se recomienda atender recomendaciones del instructivo 123-LAA-INT-23.
El software WizAArd permite realizar automáticamente controles para garantizar la calidad
de los datos, tales como coeficientes de correlación, verificación inicial de calibración,
verificación continúa de calibración en el transcurso de las lecturas de concentración de
las de las muestras, valores del blanco menores al límite de detección, entre otras.
Para la implementación de esta configuración en las condiciones de análisis de Mercurio
se expone a continuación cuáles serán las condiciones de calidad analítica adoptadas por
el laboratorio de Aguas y Alimentos para la aceptación de los datos entregados mediante
el software wizAArd.
Se da clic en el botón [calibration curve setup] en la ventana de preparación de soluciones
estándar [preparation parameter], luego da click en la opción QC blank/ QCStandar Setup

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5.3 Condiciones para el análisis mediante el software WizAArd

4 [CORR] Se determinara el valor ≥0.99 y las opciones “retry” y “pause “


(Correlation )

5 [%TV] (Self-
determined true Se determinara el valor entre 90% y 110% seleccionando la opción de
value) “retry” y “mark & continue”

6[ [ICV]initial Se tomara para esta verificación del estandar de la carta de control


calibration con un valor de 1,2 mg/l de calcio Los límites de tolerancia para este
validation valor fueron estipulados entre el 90% y 110 % de la solución
preparada

7 [ICB] (Initial Se adoptara el valor recomendado por la EPA es cual es de 0,5 mg/l
Calibration blank

8CCV]continuing Se tomara como valor de calibración el valor de 1,2 mg/l de Mercurio


calibration dando la opción de detener el análisis si no se cumplen los criterios de
verification aceptación.
9 CCB]
(Continuing Se adoptara el valor recomendado por la EPA es cual es de 0,5 mg/l
CALIB

10 ICV/CCV Se asignara la posición de la solución en el automuestreador.

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5.4 CARTAS DE CONTROL


En cada lectura realizada de mercurio a cualquier muestra se registrara el valor reportado
por el estándar de 1,2 µg/ L de Hg.

Tomar 12 mL de
Aforar a 200 mL con
INICIO solución estándar de
agua desionizada.
Mercurio de 20 ppb.

Realizar la medición Realizar


FIN procedimiento
como se describe en el
digestión descrito en
numeral 5.2.3.2. el numeral 5.2.3.

Nota:
El valor obtenido de la concentración se registra y se grafica en el formato (123-LAA-F07).

6.0 CALCULOS Y RESULTADOS


En caso de que se haga dilución de la muestra, calcular la concentración de mercurio a
partir de la ecuación de la curva guardada en el equipo o graficada durante la realización
de la curva de calibración.

Si hubo dilución de la muestra aplicar la siguiente relación:

( g de Hg / L)  Volumen Aforo ( L)
mg Metal / 100 g ( pescado)  * 10
Masa de Pescado usada( g )

Reportar el valor promedio de la concentración de mercurio en mg / 100 g de pescado

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7.0 DOCUMENTO DE REFERENCIA

NTC-ISO 9000:2000 Sistema de gestión de calidad. Fundamentos y vocabulario.


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Instructivo de operación de Espectrómetro de Absorción Atómica. 123-LAA-INT-23
Cook book. Equipo Absorción Atómica. Marca Shimadzu.

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Personal UTP Jefe de Calidad Director del Laboratorio de


Análisis de Aguas y Alimentos

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