Bioquímica

7. Fosforilación oxidativa y fotofosforilación

‘Si pudiera demostrarse que ha

existido un órgano complejo que no
pudo haber sido formado por
numerosas y ligeras modificaciones
sucesivas, mi teoría fracasaría por
completo.’Charles Darwin.
 7. Fosforilación oxidativa y fotofosforilación
El estudio de la fosforilación oxidativa se inició en 1906 con el
informe de Arthur Harden sobre el papel vital del fosfato en la
fermentación celular. Sin embargo, a principios de los años
1940, la relación entre la oxidación de los azúcares y la
generación de ATP fue establecida de forma definitiva por
Herman Kalckar, confirmando el papel central del ATP en la
transferencia de energía, que había sido propuesto por Fritz
Albert Lipmann en 1941.

Más tarde, en 1949, Friedkin y Morris Albert L. Lehninger

demostraron que la coenzima NADH se encuentra relacionada
con vías metabólicas tales como el ciclo del ácido cítrico y la
síntesis de ATP. Arthur Harden

Durante otros veinte años, el mecanismo por el cual se generaba

el ATP siguió siendo un misterio, con científicos buscando un
elusivo "intermediario de alta energía", que enlazara las
reacciones de oxidación y fosforilación. El misterio fue resuelto
por Peter D. Mitchell con la publicación de la teoría
quimiosmótica en 1961.

En un principio la propuesta fue muy controvertida, pero fue

aceptada lentamente y finalmente Mitchell recibió el Premio
Nobel de Química en 1978 por su teoría.

Morris Albert L. Lehninger

La investigación posterior se centró en la purificación y
caracterización de las enzimas involucradas, con importantes contribuciones realizadas por David
E. Green sobre los complejos de la cadena de transporte de electrones, así como de Efraim Racker
sobre la ATP sintasa.

Un paso fundamental hacia la solución de los

mecanismos de la ATP sintasa fue
proporcionada por Paul D. Boyer, con su
desarrollo en 1973 del mecanismo de
"cambio de unión", seguido por su radical
propuesta de un sistema de catálisis
rotacional en 1982.

Los trabajos más recientes incluyen estudios

estructurales de las enzimas involucradas en
la fosforilación oxidativa, llevados a cabo por
John E. Walker, habiendo obtenido Walker y
Boyer el Premio Nobel en 1997.
Animación
7.1 Fosforilación oxidativa

E l NADH y el FADH2 formados en la glucolisis, en la oxidación de los ácidos grasos y en el

ciclo del acido cítrico, son moléculas ricas en energía porque poseen un par de electrones
con elevado potencial de transferencia. Cuando estos electrones se transfieren al oxigeno
molecular, se libera una gran cantidad de energía, que puede ser utilizada para generar ATP.

La fosforilación oxidativa es el proceso por el que se forma ATP como resultado de la transferencia
de electrones desde el NADH o el FADH2 al O2 a través de una serie de transportadores de
electrones.

Se le llama así para distinguirla de otras rutas que producen ATP con menor rendimiento, llamadas
"a nivel de sustrato".
La fosforilación oxidativa genera 34 de las 38 moleculas de ATP que se forman cuando la glucosa
se oxida completamente a CO2 y H2O.
Se calcula que hasta el 90% de la energía celular en forma de ATP es producida de esta forma.

El evento vital se lleva a cabo en la membrana interna mitocondrial, nn dicha membrana existen tres
complejos enzimáticos transportadores de electrones:

El complejo NADH deshidrogenasa.

El complejo citocromo b-c1.
El complejo citocromo oxidasa.

El flujo de electrones desde el NADH o el FADH2 al O2 a través de dichos complejos proteicos,

provoca el bombeo de protones hacia el exterior de la matriz mitocondrial. Cuando los protones
regresan a la matriz mitocondrial a través de un complejo enzimático, se sintetiza ATP. De esta
forma, la oxidación y la fosforilación están acopladas por un gradiente de protones a través de la
membrana interna mitocondrial.

La fuerza protón-motriz generada, impulsa los protones a través de las ATP sintasas presentes en la
membrana mitocondrial interna, permitiendo la unión del ADP a un grupo fosfato, con la
consiguiente formación de ATP. El conjunto de estos procesos, que culminan con la formación de
ATP, constituyen la fosforilación oxidativa.

