1.

MEDIOS DE CULTIVO ESPECIALIZADOS

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1.1. AGAR CISTINA-TELURITO
Serum Tellurite Agar (agar suero de telurito) es un medio selectivo y de
diferenciación utilizado principalmente para el aislamiento y la identificación de
Corynebacterium diphtheriae
1.1.1. COMPONENTES

Fórmula aproximada por litro de agua purificada

Paptona de proteosa 20,0 g
Cloruro sódico 5,0 g
Agar 20,0 g
Suero de Cordero 50.0 mL
Solución de Telurito Potásico 1% 10.0 mL

1.1.2. FUNDAMENTO
Serum Tellurite Agar, que contiene suero de cordero y telurito potásico, fue
desarrollado para su uso en el examen de cultivos nasales, faríngeos y
vaginales con el fin de aislar la especie Corynebacterium. Los organismos
diferentes de Corynebacterium diphtheriae; es decir, las especies
Staphylococcus, pueden reducir el telurito y producir colonias de color
negro en Serum Tellurite Agar. Algunas pruebas diagnósticas pueden
realizarse desde la placa de aislamiento primario. Sin embargo se
recomienda un cultivo puro para realizar las pruebas bioquímicas y otros
procedimientos de identificación. Consultar los textos correspondientes
para obtener información detallada y procedimientos recomendados7-
9.Sólo en raras ocasiones es posible detectar en un único medio todos los
organismos de importancia potencial en una muestra. Los cultivos de
muestras cultivadas en medios selectivos consiguiente deben compararse
con muestras cultivadas en medios no selectivos para obtener información
adicional y favorecer la recuperación de patógenos potenciales.

1.2. CALDO DE CULTIVO LIM

Lim Broth (caldo Lim) se utiliza para el enriquecimiento selectivo de
estreptococos del grupo B (Streptococcus agalactiae).
1.2.1. COMPONENTES

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

Infusión de corazón de (sólidos 3,1 g
Peptonas 20,0 g
Dextrosa 2,0 g
Cloruro sódico 2,0 g
Carbonato sódico 0,4 g
Fosfato disódico 2,5 g
Extracto de levadura 10,0 g
Colistina 0,01 g
Acido nalidíxico 0,015 g

1.2.2. FUNDAMENTO
Desde su aparición en los años 70, la enfermedad neonatal estreptocócica
del grupo B se ha convertido en la causa infecciosa más importante de
enfermedad y fallecimiento entre los recién nacidos. Antes de 1994,
aproximadamente 7.600 casos de enfermedad invasiva estreptocócica del
 grupo B, principalmente sepsis y meningitis, ocurrían en los recién nacidos
cada año en Estados Unidos, siendo precoces alrededor del 80% de dichos
casos (dentro de la primera semana de vida)1. La enfermedad se propaga
a los recién nacidos por transmisión vertical de madre portadora de
estreptococos del grupo B en el recto o los genitales. Lim y colegas
combinaron el uso de un medio de caldo selectivo enriquecido y la prueba
de coaglutinación en portaobjetos para detectar rápidamente dichas
pacientes. Los Centers for Disease Control and Prevention (CDC) han
propuesto directrices para la detección y el uso de la quimioprofilaxis
intraparto para la prevención de la enfermedad neonatal estreptocócica del
grupo B6. El uso de Todd Hewitt Broth con colistina y ácido nalidíxico se
recomienda para maximizar las posibilidades de recuperación de
estreptococos del grupo B en placas de agar sangre de carnero1. Lim Broth
se prepara a partir de Todd Hewitt Broth añadiendo colistina y ácido
nalidíxico, en las concentraciones recomendadas, más extracto de levadura
para favorecer el crecimiento de los estreptococos del grupo B2.También
se han detectado estreptococos del grupo B en casos de sepsis en mujeres
no parturientas, hombres, infección de las articulaciones, osteomielitis,
infección de las vías urinarias e infección de heridas. Se asocian con
endocarditis, neumonía e infecciones cutáneas y de tejidos blandos en
pacientes inmunodeprimidos.

