Professional Documents
Culture Documents
COLUMNA CAPILAR
Definición
Este método describe un procedimiento para la determinación del contenido de ácidos grasos trans de grasas y aceites
vegetales mediante cromatografía de gases capilares (CG). Los ácidos grasos se identifican por sus tiempos de retención, y
se cuantifican por determinación de la relación de los niveles bajo el pico relevante, la suma de las áreas como todos los
picos para los ácidos grasos. La grasa o el aceite se convierten en su éster metílico de ácido graso y luego se analiza mediante
columna capilar. Este método no es ético para el método IOOC (referencias)
Según este método, el contenido de ácido graso trans de una grasa vegetal o se graba por la suma de los siguientes contenidos
de ácido con respecto a los ácidos grasos totales trans-octadecenore (1 n: 1); trans, trans, cis, cis, trans cis y trans, cis, cis
octadecatrienoico ((ICI + CCI + CIC + ICC) 18: 2))
Alcance
Aplicable a aceites y grasas contiene ácidos grasos con 10-24 átomos de carbono. Incluyen ácidos grasos transinsaturados
con 18 átomos de carbono que pueden estar presentes en concentraciones específicas en grasas y aceites vegetales naturales
y en aceites que han sido refinados. No es aplicable a las grasas vegetales que se han sometido a ningún proceso de
hidrogenación.
Ilustración 1 Cromatograma de muestra obtenido del análisis de columna capilar de los ácidos
grasos trans
Nota- Estas condiciones pueden variar a la Potencia de separación: los picos de los
luz de la composición de la muestra y las ésteres metílicos de todos los ácidos
características de la columna y la grasos presentes deben ser bastante
cromatografía de gases para garantizar la distinto.
separación de todos los ésteres de metilo y Potencia de resolución: los picos deben
la resolución de pico satisfactoria (ver estar completamente resueltos (es decir, el
procedimiento 5 y Fig. 1). Compruebe que pico trace debe regresar a la línea base
el pico de ácido de linóleum (c18: 3) antes de irse para el siguiente pico) para
aparece como un pico resuelto justo antes algunos pares típicos, por ejemplo, el
del pico de ácido eicosenoico (C20: 1). Si CCIC/cis ácidos incompletos, la
no es así Se pueden tomar dos pasos para resolución es totalizada en tales casos la
cambiar la temperatura del horno y / o usar columna se considera satisfactoria es el
una columna de polaridad diferente. índice de resolución >2. La resolución
índex entre dos picos se define por la
5. Eficiencia de la columna: la eficiencia de
relación:
una columna está determinada por su
poder de separación y resolución. Debe a
proporcionar cromatogramas que cumplan
b
con los siguientes requisitos que los
análisis deben realizar correccionalmente. Donde:
a = distancia desde la línea de base siempre debe cumplir los requisitos
hasta la punta del pico más especificados en el procedimiento 5.
pequeño
7. Identificación del pico: el orden en que los
b = distancia desde la línea de base
ésteres metílicos de los ácidos grasos
hasta el punto más bajo de la línea de
aparecen en el cromatograma es una
seguimiento entre dos picos
definición directa del número de átomos
Para comprobar que se satisfacen los de carbono.
requisitos anteriores, se inyectan
cuantificaciones iguales de la porción de Los ésteres insaturados se separan después
prueba de los ésteres metílicos, haciéndolo de los correspondientes ésteres saturados
varias veces, y se ajusta la temperatura y el y su elución es una función directa del
flujo del gas portador hasta que se obtengan número de dobles enlaces. Los ésteres de
los mejores resultados de separación. También ácidos grasos trans se separan antes de los
verifique la potencia de resolución reduciendo isómeros cis correspondientes
la porción de prueba si es necesario y
aumentando la sensibilidad hasta que se 8. Los ésteres metílicos individuales se
obtenga la mejor resolución de pico identifican a continuación por los tiempos
de retención, que se comparan con los
Si todos los ácidos grasos presentes están tiempos de retención de las muestras de
separados y el índice de resolución es> 2, la referencia. Un cromatograma de muestra
columna es adecuada y las condiciones se da en la figura 1
operativas seleccionadas deben mantenerse en
todas las determinaciones sucesivas. De lo Análisis cuantitativo
contrario, la columna no es eficiente.
