MA-DP-062

DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE

Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

OBJETIVO

Determinación cuantitativa de la concentración de pigmentos, por HPLC (Cromatografía Líquida de Alta

Presión – High Pressure Liquid Cromatography).
Determinación cuantitativa de impurezas de los pigmentos, por HPLC.

PRINCIPIO

Cromatografía:
Es un método físico de separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre
dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil.

Cromatografía líquida:
En esta la fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna que contiene a la fase fija.
La cromatografía líquida “clásica” se lleva a cabo en una columna generalmente de vidrio, la cual está
rellena con la fase fija. Luego de sembrar la muestra en la parte superior, se hace fluir la fase móvil a
través de la columna por efecto de la gravedad.

Cromatografía Líquida de Alta Presión HPLC:

Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamaño de las partículas de fase fija se
fue disminuyendo hasta el tamaño de los micrones, lo cual generó la necesidad de utilizar altas presiones
para lograr que fluya la fase móvil. La técnica de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC),
requiere de instrumental especial que permita trabajar con las altas presiones requeridas.

La Cromatografía Líquida de Alta Presión permite separar rápidamente y con gran resolución los
componentes de una mezcla, usando la composición adecuada del solvente, basada en los mismos
principios que la cromatografía líquida convencional, con una fase estacionaria resistente a elevadas
presiones. De esta manera se pueden separar los pigmentos y sus impurezas y determinarlos
cuantitativamente.

EQUIPO

Cromatógrafo HPLC

PROCEDIMIENTO

Ver anexo según pigmento a analizar.

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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

Determinación de Contenido y pureza por HPLC de:

IDH 44121 24DAPE
2,4-Diaminophenoxyethanol 2HCl

CONFIDENCIAL - Henkel-KGaA, KKD. Método Analítico No.: KOSA015CPX01 Fecha: 24.02.2006

INCI: 2,4-DIAMINOPHENOXYETHANOL HCl

Nombre Químico: 2-(2,4-diaminophenoxy)ethanol hydrochloride
CAS: 66422-95-5
Estructura de: 2,4-Diaminophenoxyethanol 2HCl

Columna: Discovery HS-F5, 5μm, 250x4mm

Eluente A: CH CN
3
Eluente B: 0,005 mol de Formato de amonio pH 4 / pH ajustado con Acido Fórmico
Gradiente: Tiempo Eluente A Eluente B
0 min. 11 % 89 %
10 min. 11 % 89 %
20 min. 50 % 50 %
45 min. 50 % 50 %
55 min. 11 % 89 %
Condiciones: Temp.: 40°C
Flujo: 1,0 ml/min.
UV/VIS: Detección a 220 nm
Volumen de Inyección: 20μL

Tiempo de corrida: 2,4-Diaminophenoxyethanol 2HCl aprox. 5,7 min.

Cantidad a pesar:
Curva de Calibración: Pesar aprox. 5mg (0,01mg de exactitud) de 2,4-Diaminophenoxyethanol 2HCl
muestra estándar en un balón aforado de 100mL. Disolver y completar con una mezcla de Eluente A:
Eluente B (11:89) [v/v]. Concentración final aprox. 50mg/L de 2,4-Diaminophenoxyethanol 2HCl.

Curva de muestra: Para contenido pesar aprox. 5mg (0,01mg de exactitud), para pureza pesar 10mg
(0,01mg de exactitud), de 2,4-Diaminophenoxyethanol 2HCl muestra en un balón aforado de 100mL,
disolver y completar a volumen con la mezcla Eluente A: Eluente B (11:89) [v/v]. Concentración final
aprox. 50 o 100mg/L 2,4-Diaminophenoxyethanol 2HCl, respectivamente.

Notas: • Las soluciones de calibración y muestra, son estables por pocos minutos. Trabajar rápidamente.
• Para la determinación de contenido de pigmento use la mezcla Eluente A: Eluente B (11:89)
[v/v] isocrático
• Periodo de reacondicionamiento después de la corrida: 10 minutes

Cálculos: • Ver método estándar según referencia analizada.