Una molécula de NADH permite la formación de 3 moléculas de ATP, mientras que

una de FADH2 sólo aportará 2 ATP.

Tanto los electrones como los protones, que han sido impulsados a lo largo de la cadena
respiratoria, deben unirse a un aceptor final. En la respiración aerobia el aceptor último de
electrones y protones es el O2, que al unirse al H2, forma H2O como producto final.
La fosforilacion oxidativa muestra en forma clara que los gradientes de protones son la divisa de
energía libre inconvertible en los sistemas biológicos.

Pese a que la fosforilación oxidativa es una parte vital del metabolismo, produce una pequeña
proporción de especies reactivas del oxígeno tales como superóxido y peróxido de hidrógeno, lo
que lleva a la propagación de radicales libres, provocando daño celular, contribuyendo
a enfermedades y, posiblemente, al envejecimiento. Sin embargo, los radicales tienen un importante
papel en laseñalización celular, y posiblemente en la formación de enlaces disulfuro de las propias
proteínas de la membrana interna mitocondrial. Las enzimas que llevan a cabo esta ruta metabólica
son blanco de muchas drogas y productos tóxicos que inhiben su actividad.
Reacciones del transporte electrónico
Las reacciones que tienen lugar a nivel de la NADH-reductasa o complejo I son una serie de
reacciones redox, en las que intervienen un coenzima flavínico (FMN o flavina
mononucleótido).

Este complejo se encuentra completamente embebido en la membrana interna de la mitocondria, y

está orientado de tal manera que el sitio de fijación de NADH está mirando hacia la matriz
mitocondrial. Su masa es de aproximadamente 850 kilodaltons.

Cuenta con un centro ferrosulfurado en el que el átomo de hierro es el que realiza el intercambio
electrónico para cederlos al coenzima Q. El flujo de dos electrones desde el NADH hasta la
coenzima Q, da lugar al bombeo de cuatro H+ a través de la membrana mitocondrial interna, desde
la matriz hacia su cara citoplasmática.

La reacción global de esta reacción es:

El complejo II o succinato-reductasa, va a recibir los electrones directamente del succinato. Posee
a lo menos cuatro proteínas diferentes. Es mucho más pequeño que el complejo I. Su masa es de
aproximadamente 140 kilodaltons.
Se encuentra a nivel de la membrana, y uno de sus componentes es una enzima del ciclo del ácido
cítrico, la succinato deshidrogenasa, que cataliza la reacción de succinato a fumarato.
Uno de los productos de la reacción, el coenzima reducido FADH 2 no abandona el complejo,
transfiriendo los electrones en el interior del mismo a un centro Fe-S, para posteriormente
ser cedidos al coenzima Q. Esta es la única enzima del ciclo del ácido cítrico que no se encuentra
libre en la solución de la matriz mitocondrial, sino que está fuertemente unida a la membrana
mitocondrial interna.