1. Calcular las áreas de cada pico usando el
6. Procedimiento analítico: utilizando la integrador electrones. Para asegurar la
microjeringa de 10uL, tome 1 uL de pf sensibilidad analítica correcta, la altura del
hexano, extraiga 0.5uL de una abd 0.5 uL pico correspondiente en el motil éster del
+ 1 uL de la solución simple. Levante el ácido araquíico no debe ser inferior al 20%
émbolo de la jeringa para que no quede del valor de escala completa. En el caso de
nada simple en la aguja de la jeringa. aceites con alto contenido de ácido, la
Empuje la aguja a través de la membrana altura no debe ser inferior al 50%.
de la unidad de inyección y después de 1- 2. el porcentaje para cada nerd graso se
2 vea inyectar rápidamente y luego retire calcula a partir de la relación de los que
lentamente la jeringa después de 5 están bajo el pico correspondiente a la
segundos. Continúe grabando hasta que suma de las áreas bajo todos los picos
los ésteres de metilo presentes estén usando la fórmula
completamente eludidos. La línea de base
Expresar el resultado a dos decimales
𝐴ℎ Decisión
= 100
∑𝐴
1. La precisión del método se evaluó sobre la
Dónde: base de un ensayo interlaboratorio que
contó con la participación de 10
Ah = área máxima para ácidos grasos y
laboratorios que realizaron dos pruebas en
∑A = total de todas las áreas de los picos tres muestras de aceite de oliva virgen +
20% de aceite de soja, 1g de aceite de oliva
El total de ácidos grasos trans es la suma del virgen + 10% de aceite de soja y uno de
contenido porcentual de los siguientes ácidos aceite de soja puro. Los resultados de la
trans-octadecenoico (C18: IT), trans trans (CH prueba se muestran en la tabla 1.
2T) cis trans y trans cis octadecadienoico a) Receptibilidad cuando el método se aplica
(C18: CTTC) trans cis, trans cis, cis trans, cis de la manera correcta, la diferencia entre
trans, cis y trans, cis octadecatrienoico dos resultados de prueba individuales
obtenidos en un material de prueba Ejecutivos en 1999. los laboratorios con ocho
indebido probado por el mismo operador países. La prueba se realizó en muestras a)
utilizando el mismo equipo, que intervalos aceite de oliva virgen extra b) aceite de oliva
cortos de tiempo no deberían ser mayores virgen + aceite de girasol refinado c) aceite de
que el límite de repetitividad dado en la oliva virgen + aceite de oliva refinado d) aceite
Tabla 1 con una probabilidad del 45%. de oliva virgen + aceite de soja refinado +
b) reproductibilidad: cuando el método se aceite de girasol refinado e) aceite de oliva
aplica de la manera correcta, la diferencia refinado + aceite de orujo de oliva refinado +
entre dos muestras de los resultados de las aceite de soja refinado + aceite de oliva virgen
pruebas obtenidas no debe, en promedio, lampante. Los resultados de la prueba en vivo
ser mayor que el límite de de colaboración organizada por la Secretaría
reproducibilidad dado en la Tabla 1, Ejecutiva de IOOC han sido procesados
probabilidad del 95% estadísticamente de acuerdo con la escala de
ejecución establecida en la Norma
Internacional ISO 5735 (Referencias 2-5)
Análisis de los resultados de la prueba
exactitud y precisión de precisión de los
colaborativa. los valores de precisión o el
métodos de medición y resultados. Los otros
método están vivos en los cuadros 2 y 19
fueron evaluados por aplicación. Prueba de
laboratorios que reconocían el COI en su
Cochran y Grabbys para los resultados de
momento participaron en la prueba de
laboratorio para cada determinación replica a
colaboración organizada por los Secretarios
y b) y la captura de la muestra.
A B C D E
El número de partes que diferencian 17 17 17 17 17
laboratorios
Otros una serie de laboratorios con valores 5 2 4 0 0
periféricos
Como = media de los resultados aceptados 0.012 0.020 0.020 0.021 0.001
Receptibilidad 0.007 0.009 0.010 0.010 0.020
Desviación estándar de receptibilidad 0.003 0.003 0.004 0.004 0.007
S, (A) = coeficiente de variación de 22.610 20.1+0 32.10 22.001 14.080
receptibilidad (b, * 1000 media)
Reproductividad 0.010 0.021 0.021 0.123 0.031
desviación estándar de reproducibilidad 0.04 0.008 0.008 0.008 0.011
SR (%) = coeficiente de variación de la 30.960 46.580 32.110 50.003 21.741
reproducibilidad (media Sr * 1000)
A B C D E
El número de partes que diferencian 16 17 16 17 17
laboratorios
Otros una serie de laboratorios con valores 5 2 2 4 0
periféricos
Como = media de los resultados aceptados 0.014 0.032 0.011 0.044 0.303
Receptibilidad 0.011 0.01 0.007 0.01 0.043
Desviación estándar de receptibilidad 0.004 0.004 0.003 0.004 0.015
S, (A) = coeficiente de variación de 34.92 13.361 18.983 9.852 5.061
receptibilidad (b, * 1000 media)
Reproductividad 0.016 0.02 0.017 0.023 0.131
desviación estándar de reproducibilidad 0.006 0.007 0.006 0.008 0.047
SR (%) = coeficiente de variación de la 47.702 25.643 42.801 22.413 15.392
reproducibilidad (media Sr * 1000)