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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

Determinación de impurezas por HPLC en

IDH 44121 24DAPE
2,4-Diaminophenoxyethanol 2HCl

CONFIDENCIAL - Henkel-KGaA, KKD. Método Analítico No.: KOSA015IXX02 Fecha: 24.02.2006

Impurezas: 2,4-Diaminoanisole, m-Phenylenediamine

INCI: 2,4-DIAMINOPHENOXYETHANOL HCl
Nombre Químico: 2-(2,4-diaminophenoxy)ethanol hydrochloride
CAS: 66422-95-5
Estructura de: 2,4-Diaminophenoxyethanol 2HCl

Columna: SeQuant ZIC-HILIC, 5μm, 250x4,6mm

Eluente A: CH CN/40 mM Acetato de amonio en agua (97:03) [v/v]

3

Condiciones: Temp.: 25°C

Flujo: 0,5 ml/min.
UV/VIS: Detección a 220 nm
Volumen de Inyección: 20μL

Tiempo de corrida: 2,4-Diaminophenoxyethanol 2HCl aprox. 11,8 min.

m-Phenylenediamine aprox. 8,2 min.
2,4-Diaminoanisole aprox. 7,7 min.

Cantidad a pesar:

Curva de calibración: Pesar aprox. 5mg (0,01mg de exactitud) de cada muestra estándar en un balón
aforado de 100mL. Disolver y completar a volumen con Eluente A. Tomar alícuota de 1mL y llevar a
100mL con Eluente A. Concentración final: aprox. 0,5mg/L de cada impureza.

Curva de muestra: Pesar aprox. 30mg (0,01mg de exactitud) de 2,4-Diaminophenoxyethanol 2HCl en un

balón aforado de 50 ml., disolver y completar a volumen con Eluente A. Concentración final aprox.
600mg/L de 2,4-Diaminophenoxyethanol 2HCl

Nota: • Las soluciones de calibración y muestra, son estables por pocos minutos. Trabajar rápidamente.

Cálculos: • Ver método estándar según referencia analizada.

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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
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PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Ejemplo del Cromatograma:

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PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

Determinación de contenido y pureza por HPLC de

IDH 44135 2MR
2-Methylresorcinol

CONFIDENCIAL - Henkel-KGaA, KKD. Método Analítico No.: KOSA044CPX01 Fecha: 24.02.2006

INCI: 2-METHYLRESORCINOL
Nombre Químico: 2-Methylbenzene-1,3-diol
CAS: 608-25-3
Estructura de: 2-Methylresorcinol

Columna: Novapak C18, 4μm, 150x3,9mm

Buffer(6,9): pesar 0,01 mol NaH PO + 0,01 mol Na HPO por litro de agua, mezclar con acetonitrilo así:
2 4 2 4
Eluente A: CH CN/buffer 6,9 (05:95) [v/v]
3
Eluente B: CH CN/buffer 6,9 (50:50) [v/v]
3
Gradiente: Tiempo Eluente A Eluente B
0 min. 100 % 0%
8 min. 100 % 0%
20 min. 0% 100 %
50 min. 0% 100 %
60 min. 100 % 0%
Condiciones: Temp.: 23°C
Flujo: 1,0 ml/min.
UV/VIS: Detección a 220 nm
Volumen de inyección: 20μL

Tiempo de corrida: Resorcinol aprox. 4,2 min.

Cantidad a pesar:

Curva de Calibración: Pesar aprox. 7mg (0,01mg de exactitud) de 2-Methylresorcinol muestra estándar en
un balón aforado de 100mL. Disolver y completar a volumen con Eluente A. Concentración final aprox.
70mg/L de 2-Methylresorcinol.