1.3. AGAR SORBITOL DE MacCONKEY

Medio selectivo y diferencial para la detección, aislamiento y enumeración de
coliformes a partir de muestras diversas.

1.3.1. COMPONENTES

FORMULA EN g/L
Peptona 20.0
Lactosa 10.0
Sales biliares 2.5
Cloruro sódico 5.0
Cloruro sódico 0.005
Cristal violeta 0.001
Agar - agar 15

pH del medio a punto de uso aprox. 7.2

Añadir 52,5 g. de polvo a un litro de agua destilada y Llevar a ebullición.
Esterilizar al autoclave durante 15 minutos a 121 0 C.

1.3.2. FUNDAMENTO
Los medios de McConkey gozan de un gran prestigio como sistemas de
enriquecimiento para bacterias coliformes. McConkey formula su caldo a
principio de siglo e inicialmente incluyo bilis bovina como inhibidor de la
flora gram-positiva y tornasol como indicador de la producción de ácido
cuando fermenta la lactosa. Posteriormente el mismo autor cambia el
indicador por rojo de fenol que permitía unas lecturas más fáciles y
precisas. A medida que se han incrementado los conocimientos sobre la
fisiología bacteriana, se han producido modificaciones en el medio
original para adaptarlo cada vez más a la finalidad que se destina: la
 detección de coliformes. Las modificaciones más sustanciales han sido
las siguientes: La sustitución de sales biliares en lugar de la bilis 10 cual
confiere una mayor selectividad al medio, al misrno tiempo que elimina la
turbidez inherente a las sustancias grasas de la bilis entera. La
concentración de este inhibidor es muy variable, dependiendo
esencialmente de la riqueza en taurocolato y desoxicolato. Otra
nidificación importante ha sido la inclusión de otros inhibidores como el
cristal violeta y/o el verde brillante. Esta versión que goza de mayor
popularidad en América que en Europa donde se prefiere el medio con
menor selectividad debida solamente a las sales biliares. Durante la
década de los sesenta se puso de manifiesto que el rojo neutro resultaba
toxico para ciertas cepas de coliformes y en especial para Escherichia
coli, por 10 que los especialistas buscaron otro indicador de pH del mismo
0 parecido rango de viraje. Encontrando en el purpura de bromocresol
cuya toxicidad es muy inferior a la del rojo neutro. Aunque no debe
considerarse como una verdadera modificación de todas las
formulaciones Líquidas se han hecho medios solidos añadiendo Ia
cantidad suficiente de agar-agar para ello. Se consigue así un medio
diferencial de baja selectividad en el que las bacterias fermentadoras de
lactosa producen colonias rojas debido a la gran acidificación y,
concretamente Escherichia coli Ilega a precipitar las sales biliares que
forman un halo alrededor de sus colonias que se distingue fácilmente. En
su programa de fabricación ADSA- MIC RO incluye las siguientes
variaciones de los medios de McConkey.

1.4. AGAR REGAN LOWE

El medio Regan-Lowe Agar es un medio selectivo utilizado para el
aislamiento de Bordetella pertussis de muestras clínicas

1.4.1. COMPONENTES

COMPOSICION POR LITRO DE MEDIO EN AGUA PURIFICADA

Extracto de carne 10 ,0g
Hidrolizado pancreático de caseína 10 ,0g
Almidón soluble 10 ,0g
Cloruro sódico 5,0 g
Carbón (activado) 4,0 g
Niacina ( ácido nicotínico) 0,01 g
Sangre desfibrinada de caballo 10 %
Cefalexina 0,04 g
Agar 12,0 g

