LUMISCENCIA: Emisión no radiante (calor), Entre niveles vibracionales-> Relajación vibracional.

Emisión de fotones •Fluorescencia

•Fosforescencia-> Conversión interna Conversión externa Cruce entre sistemas. Relajación vibracional: Generada por colisiones entre moléculas
excitadas y las del solvente, Trasferencia de energía rápida, Produce que la banda de Fl se desplace hacia mayores λ, menor energía
(desplazamiento Stokes). Conversión interna: *Procesos intermoleculares por los cuales la molécula pasa a un estado de más baja energía sin
emitir radiación, *Cruce entre dos estados de la misma multiplicidad (S2->S1)• Solapamiento de niveles energéticos vibracionales. Conversión
externa: • Generada por la interacción y la transferencia de energía entre la molécula excitada y el solvente u otros solutos • Evidencia: Marcado
efecto del solvente en la fluorescencia Baja temperatura y mayor viscosidad – Menores colisiones entre partículas disminuyen la fluorescencia.
Cruce entre sistemas (da origen a la fosforescencia): • Cruce entre estados electrónicos de multiplicidad distinta *La probabilidad del cruce entre
sistemas aumenta si los niveles vibracionales de los dos estados se superponen. FI -> 𝜋 ->𝜋∗ FF -> 𝑛 ->𝜋∗. Compuestos con dobles enlaces y
electrones no enlazantes (electrones libres) son los que presentan este tipo de transiciones. Fluorescencia y estructura: 1)Alta intensidad:
Compuestos que contienen grupos funcionales aromáticos con transiciones 𝜋 ->𝜋∗ de baja energía. Mayor cantidad de anillos y grado de
condensación -> mayor ɸ. 2- Fluorescencia (menor Aromáticos): compuestos con grupos carbonilo en estructuras alifáticas y alicíclicas o
estructuras con dobles enlaces altamente conjugados, pero heterocíclicos condensados si presentan fluorescencia. Efecto de la rigidez
estructural: La falta de rigidez de una molécula tal vez cause un aumento de la velocidad de conversión interna y el correspondiente aumento en
la probabilidad de desactivación sin radiación. Efecto del pH en la fluorescencia • Se requiere de un control estricto del pH ya que las formas
protonadas y desprotonadas pueden generar o nó fluorescencia. • Para compuestos aromáticos, es probable que tanto la longitud de onda como
la intensidad de emisión sean diferentes en las formas protonadas y no protonadas del compuesto. Componentes: Fluorómetros: Lámpara de
vapor de mercurio, Emite a 254, 302, 313, 546, 578, 691 y 773 nm, cada línea se puede aislar con un filtro óptico. Espectrofluorómetros: Fuente
de radiación continua • Lámparas de arco de Xenón de alta presión • Espectro continuo desde 300 a 1300 nm. Filtros y monocromadores: Filtros
absorción: Absorción selectiva de λ que no interesan, generalmente son de vidrio en cuya superficie se ha dispersado un pigmento adecuado.
Filtros interferencia: Capas alternas de materiales con elevado y bajo índice de refracción. Fosforímetros: **Se aprovecha la diferencia en las
velocidades con las que ocurre el proceso de fluorescencia y de fosforescencia (Fl>>FF). Diseños similares a los descritos, pero difieren en dos
componentes: 1- Sistema de modulación por pulsos: La radiación (lámpara de xenón) llegue a la muestra de forma alternada, después de un
tiempo de retraso determinado, el sistema de adquisición de datos se activa para lograr la señal de fosforescencia. 2- Sistema de enfriamiento:
las mediciones de fosforescencia se efectúan a la temperatura del nitrógeno líquido en un medio rígido para reducir al mínimo las colisiones que
originarían la desactivación del estado triple de larga vida. El analito está en un cristal de disolvente sólido
MASAS: La ionización química produce iones gaseosos a partir de moléculas neutras de analito que hay en la disolución. La electro nebulización
pasa los iones preexistentes en la disolución a fase gaseosa, pero no crea nuevos iones. En ionización química dependiendo de la técnica (ci-
positivo o ci-negativo) elegida, este gas el reactivo obrará recíprocamente con los electrones y el analito y causará una ionización de
la suavidad de la molécula del interés. Una ionización más suave hace fragmentos de la molécula aun grado más bajo que la ionización dura del
E-I. Una de las ventajas principales de usar la ionización química es que un fragmento total que corresponde de cerca al peso molecular del analito
del interés está producido. Ionización química negativa: En la ionización química negativa (NCI) el gas reactivo disminuye el impacto de los
electrones libres en el analito del blanco. Esta energía disminuida deja típicamente el fragmento en gran fuente. Fuentes de desorción: Los
métodos de desorción prescinden de la volatilización y de la posterior ionización de la molécula de analito. En ellos se suministra energía a la
muestra sólida o líquida de diversas maneras, de modo que se provoca la formación directa de iones gaseosos. desorción por campo-Field
desorption (FD): Se utiliza el mismo sistema que en FI, pero en este caso, el electrodo emisor se recubre con la muestra líquida o sólida. El emisor
se introduce al espectrómetro mediante una sonda. //Desorción-ionización por láser con ayuda de una matriz MALDI: utilizado para el análisis
de biopolímeros. Puede utilizarse para analizar moléculas orgánicas complejas de peso molecular entre unos pocos miles y varios cientos de miles
de Da. •Una baja concentración del analito se dispersa en una matriz sólida o líquida ubicada en una sonda de acero inoxidable, se coloca una