Curva de muestra: Para contenido pesar aprox. 7mg (0,01mg de exactitud), para pureza pesar aprox.
10mg (0,01mg de exactitud), de 2-Methylresorcinol muestra en un balón aforado de 100mL., Disolver y
completar a volumen con Eluente A. Concentración final aprox.70 o 100mg/L 2-Methylresorcinol.
respectivamente

Notas: • Las soluciones de calibración y muestra, son estables por pocos minutos. Trabajar rápidamente.
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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

• Para la determinación de contenido de pigmento use Eluente A isocrático

Cálculos: • Ver método estándar según referencia analizada.

Ejemplo del Cromatograma:

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Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Determinación por HPLC de impurezas de

IDH 44135 2MR
2-Methylresorcinol

CONFIDENCIAL - Henkel-KGaA, KKD. Método Analítico No.: KOSA044IXX01 Fecha: 24.02.2006

Impurezas: Resorcinol, 2,5-Dimethylbenzene-1,3-diol, 5-tert-Butyl-2-methylbenzene-1,3- diol
INCI: 2-METHYLRESORCINOL
Nombre Químico: 2-Methylbenzene-1,3-diol
CAS: 608-25-3
Estructura de: 2-Methylresorcinol

Columna: WATERS – Novapak C18, 4μm, 150x3,9mm

Buffer(6,9): pesar 0,01 mol NaH PO + 0,01 mol Na HPO por litro de agua, mezclar con acetonitrilo así:
2 4 2 4
Eluente A: CH CN/buffer 6,9 (05:95) [v/v]
3
Eluente B: CH CN/buffer 6,9 (30:70) [v/v]
3
Gradiente: Tiempo Eluente A Eluente B
0 min. 100 % 0%
10 min. 0% 100 %
30 min. 0% 100 %

Condiciones: Temp.: 40°C

Flujo: 1,0 ml/min.
UV/VIS: Detección a 220 nm
Volumen de Inyección: 20μL

Tiempo de corrida: Resorcinol aprox.4,2 min.

2-Methylresorcinol aprox.4,8 min.
2,5-Dimethylbenzene-1,3-diol aprox. 8,3 min.
5-tert-Butyl-2-methylbenzene-1,3-diol aprox. 15,9 min. (no hay ref. disponible)
Cantidad a pesar:

Curva de Calibración: Pesar aprox. 5mg (0,01mg de exactitud) de cada estándar de impureza en un
balón aforado de 100mL. Disolver y completar a volumen con el Eluente A. Tomar una alícuota de 1mL y
llevar a volumen en un balón aforado de 100mL con el Eluente A. Concentración final: aprox. 0,5mg/L de
cada impureza.

Curva de muestra: pesar aprox. 25mg (0,01mg de exactitud) de 2-Methylresorcinol en un balón aforado
de 50mL disolver y completar a volumen con Eluente A. Concentración final aprox. 500 mg/L 2-
Methylresorcinol.

Nota: • Las soluciones de calibración y muestra, son estables por pocos minutos. Trabajar rápidamente

Cálculos: • Ver método estándar según referencia analizada.

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Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Ejemplo del Cromatograma:

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Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

Determinación de Contenido, pureza e impurezas por HPLC de:

IDH 43810 BDPP
1,3-Bis-(2,4-diaminophenoxy)-propane 4HCl

CONFIDENCIAL - Henkel-KGaA, KKD. Método Analítico No.: KOSA079CPI02 Fecha: 02.02.2007

Impurezas: 3-(2,4-diaminophenoxy)propan-1-ol
INCI: 1,3-BIS-(2,4-DIAMINOPHENOXY)PROPANE HCL
Nombre Químico: 3-Amino-4-[3-(2.4-diaminophenoxy)propoxy]phenylamine tetrahydrochloride
CAS-No.: [74918-21-1]
Estructura de: 1,3-Bis-(2,4-diaminophenoxy)-propane *4HCl

