Ing.

Darwin J, Estacio Albornoz

UNIA
 Nutrientes
1- Fuente de energía luz
química
2- Macronutrientes
C K
H Mg
O Na
N 95% Ca
S Fe
P
3- Micronutrientes (elementos traza)
Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W
4- Factores de crecimiento
•Vitaminas
•Purinas y pirimidinas
•Aminoácidos
 Macronutrientes
Fuente de - CO2
carbono - Compuestos Carbohidratos, azúcares,
orgánicos proteínas, aminoácidos,
lípidos, ácidos grasos,
glicerol
Fuente de - Inorgánica NH4, NO3-, N2
nitrógeno - Orgánica Proteínas, peptonas, aa,
bases púricas y
pirimídicas, urea
Fuente de - Inorgánica Fosfatos
fósforo - Orgánica Esteres del ácido
fosfórico
Fuente de - Inorgánica Sulfuros y sulfatos
azufre - Orgánica Aminoácidos sulfurados,
vitaminas
Tipos nutricionales Fuente de Fuente de Ejemplos
energía C
Cianobacterias,
Fotoautótrofos Luz CO2 bacterias
púrpuras y
verdes
Compuestos Algunas
Fotoheterótrofos Luz orgánicos bacterias
púrpuras y
verdes
Compuestos Algunas
Quimioautótrofos o inorgánicos CO2 Eubacterias y
litótrofos ej.: H2, NH3, muchas Archaea
NO2-, H2S
La mayoría
Quimioheterótrofos Compuestos Compuestos Eubacterias,
o heterótrofos orgánicos orgánicos algunas Archaea
 Condiciones para el crecimiento microbiano
agua
Medios de cultivo fuente de energía
fuentes de C, N, otros
Nutrientes elementos

Crecimiento micronutrientes, factores de

crecimiento

temperatura
pH
Condicione luz

s aireación
actividad de agua
de cultivo
potencial redox
 Factores de crecimiento

Microorganismos auto o heterotrófos pueden

requerir pequeñas cantidades de ciertos
compuestos orgánicos que no pueden sintetizar y
deben incorporarse en los medios

* bases púricas y pirimídicas ADN, ARN

* aminoácidos esenciales síntesis
proteica
* vitaminas coenzimas
 Aislamiento

Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una

población mixta. En habitats naturales, raramente encontramos
a los microorganismos en cultivo puro

Aislamiento directo:se logra directamente a partir de una

muestra cuando el o los microorganismos están en una
proporción adecuada., se realiza por estrías (agotamiento) con o
sin dilución previa de la muestra (suelo, alimentos), en medio
sólido

Aislamiento por enriquecimiento:Cuando el microorganismo

que se desea aislar e identificar se encuentra en baja proporción
en la muestra, se incluye una primera etapa que consiste en
sembrar la muestra en medio líquido. Luego de varios pasajes
se aisla por el método de estrías.
 Clasificación de los medios de
cultivo

Según su naturaleza física

* líquidos
* sólidos - solidificante: agar-agar, silico-gel
* semi-sólidos

Según su composición
* definidos o sintéticos: composición química conocida
* no definidos o complejos: composición química no
definida, enriquecidos con peptonas, extracto de
carne, de levadura, de suelo, sangre
 Según su uso en el laboratorio

* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, además de los

nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos
permitiendo el crecimiento de otros o cuya composición permite el desarrollo de un
grupo determinado
Ej.agar-antibióticos; agua, sales, luz, para algas, medios con NaCl
superior a la concentración fisiológica

* diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar los

distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en él.
Ej. azúcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro
 Según su uso en el laboratorio

* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, además de los

nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos
permitiendo el crecimiento de otros o cuya composición permite el desarrollo de un
grupo determinado
Ej.agar-antibióticos; agua, sales, luz, para algas, medios con NaCl
superior a la concentración fisiológica

* diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar los

distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en él.
Ej. azúcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro
Cultivo en medio líquido
• Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El
crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por
formación de velo o película, o por sedimento.
Cultivo en medio sólido
• Puede ser en tubos o placas
a) Tubos con agar inclinado. Para sembrarlos, se mueve el
ansa o la punta suavemente sobre la superficie del agar con
un movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte
superior, cuidando de no dañar el agar.
b) Tubos sin inclinar. Se siembran introduciendo una punta
en el centro del agar. También se llama siembra por
picadura.
c) Siembra en placas. Puede ser en superficie (por estrías o
bañado) o incorporada (mezclando el inóculo con el agar
semifundido)
 Cultivo puro
• Las colonias se describen por examen macroscópico en función del
tamaño, la forma, el borde, la elevación, la transparencia y el color. Esto
resulta a veces muy útil en la identificación

• A partir de colonias aisladas en medio de cultivo se realiza un examen

microscópico que debe mostrar células razonablemente semejantes
respecto al Gram y a la morfología.

