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EL LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR

INTRODUCCION
El Laboratorio de Biología Molecular, es un área o ambiente en donde el
principal objeto de estudio son las proteínas, Ácidos nucleicos y células, debe
contar con un stock de reactivos base para preparar otro tipo de soluciones,
contar con los equipos e instrumentales necesarios para la manipulación de
Ácidos nucleicos, proteínas y células, finalmente, debe contar con cajas o
recipientes especiales para el manejo de residuos. En el presente protocolo se
muestra los requerimientos básicos para el funcionamiento de un laboratorio de
Biología Molecular.
OBJETIVOS:
1) Listar los reactivos stock
2) Describir la función y el cuidado de los principales equipos e
instrumentación de un laboratorio de Biología Molecular.

Reactivos Stock:
Antes de listar las soluciones stock, es importante recordar algunos datos de
Soluciones que e aprendieron en cursos de Bioquímica, Pero OJO! no
confundir con la masa molecular relativa MR, que aunque coincide
numéricamente con M no lleva unidades de masa, sino que, justamente es
relativa y nos dice cuantas veces más pesada es una molécula de una
sustancia respecto de la unidad de masa atómica (u.m.a.), ó de 1 Dalton (Da),
que corresponde al átomo hidrógeno. Así, la Mr. del agua es 18 u.m.a. o 18 Da,
o bien, 18 veces más pesada que un átomo de hidrógeno.
 Las unidades de concentración que utilizaremos serán:
o % p/p: Porcentaje masa en masa, g de soluto por cada 100 g de
solución (SN) (soluto + solvente).
o % p/v: Porcentaje masa en volumen, g de soluto por cada 100
cm3 o 100 ml de SN.
o % v/v: Porcentaje volumen en volumen, ml de soluto por cada
100 ml de SN.
o M: Molaridad, Nº de moles de soluto por cada 1 litro o 1000 cm3
de Solución.
o m: Molalidad, Nº de moles de soluto por cada 1 Kg de solvente.
 o N: Normalidad, Nº de equivalentes de un ácido o de una base por
cada 1 litro de Solución.
Ejemplo: Una solución 2 M de HCl es lo mismo que una solución 2 N, mientras
que una solución 4 M de ácido sulfúrico será lo mismo que una solución 8 N
para este ácido.
Todas las soluciones deben de prepararse con agua des-ionizada y guardar en
condiciones que indican los manuales. Los estudiantes deben averiguar los
pesos moleculares de los reactivos listados y deben hacer los cálculos para la
preparación de las soluciones que se les solicitan; deben buscar en manuales
de biología molecular los procedimientos sugeridos para preparar las
soluciones que les solicitan. Son un total de 11 reactivos que serán utilizados
en las practicas durante todo el curso, cada reactivo es suficiente para todo el
grupo:
1. Preparar 200 mL de TAE 50 X
2. Preparar 200 mL de agarosa al 0.7 % en TAE 1 X
3. Preparar 20 mL de NaCl 5N
4. Preparar 50 mL de Tris-HCl pH 7.5, 1 M
5. Preparar 20 mL de MgCl2 1 M
6. Preparar 50 mL de EDTA 0.5 M, pH 8.0
7. Preparar 50 mL de NaOH 2 N
8. Preparar 50 mL de Acetato de potasio 5 M
9. Preparar 50 mL de glucosa 1 M
10. Preparar 20 mL de SDS 10 %
11. Preparar 50 mL de HCl 2 N
12. Preparar 20 mL de Acetato de sodio 3 M pH 5.2
Ejercicio, escriba las recetas para los 12 soluciones stock.

Equipos e instrumental básico.

 PCRs convencionales y de gradiente
 PCR cuantitativa en tiempo real
 Concentrador de DNA (Speed-vac)
 Microcentrífugas, centrífuga de rotor angular y de rotor oscilante.
 Campana de flujo laminar
 Campanas de PCR
  Equipos de electroforesis de DNA
 Agitadores convencionales y de balanceo
 Incubador-agitador
 Horno de hibridación
 Equipos de electroforesis de proteínas (vertical i IEF)
 Equipos para cuantificación de DNA, RNA y
proteínas (Espectofotómetro y fluorímetro)
 Equipo de documentación de geles
 Sonicador
 Equipos de refrigeración (+4ºC, -20 ºC y -80ºC)

Equipos generales de laboratorio: pH-metro, balanza, autoclave, bombas de

vacío, baños termostáticos, homogenizadores y Micropipetas.
Se debe prestar mucha atencion al ultimo instrumento, LAS MICROPIPETAS,
que son la herramienta de primera en el laboratorio:
Las micropipetas son empleados para absorber y transferir pequeños
volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas.
Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo: los
más habituales, denominados p2, p20, p200 y p1000, admiten un máximo de 2,
20, 200 y 1000 μl, respectivamente. El uso de micropipetas permite emplear
distintos líquidos sin tener
que lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables (o tip), de
plástico, que habitualmente.. Algunas consideraciones generales sobre su uso:
Las micropipetas tipo Gilson tienen en la parte superior del émbolo su
identificación: P20, P200, P1000, etc.
Los volúmenes mínimos y máximos de las pipeta tipo Gilson son los siguientes:
Pipeta : Vol. mínimo - Vol. máximo
 P20: 2 - 20
 P100: 10 - 100
 P200 : 20 - 200
 P1000: 200 - 1000
Para ajustar el volumen que se desea utilizar, debe girarse la rueda que se
encuentra detrás del visor que indica el volumen. La rueda debe ser girada
suavemente, NUNCA FORZARLA. NUNCA EXCEDER LOS VALORES
ESTABLECIDOS EN EL PUNTO 1, YA QUE SE DESCALIBRA O SE ROMPE.
El valor de estas pipetas es aproximadamente $ 400 Dependiendo la marca y
el modelo, los volúmenes se indican de distinta manera, para las pipetas tipo
Gilson:
Para P20 los dos superiores indican la decena y la unidad en microlitros “μl”, el
tercer número (que está en otro color) indica la primer cifra después de la
coma. Para la P200 los tres números indican centena, decena y unidad en μl
respectivamente.
Para la P1000 que solo tienen tres cifras en el visor, el primer número (en otro
color) corresponde a la unidad de mil μl, los otros dos la centena y la decena.
Otros modelos tienen los cuatro dígitos correspondientes al millar, centena,
decena y unidad.

Principales técnicas que se manejan en el laboratorio.

 Extracción, Cuantificación y Amplificación DNA/RNA
 Clonación, confección de librerias de DNA/RNA
 Hibridación in situ (CARD-FISH)
 Hibridación in situ con sondas de RNA
 Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)
 Análisis de polimorfismos: microsatélites, T-RFLP’s
 Extracción y Cuantificación de proteínas
 Electroforesis nativa
 Electroforesis SDS-PAGE (1-D, 2-D)
 Isoelectrofocusing (IEF)
 Western blot
 Inmunofluorescencia
 Bioinformatica

Actividades:
Describa los principales equipos de BGM presentes en el laboratorio de
practicas. ( foto, uso, cuidado)
Discutir y resumir 4 de los metodos que seran utilizados en la primera
fase del cursolos metodos (4 lineas)