pH : 7,4 +/- 0,2

1.4.2. FUNDAMENTO
Todas las especies Bordetella son patógenos de las vías respiratorias y
residen en las células epiteliales ciliadas del sistema respiratorio. B.
pertussis y B. parapertussis son patógenos exclusivamente humanos.
B. pertussis es la causa principal de la tos convulsa (o tos ferina). B.
parapertussis se asocia con la forma más leve de esta enfermedad. B.
bronchiseptica es principalmente un patógeno de animales, pero puede
producir bronquitis, neumonía e infecciones de las vías respiratorias
externas en los seres humanos. Este medio fue desarrollado por Regan
y Lowe como un medio de transporte de muestras, utilizado
 posteriormente como un medio enriquecido para aislamiento selectivo de
B. pertussis y parapertussis. En este medio, el extracto de carne y la
peptona de gelatina proporcionan nutrientes. El almidón y el carbón
adsorben los ácidos grasos tóxicos, los radicales y peróxidos,
reemplazando la infusión de patata por el agar del Bordet-Gengou. La
Niacina es una vitamina que favorece el crecimiento. La sangre de caballo
proporciona factores de crecimiento complejos y reduce aún más el
efecto tóxico de los peróxidos. Se añade Cefalexina como agente
selectivo para suprimir parcialmente la flora normal de las vías
respiratorias

1.5. AGAR SACAROSA,SALES BILIARES, TIOSULFATO Y CITRATO

(TCBS)
EI agar TCBS está especialmente recomendado para el aislamiento
selectivo de vibrios que provocan afecciones coléricas, diarreas
disentéricas. El examen de alimentos sospechosos de portadores de los
mismos.
1.5.1. COMPONENTES
FORMULA EN g/L
Peptona de caseina 5.0

Peptona de carne 5.0

Extracto de levadura 5.0

Citrato sódico 10.0

Tiosulfato sódico 10.0

Bilis bovina 5.0

Colato sódico 3.0

Sacarosa 20.0

Cloruro sódico 10.0

Citrato Férrico 1.0

Azul de timol 0.04

Azul de bromotimol 0.04

Aga~agar 14

Suspender 88 g. de polvo en un litro de agua destilada y llevar a ebullición

y hervir durante un minuto. Enfriar a 45-50° C y verter en placas. NO
AUTOCLAVAR
1.5.2. FUNDAMENTO
EI agar TCBS actualmente esta aceptado de forma universal como el
mejor para el aislamiento diferencial de vibriones enteropatóqenos.
Consiguiendo una fuerte inhibición de toda la flora acompañante. Su
formulación permite un abundante crecimiento de Vibrio cholerae y V.
parahaemolyticus. También crecen en el V.alginoliticus y los vibrios NAG.
Las enterobacteriaceas quedan fuertemente reprimidas por las elevadas
concentraciones de citrato, tiosulfato, bilis y cloruro sódico, Aunque
puedan aparecer aIgunas colonias entéricas su tamaño y aspecto es
fácilmente discernible de los vibrios. Los únicos gérmenes que pueden
prestarse a confusión son algunos biotipos de Proteus y Pseudomonas.
Excepcionalmente pueden aparecer colonias muy pequeñas y amarillas
que corresponden a enterococos resistentes. En la tabla adjunta se
ofrece el aspecto colonial típico en este medio. Normalmente, de este
medio se seleccionan las colonias y se identifican con las pruebas
primarias (oxidasa, reacciones en Aqar de Kligler (Ref. 1-103), Voges-
Proskauer (Ref. 2-207) y antibiograma) antes de pasar a la
seroidentificación y fagotipado. Debido a su alta selectividad el medio
admite inóculos masivos del material patológico. EI medio solidificado y
frio queda turbio. Aunque esto no afecta luego a las lecturas. Este medio
es muy termolábil por lo que además de la esterilización al autoclave
deben evitarse los sobrecalentamientos y refundidos.

ASPECTO COLONIAL SOBRE AGAR TCBS A LAS 24 HORAS

A 37O C
ASPECTO COLONIAL MICROORGANISMO
Grandes, amarillas
Medianas, amarillas sucias con halo
amarillo en el medio
Pequeñas, amarillas sin halo y con
núcleo verdoso
Muy pequeñas y convexas,
amarillas con halo amarillo,
Pequeñas transparentes y Medianas
azules
Vibrio alginolyticus
Vibrio parahaemolyticus
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemo/yticus
Streptococus tecelis
Enterobacteriaceas
Pseudomonas, Aeromonas.
Proteus