• Las colonias aisladas deben aislarse nuevamente en medio no selectivo

por el método de estrías. Esto se conoce como reaislamiento.
Crecimiento De
MicroorganismosTiempo Nº de bacterias

12:00 1
12:20 2
12:40 4
13: 00 8
14:00 64
15:00 512
16:00 4096

19:00 ¡ 2097152 !
Crecimiento en un volumen fijo de medio o
cultivo cerrado (batch)
Luego de la adición de bacterias al medio líquido fresco se observa la siguiente
cinética de crecimiento

• Fase lag - las células se adaptan al nuevo ambiente, aun no se dividen

• Fase exponencial (log) - velocidad máxima de crecimiento bajo
condiciones particulares, tiempo de generación mínimo
• Fase estacionaria - sin crecimiento neto, vc=0 ó estadísticamente = 0
cuando: vc=vm (vel. crecimiento es igual a la de muerte)
– nutrientes limitantes, pero suficientes para mantener actividad
– acumulación de desechos, inhibición del crecimiento
• Fase de muerte - velocidad de muerte celular > velocidad de división
celular
 Factores del ambiente

• físicos: temperatura, gases, pH, presión osmótica

•químicos: nutrientes, sustancias antimicrobianas
•biológicos: otros microorganismos, micro y
mesofauna, vegetación, afectan las
actividades microbianas

Los distintos factores actúan simultáneamente y

resulta difícil el análisis integrado de los efectos.
• Sicrófilos - rango: < 0-20°C, óptimo < 15oC
– organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis (nieve rosada),
bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium
– membrana contiene alto % de ácidos grasos insaturados
• Sicrótrofos o Sicrófilos facultativos
- rango: 0-35°C, óptimo 20-30oC
– Pseudomonas - crecen en el refrigerador
• Mesófilos - rango: 15-45° C, óptimo: 30-40°C
– la mayoría de los microorganismos (del suelo, aguas, patógenos)
• Termófilos - rango: 40-70°C, óptimo de 55-65oC
– membrana contiene alto % de ácidos grasos saturados
– enzimas estables al calor
– Bacillus stearothermophilus, organismos de compostaje
• Hipertermófilos - rango: 80-113°C, óptimo > 90oC
– Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)
 Oxígeno

Clasificación de los microorganismos según

el efecto del oxígeno:
Aerobios
obligados: requieren oxígeno (21% o más)
Ej. Bacillus, hongos, etc.
microaerofílicos: lo requieren pero a niveles menores que el
atmosférico (5-10%)
Ej. Azospirillum
Anaerobios
facultativos: no requieren oxígeno, pero el desarrollo es mejor
con oxígeno.
Ej. Levaduras, E. coli
aerotolerantes: no son sensibles al oxígeno (crecen en
ausencia o presencia de oxígeno).
Ej. Enterococcus faecalis, Sreptococcus spp.
.
obligados: no toleran el oxígeno, muere en su presencia
Ej. Methanobacterium, Clostridium
 Cultivos en anaerobiosis
•tubos con medio de cultivo llenos por completo.
•medios con sustancias que reaccionan con el oxígeno y lo excluyen.
•dispositivo especial (cámara anaeróbica)
•cajas o tubos incubados en recipientes con granos germinados (cebada, centeno)
 Otros gases
N2 componente principal de de la atmósfera (78%). Gas inerte: no es usado
por la mayoría de los organismos, los que pueden reducir el triple enlace del
N2 con la enzima nitrogenasa se denominan diazotrofos o fijadores de N2 y
pueden desarrollarse en ambientes sin N-combinado