Columna: LiChrosphere RP8 (5μm), 125 * 4,0mm

Buffer PIC B8: pesar 0,01 mol NaH PO *H O + 0,005 mol Acido 1-Octanesulfónico, sal sódica hidratada
2 4 2
[C H NaO S* H O] por litro de agua; ajustar a pH 2,5 con ácido fosfórico; mezclar con acetonitrilo así:
8 17 3 2
Eluente A: CH CN/buffer PIC B8 pH 2,5 (20:80) [v/v]
3
Eluente B: CH CN/buffer PIC B8 pH 2,5 (50:50) [v/v]
3
Gradiente: Tiempo Eluente A Eluente B
0 min. 100 % 0%
5 min. 100 % 0%
20 min. 0% 100 %
40 min. 0% 100 %
55 min. 100 % 0%
Condiciones: Temp.: 40°C
Flujo: 1,0 ml/min.
UV:Detección a 220 nm
Volumen de Inyección.: 20μL

Tiempo de Corrida: 3-(2,4-diaminophenoxy)propan-1-ol aprox. 2,2 min.

1,3-Bis-(2,4-diaminophenoxy)-propane *4HCl aprox. 4,6 min.

Cantidad a pesar:

Curva de Calibración: Pesar aprox.20mg (0,01mg de exactitud) de 1,3-Bis-(2,4-diaminophenoxy)-propane

*4HCl muestra estándar en un balón aforado de 100mL. Disolver y completar a volumen con Eluente A.
Tomar una alícuota de 5mL y llevar a 50mL con Eluente A. Concentración final aprox. 20mg/L 1,3-Bis-
(2,4-diaminophenoxy)-propane *4HCl.

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Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

Curva de muestra: Pesar aprox. 20mg (0,01mg de exactitud) de 1,3-Bis-(2,4-diaminophenoxy)-propane

*4HCl muestra en un balón aforado de 50mL. Disolver y completar a volumen con Eluente A. Tomar una
alícuota de 5mL y llevar a 50mL con Eluente A. Concentración final aprox. 20mg/L 1,3-Bis-(2,4-
diaminophenoxy)-propane *4HCl.

Curva de muestra para determinación de pureza: Pesar aprox. 10mg (0,01mg de exactitud) de 1,3-Bis-
(2,4-diaminophenoxy)-propane *4HCl muestra en un balón aforado de 100mL, Disolver y completar a
volumen con Eluente A. Concentración final aprox.100mg/L 1,3-Bis-(2,4-diaminophenoxy)-propane *4HCl.

Nota: • Las soluciones de calibración y muestra, son estables por pocos minutos. Trabajar rápidamente.

Cálculos: • Ver método estándar según referencia analizada

• Para la determinación de contenido de pigmento use Eluente A isocrático
• La concentración de 3-(2,4-diaminophenoxy)propan-1-ol resultado sobre el área %

Ejemplo del Cromatograma:

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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

Determinación de Contenido, pureza e impurezas por HPLC de:

IDH 39999 3ACM
2-Chlor-6-methyl-3-aminophenol

CONFIDENCIAL - Henkel-KGaA, KKD. Método Analítico KOSA094CPI02 Fecha: 06.09.2007

Impurezas: p-Amino-o-crisol, 5-Amino-4-cloro-2-methylphenol, 3-Amino-2,4- dichloro-6-methylphenol

INCI: 5-AMINO-6-CHLORO-O-CRESOL
CAS-No.: 283-144-9
Estructura de “2-Chlor-6-methyl-3-aminophenol”:

Columna: NovaPak C18 (4μm), 150 * 3,9mm

Buffer(6,9):pesar 0,01 mol NaH PO *H O+ 0,01 mol Na HPO *2 H O por litro de agua, mezclar con
2 4 2 2 4 2
acetonitrilo asi:
Eluente A: CH CN/buffer 6,9 (20:80) [v/v]
3
Eluente B: CH CN/buffer 6,9 (50:50) [v/v]
3

Condiciones: Temp.: 40°C

Flujo: 1,0 ml/min.
UV-Detección a 220 nm
Volumen de Inyección.: 20μL

Gradiente: Tiempo Eluente A Eluente B

0 min. 100 % 0%
10 min. 100 % 0%
20 min. 0% 100 %
45 min. 0% 100 %
50 min. 100 % 0%

Tiempo de corrida: p-Amino-o-crisol aprox. 2,2 min.