Por otro lado, algunas de las enzimas mitocondriales que utilizan FAD (acil-CoA deshidrogenasa,
primer enzima de la β-oxidación), no introducen sus electrones a la cadena de transporte electrónico
a través del complejo II, sino mediante una flavoproteína transportadora de electrones (ETFP-
ubiquinona reductasa) que reduce directamente la ubiquinona o coenzima Q. El potencial de
transferencia electrónica es menor en este complejo que en el anterior, y el desprendimiento
energético no es suficiente para el bombeo de hidrogeniones, lo que se traducirá en un menor
rendimiento de ATP, comparado con el obtenido cuando los electrones penetran en la cadena
utilizando el complejo I.
La segunda bomba de hidrogeniones, se sitúa en el complejo III o citocromo-reductasa, está
compuesto por los citocromos b562 y b566, citocromo c1 y c, una proteína ferrosulfurada y al
menos otras seis subunidades proteicas. Posee como grupos prostéticos fierro-azufre y el grupo
Hem. Su masa es de aproximadamente 250 kDa.
A través de la siguiente secuencia de reacciones los electrones son transferidos hasta el citocromo
c, este flujo genera un potencial suficiente para bombear 2H+ hacia el lado citoplasmático. La
diferencia de potencial de transferencia es menor que en el complejo I y por lo tanto la
capacidad de mover los hidrogeniones también es menor.
El IV complejo, la citocromo-oxidasa acepta cuatro electrones del citocromo c, uno cada vez, a
través de dos grupos Hem que utilizan átomos de cobre y los transfiere a una sola molécula de O2
formando dos moléculas de H2O. Su masa es de aproximadamente 160 kDa.
Se estima que el 90 % del consumo total de oxígeno de las células es realizado por la citocromo-
oxidasa. El oxígeno molecular es un aceptor de electrones con un fuerte carácter oxidante, una alta
tendencia a captar electrones, pero reacciona muy lentamente a menos que sea activado
catalíticamente. Esta activación es realizada por este complejo, el cual también funciona como una
bomba de protones, realizando un movimiento neto de 4H+ hacia el espacio intermembranoso.
ATP sintasa, también llamada complejo V, es la enzima final del proceso de la fosforilación
oxidativa. Esta enzima se encuentra en todas las formas de vida y funciona de la misma manera
tanto en procariotas como en eucariotas. Esta enzima usa la energía almacenada en un gradiente de
protones a través de la membrana para llevar a cabo la síntesis de ATP desde ADP y fosfato(Pi). Las
subunidades proteicas que lo componen varían de acuerdo a la especie, pero el rango en mamíferos
va desde 12 a 18 subunidades. La subunidad F0 está completamente embebida dentro de la
membrana interna mitocondrial y la subunidad F1 se encuentra orientada hacia la matriz
mitocondrial. La unidad F1 para ser funcional necesita como mínimo: tres unidades a y ß, y dos
subunidades. La subunidad F1 funciona como un canal protónico. En un comienzo fueron llamados
“partículas elementales”, que se podían ver fácilmente en el microscopio electrónico al observar un
corte de la membrana interna de la mitocondria.

Otro componente presente en la cadena de electrones y que pertenece a ningún complejo y que
participa activamente en ella es la ubiquinona o coenzima Q. Es una benzoquinona liposoluble, y se
mueve con bastante libertad en la mb interna mitocondrial. Es capaz de captar electrones de los
complejos I y II, y los cede al complejo III.
La ATP sintasa.

La ATP sintasa es una máquina molecular que combina los aspectos eléctricos, mecánicos y
químicos de la función enzimática. Todos ellos están claramente separados, se atribuyen fácilmente
a sus diferentes subunidades, y son razonablemente bien comprendidos gracias a una abundancia
de datos estructurales y cinéticos. Sin embargo, la comprensión de la enzima de una manera plena
a nivel molecular exigirá considerables esfuerzos, tanto experimentales como teóricos. Hay cinco
cuestiones pendientes. ... Sólo cuando hayamos resuelto estos problemas nos aproximaremos a una
plena comprensión de esta extraordinaria pieza de la maquinaria celular.

Para ver animación 3D: http://www.grahamj.com/fivth2.html

Acoplamiento fosforilación-oxidación

Aunque han existido teorías múltiples que intentaban justificar la conexión entre estas dos
funciones, ninguna se sostenía con los necesarios datos experimentales. El planteamiento de la
hipótesis quimiosmótica o de Mitchell permitió la teorización y posterior corroboración del
mecanismo de dicho acoplamiento. El transporte de electrones y la síntesis de ATP estaban
acoplados a través de un gradiente de protones, o hidrogeniones, entre ambas caras de la membrana
interna. El bombeo de protones, desarrollado por los diferentes complejos de la cadena de transporte
electrónico, genera un aumento de concentración de H + en la cara citoplasmática, y un gradiente
eléctrico debido a la carga positiva movilizada por los protones hacia el exterior de la membrana.
Estos gradientes establecen una fuerza protomotriz (movedora de protones) que empuja a los
hidrogeniones hacia el interior, y utilizando esta fuerza, el complejo enzimático ATP-sintasa
formaría enlaces de alta energía en forma de moléculas de ATP.

¿Por qué se produce un defecto en la producción de energía?