CO tóxico para la mayoría de los organismos (cadena respiratoria)

puede ser oxidado a CO2 por algunos microorganismos

CH4 liberado a la atmósfera por microorganismos metanogénicos, gas con

efecto invernadero, puede ser oxidado a CO2 por bacterias metanotróficas

CO2 importante gas, fuente de carbono para los autotrofos, aerobios y

anaerobios, fotosintéticos o quimiosintéticos. Muchos hongos lo requieren a
niveles superiores a los atmósfericos, para ciertas síntesis

H2 poco usado, tóxico para la mayoría de los microorganismos, brinda

energía a bacterias Hydrogenomonas: H2+O2 = H20 + ATP
 pH
El pH es la acidez o alcalinidad de una solución,
medida por el log 1/(H+)

Clasificación de los microorganismos según su pH

óptimo
Neutrófilo: pH óptimo 7 - Ej.: bacterias
patógenas humanas.
Acidófilo: pH óptimo  7 - Ej.: muchas de las
archeobacterias y hongos.
Basófilo: pH óptimo  7 - Suelos y aguas
ricas en carbonatos
Medios de cultivo

MEDIO SELECTIVO Y
DIFERENCIAL
Colonia Lactosa negativa

Colonia Lactosa positiva

MATEMATICA DEL CRECIMIENTO EXPONENCIAL
Cuando se inocula una bacteria en un medio y ha
transcurrido el tiempo de generación de este
microorganismo, se forman dos células, después de
otra generación cuatro células después de la tercera
generación ocho células. Es decir en cada generación
sucesiva se duplica la población. La relación que existe
entre el número de células y las generaciones de un
cultivo creciendo en forma exponencial, puede
deducirse matemáticamente de la manera siguiente:
Se designa como:

x = Nº de bacterias al tiempo 0
y = Nº de bacterias al tiempo t
t = tiempo en crecimiento exponencial
Al tiempo 0 y = x
Después de: 1 generación y = x.2
Matemáticas del crecimiento de una población

a)Empezando con una célula, si

cada producto de la reproducción
se divide por fisión binaria, la
población se doblara con cada
nueva generación. Este proceso
puede ser representado con
logaritmos (2 elevado a un
exponente).

b)Al dibujar el log de las células

se produce una línea que indica
el crecimiento exponencial: si se
dibuja el numero de células
aritméticamente, se obtiene una
línea curva.
 Velocidad de crecimiento para algunas bacterias
representativas bajo condiciones óptimas.

Organismo Temperatura (◦C) Tiempo de generacion (min)

Bacillus stearothermophilus 60 11
Escherichia coli 37 20
Bacillus subtilis 37 27
Bacillus mycoides 37 28
Staphylococcus aureus 37 28
Streptococcus lactis 37 30
Lactobacillus acidophilus 37 75
Mycobacterium tuberculosis 37 360
Curva de crecimiento bifásica
SIEMBRA POR ESTRÍA
JARRA DE ANAEROBIOS
• Coloración de Gram Cocos gram
positivos distribuidos en forma de
racimos

• Prueba de catalasa
Diferenciación entre Géneros
Staphylococcus y Streptococcus
Reactivo: peróxido de hidrógeno
 Pruebas de Diferenciación entre
Staphylococcus

Fermentación de Coagulasa
Manitol

DNAsa
Agar Triple Azúcar Hierro(TSI)

• Fermentación de Lactosa, Sacarosa y

Glucosa
• Producción de H2S
• Producción de gas

Agar Lisina Hierro (LIA)

• Desaminación de lisina
• Descarboxilación de lisina
• Producción de H2S
 Agar Citrato
• Consumo de citrato como única
fuente de carbono

Medio Sulfuro – Indol – Motilidad (SIM)

• Producción de H2S
• Producción de indol
• Producción de enzima triptofanasa
• Presencia de motilidad
Medio RM – VP
• Consumo de glucosa por vía de
fermentación de ácidos mixtos o vía
butelinglicólica

Caldo Urea
• Producción de enzima ureasa
• Agar TSI y LIA

Primero introducir asa en punta hasta el fondo del tubo.

Al retirar el asa, sembrar en estría sobre la superficie
inclinada
• Agar Citrato
Sembrar en estría sobre la
superficie inclinada con asa en punta

• Medio SIM
Introducir el asa en punta sin llegar al
fondo del tubo y retirar por el mismo
lugar donde se introdujo