2-Chlor-6-methyl-3-aminophenol aprox. 4,3 min.
5-Amino-4-cloro-2-methylphenol aprox. 8,1 min.
3-Amino-2,4-dichloro-6-methylphenol aprox. 17 min. (Area%- no ref.)

Cantidad a pesar:
Curva de calibración - Impurezas: Pesar aprox. 3mg (0,01mg de exactitud) de cada estándar de
impurezas en un balón aforado de 100 mL, adicionar aprox.15mg ácido ascórbico. Disolver y completar a
volumen con el Eluente. Tomar una alícuota de 1mL y llevar a 100mL con Eluente. Concentración final:
aprox. 0,3mg/L para cada impureza.

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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

Curva de calibración - contenido: Pesar aprox. 5mg (0,01mg de exactitud) de estándar de 3-Amino-2-
cloro-6-methylphenol en un balón aforado de 50mL y adicionar aprox. 15mg de ácido ascórbico. Disolver
y llevar a volumen con Eluente.

Curva de muestra: Pesar aprox. 5mg (para curva de contenido o pureza) y aprox. 15-30mg (0,01mg de
exactitud) (para Determinación de impurezas) de 3-Amino-2-cloro-6-methylphenol muestra en un balón
aforado de 50mL, adicione aprox. 15mg de ácido ascórbico, disolver y completar a volumen con el
Eluente. Concentración final aprox. 100 / 300-600mg/L de 3-Amino-2-cloro-6-methylphenol.

Notas: • Las soluciones de calibración y muestra, son estables por pocos minutos. Trabajar rápidamente
• Para la determinación de contenido de pigmento y las impurezas use Eluente A isocrático
• Para chequeo de pureza no agregue acido ascórbico

Calculo:
• Método estándar según referencia

Ejemplo de Cromatograma:

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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

Determinación de contenido y pureza por HPLC de

IDH 92555 34PAN
“4-Amino-3-nitrophenol”
CONFIDENCIAL - Henkel-KGaA, KKD. Método Analítico No.: KOSB051CPX01 Fecha: 22.05.2006

Pigmento: 4-Amino-3-nitrophenol
INCI: 4-AMINO-3-NITROPHENOL
CAS: 610-81-1
Estructura de: 4-Amino-3-nitrophenol

Columna: Novapak C18, 4μm, 150x3,9mm

Buffer (6,9): pesar 0,01 mol NaH PO + 0,01 mol Na HPO por litro de agua, mezclar con acetonitrilo así:
2 4 2 4
Eluente A: CH CN/buffer 6,9 (08:92) [v/v]
3
Eluente B: CH CN/buffer 6,9 (50:50) [v/v]
3
Gradiente: Tiempo Eluente A Eluente B
0 min. 100 % 0%
8 min. 100 % 0%
20 min. 0% 100 %
50 min. 0% 100 %
60 min. 100 % 0%
Condiciones: Temp.: 40°C
Flujo: 1,0 ml/min.
UV/VIS-Detección a229 nm
Volumen de Inyección:20μL

Tiempo de corrida: 4-Amino-3-nitrophenol aprox. 6,4 min.

Cantidad a pesar:

Curva de calibración: Pesar aprox. 15mg (0,01mg de exactitud) de 4-Amino-3nitrophenol muestra

estándar en un balón aforado de 50mL. Disolver y completar a volumen con Eluente A. Tomar una
alícuota de 5mL y llevar a 50mL con Eluente A. Concentración final: aprox. 30mg/L 4-Amino-3-
nitrophenol.