Puede producirse un defecto en la

producción de energía cuando alguna de
las proteínas que constituyen la
fosforilación oxidativa no se genera
correctamente o bien cuando los
componentes de la cadena no se
ensamblan bien entre ellos.
Estos defectos pueden ser hereditarios o
adquiridos.
Una causa frecuente de defecto adquirido
en la producción de energía es el
envejecimiento.

¿Por qué se produce un defecto

hereditario en la producción de energía?

Cada una de las proteínas que constituyen la

fosforilación oxidativa está determinada
genéticamente
Cuando se produce una mutación en un gen
que codifica alguna de estas proteínas, ésta
muestra alteraciones en su concentración o
estructura que pueden alterar su función.
También el ensamblaje de los componentes
de la cadena respiratoria está determinado
genéticamente y puede mostrar alteraciones
que comprometen la síntesis de ATP.
7.2 Fotofosforilación
La fotosíntesis es el proceso metabólico primario de las plantas
y de hecho se considera el primario en la biosfera, es así debido
a que permite utilizar la energía radiante del sol para
transformarla en energía química de ATP, que es necesaria para
la biosíntesis de carbohidratos y de hecho para el anabolismo en
general.
Esta capacidad solo la desarrollan las plantas ya que cuentan
con células parenquimaticas clorofilianas, las cuales se
encuentran en las hojas, partes verdes de tallos, flores y frutos
verdes.
Se puede considerar a la fotosíntesis como un proceso
metabólico el cual utiliza dos etapas:

1. Fotofosforilación.
La fotofosforilación es una de las tres vías responsables de la formación de ATP y solo se puede
observar en células fotosintéticas.
En 1954, Arnon demostró que la incidencia de luz sobre cloroplastos, poseyendo estas cantidades
suficientes de ADP y grupos fosfato, da lugar a la síntesis de ATP, siendo proporcional su cantidad
al flujo electrónico inducido por luz.
En 1957, suministró evidencias experimentales del acoplamiento entre fotofosforilación y
fotorreducción del NADP*.También demostró lo que más tarde se llamó “fotofosforilación cíclica”,
en la que no había producción ni gasto de oxígeno.

Como se ha mencionado este proceso depende de la luz, además al igual que la fosforilación
oxidativa, requiere una membrana tilacoide intacta y puede desacoplarse del transporte electrónico,
el cual es impulsado por la luz por compuesto tales como 2,4-dinitrofenol.

Se distinguen tres fases en el proceso de formación de ATP:

1) Captura de la energía en los complejos de oxidación

2) Transporte de esta energía hasta los lugares de fosforilación

3) Utilización de esta energía para la síntesis de ATP

Para realizar la fotofosforilación se requiere de un fotosistema de los cuales existen dos tipos.

Fotosistema I
Su centro de reacción es designado por P700, pues absorbe luz con longitudes de onda cercanas
a 700nm. En este fotosistema un electrón es captado por una molécula aceptora de electrones, o
aceptora primaria, el cual se desplaza a través de una serie de reacciones de tipo redox hasta
llegar a la fijación del electrón a la coenzima NADP.

Fotosistema II
Su centro de reacción es designado por P680 ya que puede absorber longitudes de onda
próximas a 680 nm. Este se encuentra en la membrana tilacoide de los cloroplastos, es una
proteína intrínseca al igual que la cadena transportadora d electrones, además de ser el lugar
donde el agua sufre una oxidación. Este fotosistema no tiene participación alguna en la
fotofosforilación cíclica.
Las superficies estromales de la membrana tilacoide se asemejan mucho a las unidades F1 de la
ATP sintasa del cloroplasto, es notablemente similar al complejo F1F0 mitocondrial.
Las similitudes que podemos citar son:

1.- Ambas unidades F0 y CF0 son proteínas hidrófobas que contienen un canal translocador
de protones.

2.- Ambas unidades F1 y CF1 son proteínas de membrana periférica hidrófilas de

composición subunitaria α3β3γδE, de las cuales β es una ATPasa reversibles.

3.-Ambas ATP sintasas son inhibidas por la oligomicina y por diciclohexilcarbodimida

(DCCD).