cámara de vacío y un rayo laser se enfoca sobre la muestra. •La matriz absorbe la radiación por medio de un laser pulsado y posteriormente la
matriz y el analito son desorbidos y ionizados produciendo un penacho de iones. Este mecanismo propuesto. Ocurre en dos etapas:1- Extracción
por ablación de un segmento de la muestra en donde las moléculas sufren una expansión adiabática.2- Las moléculas del analito (A) sufren una
ionización por transferencia electrónica: Reacción entre los iones provenientes de la matriz ( generados mediante un mecanismo de absorción
de fotones, excitación/ionización) y moléculas de analito en fase gaseosa (A).3- A se puede ionizar por transferencia protónica: sugiere una
transferencia de un protón [H] + desde especies protonadas de la matriz hacia el analito. Para conseguir un proceso de ionización eficiente y
suave, se deben cumplir tres condiciones básicas: 1-Los pulsos del laser deben ser de corta duración (1 a 100 ms) para evitar descomposición
térmica. 2-La muestra debe dispersarse previamente utilizando una matriz líquida o sólida. 3- Las moléculas del analito quedan aisladas entre si
y rodeadas de un gran número de moléculas de matriz. Relación 100:1 hasta 10,000:1. Par evitar: • La asociación de moléculas de analito que
pueden formar complejos de alto peso molecular difíciles de desorber y analizar. • El calentamiento excesivo del analito (degradación) ya que
debe ser la matriz quien debe absorber el exceso de energía para conseguir un proceso de ionización extremadamente suave. // Ionización por
electronebulización (ESI): La diferencia de potencial tan alta en la aguja refuerza la pulverización y la generación de gotas cargadas. Las gotas son
repelidas desde la aguja hasta el cono de muestreo en el contraelectrodo. A medida que las gotitas atraviesan el espacio entre la punta de la
aguja y el cono, se produce la evaporación del disolvente. A medida que se produce la evaporación del disolvente, la gota se contrae hasta
alcanzar el punto en que la tensión superficial ya no puede soportar la carga (el límite de Rayleigh) en cuyo momento se produce una "explosión
coulombiana" y la gota se desgarra. Esto produce gotas más pequeñas que pueden repetir el proceso, así como moléculas de analito cargadas
desnudas. Analizadores de masas: A la salida de la fuente de iones se tiene una mezcla de diversos iones que deben ser separados para detectarlos
de forma individual. Los analizadores más utilizados, son el de campo magnético, el analizador cuadrupolar y el analizador de trampa de iones.
Analizadores de sector magnético: se consigue la dispersión iónica mediante campos magnéticos o eléctricos que desvían los iones de su
trayectoria en función de su masa, su relación masa/carga o su energía. Utilizan un imán permanente o un electroiman para hacer que el haz
procedente de la fuente de iones se desvie con una trayectoria circular de 180°, 90° o 60°, (Los picos se ensanchan, no hay diferenciación entre
iones de masas diferentes), solucionan al problema, espectrómetros de masas de doble enfoque Analizador magnético de doble enfoque.Consiste
en colocar, antes o después de B, un segundo analizador de tipo electrostático (o analizador de energías, también con la filtración en términos
de energías cinéticas mejora la resolución). Analizadores cuadrupolares: Se basa en lograr que los iones con cierta relación m/z describan
trayectorias estables en un campo electrostático hiperbólico. se logra utilizando cuatro barras cilíndricas o hiperbólicas, alineadas entre sí y
equidistantes, a las cuales se les aplica a cada pareja de barras opuestas, voltajes variables de frecuencia continua (DC, de amplitud U) y de
radiofrecuencia. Analizador Orbitrap: Consiste en un electrodo exterior con forma de barril y un electrodo interior coaxial con forma de
huso que forma un campo electrostático con distribución potencial cuadro-logarítmica. Los iones son inyectados tangencialmente en un
campo eléctrico entre los electrodos y quedan atrapados porque su atracción electrostática hacia el electrodo interior es contrarrestada
por la fuerza centrífuga. Así los iones dan vueltas alrededor del electrodo central. Detectores: 1)copa de Faraday: La copa de Faraday
consiste en un simple electrodo, normalmente en forma de copa o caja, que recibe el impacto de los iones a detectar. Los iones se
neutralizan por transferencia de electrones, y la señal se mide con una corriente analógica igual o superior a la corriente iónica original.
2)Multiplicador de electrones: El ion a detectar choca con el primer dinodo, provocando la emisión de un elevado numero de electrones
que van a incidir sobre el segundo dinodo. El proceso de multiplicación se repite sucesivamente. 3)Multiplicador continuo de
electrones(Channeltron): Está formado por un tubo de vidrio en forma de corneta o caracol, recubierto interiormente por un óxido de
plomo o material semiconductor. La señal que generan es continua. Se diferencia del detector multiplicador en que no posee múltiples
dínodos discretos. 4)Detector de conversión fotónica o de centelleo: Los iones son desviados de su trayectoria mediante un potencial
eléctrico, chocan contra un primer dínodo, esto produce electrones que son atraídos por un voltaje positivo aplicado a una pantalla
fosforescente. La pantalla emite fotones que se dirigen a un fotomultiplicador sellado al vacío.