Curva de muestra: Para contenido pesar aprox. 15mg (0,01mg de exactitud), para la prueba de pureza
pesar aprox. 40mg (0,01mg de exactitud), de 4-Amino-3-nitrophenol muestra en un balón aforado de

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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

50mL. Disolver y completar a volumen con Eluente A. Tomar una alícuota de 5mL llevar a 50mL con
Eluente A. Concentración final: aprox. 30 o 80mg/L 4-Amino-3-nitrophenol. respectivamente.

Notas:
• Para la determinación de contenido de pigmento use Eluente A isocrático
• El periodo de reacondicionamiento después de curva de gradiente es 10 minutos

Cálculo
• Método estándar según la referencia.

Ejemplo de Cromatograma:

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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

Determinación de Impurezas por HPLC de

IDH 92555 34PAN
“4-Amino-3-nitrophenol”
CONFIDENCIAL - Henkel-KGaA, KKD. Método Analítico No.: KOSB051IXX01 Fecha:: 22.05.2006

Impurezas: p-Aminophenol
INCI: 4-AMINO-3-NITROPHENOL
CAS: 610-81-1
Estructura de: 4-Amino-3-nitrophenol

Columna: Lichrospher RP 8, 5μm, 250x4,0mm

Buffer (6,9): pesar 0,01 mol NaH PO + 0,01 mol Na HPO por litro de agua, mezclar con acetonitrilo así:
2 4 2 4
Eluente A: CH CN/buffer 6,9 (05:95) [v/v]
3

Condiciones: Temp.: 23°C

Flujo: 1,0 ml/min.
UV/VIS-Detección a220 nm
Volumen de Inyección:20μL

Tiempo de corrida: p-Aminophenol aprox. 4,4 min.

4-Amino-3-nitrophenpol aprox. 14,5 min.

Cantidad a pesar:

Curva de calibración: Pesar aprox. 5mg (0,01mg de exactitud) de p-Aminophenol muestra estándar en un
balón aforado de 100mL. Disolver y llenar con Eluente A. Tomar una alícuota de 1mL y llevar a 100mL
con EluenteA. Concentración final:aprox. 0,5mg/L p-Aminophenol.

Curva de muestra: Pesar aprox. 40mg (0,01mg de exactitud) de 4-Amino-3-nitrophenol muestra en un

balón aforado de 50mL. Disolver y completar a volumen con Eluente A. Concentración final: aprox.
800mg/L 4-Amino-3-nitrophenol.

Cálculo
• Método estándar según la referencia.

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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Ejemplo de Cromatograma:

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Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
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Fecha: 18-03-2009

Determinación de contenido y pureza por HPLC de

IDH 46853 24PAC
2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol
CONFIDENCIAL - Henkel-KGaA, KKD. Método Analítico No.: KOSB099CPX01 Fecha: 13.02.2006

Pigmento: 2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol,
INCI: 2-AMINO-6-CHLORO-4-NITROPHENOL
CAS: 6358-99-4
Estructura de: 2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol

Columna: NovaPak RP 18, 150 mm*∅ 3,9 mm

Buffer (6,9): pesar 0,01 mol NaH PO + 0,01 mol Na HPO por litro de agua, mezclar con acetonitrilo así:
2 4 2 4
Eluente A: acetonitrilo /buffer pH 6,9 (05:95) (v/v)
Eluente B: acetonitrilo /buffer pH 6,9 (50:50) (v/v)
Gradiente: Tiempo Eluente A Eluente B
0 min. 100 % 0%
5 min. 100 % 0%
20 min. 0% 100 %
50 min. 0% 100 %
60 min. 100 % 0%
Condiciones: Temp.: 40°C
Flujo: 1,0 ml/min.
UV-Detección a230 nm
Volumen de Inyección:20μL

Tiempo de corrida: 2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol aprox. 4,0 min.