Este mecanismo consiste en la absorción de energía lumínica por moléculas de clorofila con la
excitación resultante de algunos de los electrones de esas moléculas, los electrones excitados pasan
de la clorofila a la primera serie de moléculas transportadoras, por lo que se puede decir que
ingresan en una cadena transportadora de electrones similar a la de la respiración celular.
A medida que estos electrones pasan a lo largo de la serie de transportadores se bombean protones a
través de la membrana y el ADP se convierte en ATP por quimioósmosis, de este proceso se
derivan dos los cuales son llamados:

a) Fotofosforilación cíclica.

Los pigmentos del fotosistema captan la energía luminosa que es transferida a la clorofila la del
centro de reacción. La clorofila excitada transfiere sus electrones hacia un aceptor (la
ferrodoxina). Los electrones recorren una cadena transportadora, sucediendo un conjunto de
reacciones de oxidación-reducción que conducen a la liberación de energía, parte de la cual es
utilizada para fosforilar ADP, formando ATP. Al final de la cadena, los electrones vuelven al
centro de reacción del fotosistema I, siendo por ello un flujo cíclico de electrones.
b) Fotofosforilación no cíclica.
En este tipo de fotofosforilación los electrones provenientes de la clorofila son sustituidos
por electrones derivados del agua. Los electrones liberados por la clorofila transcurren a lo
largo de la cadena transportadora de electrones hasta finalizar en NADP+, el cual se
combina con electrones e hidrogeniones provenientes del agua para formar NADPH. Este
proceso genera alrededor de 1.25 moléculas de ATP por cada fotón absorbido.

2. Reducción de CO2
Es la segunda etapa y depende de los productos formados durante la primera vía que es la
fotofosforilación, esta etapa es diferente para cada tipo de planta.
Dentro de esta etapa encontramos el ciclo de Calvin-Benson, para el cual la fuente de energía
para la ruta son el NADPH y el ATP producidos durante las reacciones de la fotosíntesis
dependientes de la luz.
En este ciclo se fijan las moléculas de CO2 y se produce una molécula de gliceraldehído-3-
fosfato que abandona el ciclo y unirse a otra, para así producir una molécula de glucosa
Bibliografía:
Fosforilación oxidativa:
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http://www.geeksxd.net/vb/zona-escolar/1766-fosforilacion-oxidativa.html
2. Guía metabólica, problemas de energía, recuperado el 29 de mayo 2012 de
http://www.guiametabolica.org/informacion/por-que-se-produce-un-defecto-en-la-
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3. Metabolismo, Fosforilación oxidativa, recuperado el 29 de mayo 2012 de
http://recursos.cnice.mec.es/biologia/bachillerato/segundo/biologia/ud04/02_04_04_02_02.h
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http://www.elergonomista.com/biologia/fos01.htm
5. Darwin y los motores olvidados, recuperado el 29 de mayo 2012 de
http://jolimu.wordpress.com/2008/10/08/
6. Una nueva mirada al motor giratorio más pequeño del mundo, recuperado el 29 mayo de
http://sedin-notas.blogspot.mx/2009/05/una-nueva-mirada-al-motor-giratorio-mas.html
7. Farp, G.; Biologia celular y molecular; McGraw-Hill Interamericana, 1996; Vol.1.
8. Stryer, L.; Bioquimica, 4ta ed; Edit. Reverte, Barcelona, 1995; Vol 2.

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3. Voet, D., Voet, J.G. “Fundamentos de bioquímica” Editorial: Medica Panamericana, 2006,
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8. http://almez.pntic.mec.es/~jrem0000/dpbg/Fotosintesis/fotofosforilacion.html
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12. http://www.lourdesluengo.es/biologia/fotoquimio.html
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5. http://www.maph49.galeon.com/respcel/review4.html
6. http://highered.mcgraw-hill.com/olc/dl/120072/bio12.swf
7. http://biomodel.uah.es/biomodel-misc/anim/metab/t-e-foto.html
8. http://biomodel.uah.es/biomodel-misc/anim/metab/t-e-mitoc.html
Videos recomendados:
1. http://www.youtube.com/watch?v=3NINSWAAs_0&feature=results_main&playnext=1&lis
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