Cantidad a pesar:

Curva de calibración: Pesar aprox. 5mg (0,01mg de exactitud) de 2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol muestra

de referencia en un balón aforado de 100mL. Disolver y completar a volumen con Eluente A.
Concentración final aprox. 50 mg/L 2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol.

Curva de muestra: Para contenido pesar aprox. 5mg (0,01mg de exactitud); para la prueba de pureza
pesar aprox. 20mg (0,01mg de exactitud), de 2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol muestra en un balón
aforado de 100mL. Disolver con Eluente A. Concentración final: aprox. 50 o 200mg/L 2-Amino-6-chloro-4-
nitrophenol. respectivamente

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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
Revisión: 0
Fecha: 18-03-2009

Notas: • Para la determinación de contenido de pigmento use Eluente A isocrático

• El periodo de reacondicionamiento después de curva de gradiente es 10 minutos
Cálculo
• El contenido de pigmento es evaluado por el método estándar según la referencia.
• La pureza es evaluada por el método de porcentaje de área.

Ejemplo de Cromatograma:

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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
Revisión: 0
Fecha: 18-03-2009

Determinación de Impurezas por HPLC de

IDH 46853 24PAC
2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol
CONFIDENCIAL - Henkel-KGaA, KKD. Método Analítico No.: KOSB099IXX01 Fecha: 13.02.2006

Pigmento: 2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol
Impurezas: 2-Chlor-4,6-dinitrophenol
INCI: 2-AMINO-6-CHLORO-4-NITROPHENOL
CAS: 6358-99-4
Estructura de: 2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol

Columna: NovaPak RP 18, 150 mm*∅ 3,9 mm

Buffer (6,9): pesar 0,01 mol NaH PO + 0,01 mol Na HPO por litro de agua, mezclar con acetonitrilo así:
2 4 2 4
Eluente A: acetonitrilo /buffer pH 6,9 (05:95) (v/v)
Eluente B: acetonitrilo /buffer pH 6,9 (40:60) (v/v)
Gradiente: Tiempo Eluente A Eluente B
0 min. 100 % 0%
5 min. 0% 100 %
10 min. 0% 100 %
15 min. 100 % 0%
Condiciones: Temp.: 40°C
Flujo: 1,0 ml/min.
UV-Detección a230 nm
Volumen de Inyección:20μL

Tiempo de corrida: 2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol aprox. 2,2 min.

2-Chlor-4,6-dinitrophenol aprox. 6,2 min.

Cantidad a pesar:

Curva de calibración: Pesar aprox. 3mg (0,01mg de exactitud) de 2-Chlor-4,6-dinitrophenol muestra de

referencia en un balón aforado de 100mL . Disolver y llevar a volumen con Eluente A. Tomar una alícuota
de 1mL y llevar a 100mL con Eluente A. Concentración final: aprox. 0,3mg/L 2-Chlor-4,6-dinitrophenol.

Curva de muestra: Pesar aprox. 40mg (0,01mg de exactitud) de 2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol muestra

en un balón aforado de 50mL Disolver y completar a volumen con Eluente A. Concentración final:aprox.
800mg/L 2-Amino-6-chloro-4-nitrophenol.

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DETERMINACION DE CONTENIDO DE IMPUREZAS DE
Fecha de Creación:
PIGMENTOS POR HPLC 18-03-2009
Revisión: 0
Fecha: 18-03-2009

Nota: • El periodo de reacondicionamiento después de curva de gradiente es 10 minutos

Cálculo: • El contenido de impureza es evaluado con el método estándar según la referencia.

Ejemplo de Cromatograma:

Elaboró Revisó Aprobó

Nancy Barahona Liliana Guerrero Francy Díaz

Jefe de Desarrollo de Producto Profesional de Desarrollo de Gerente de Desarrollo de
Producto Producto

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