ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD: CIENCIAS

ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA

CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

INFORME DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

PRÁCTICA No. 3.- ESTUDIO MICROBIOLÓGICO DE EXUDADO FARÍNGEO

1. DATOS GENERALES:

NOMBRES: CODIGOS:

Pamela Alexandra Mañay Bonilla 3102

Edison Anibal Molina Parra 3104
Vanessa Carolina Moreno Llamuca 3107
Michel Vanesa Remache Villa 3114
Ana Francisca Ricaurte Neira 3115

GRUPO No.: 2

DOCENTE: Karina Paredes Páliz PhD.

NIVEL: Cuarto Nivel PARALELO: “B”

LUGAR DE REALIZACIÓN: MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

/Junio/2018 22/Junio/2018

2. OBJETIVOS:

2.1. GENERAL

 Procesar muestras de las vías respiratorias altas, para reconocer los diferentes tipos
de bacterias colonizantes, residentes y posiblemente patógenas.
 2.2. ESPECÍFÍCOS

 Aprender la manera correcta de elaboración de medios de cultivo, tomas de muestras

adecuadas, preparación de siembras y frotis, coloraciones, etc.

 Conocer los principales miembros bacterianos residentes y patógenos más comunes

pertenecientes a las vías respiratorias superiores.

 Estudiar las bacterias del exudado faríngeo, y determinar al grupo que pertenecen
basándose en características específicas y la resistencia a algunos fármacos.

3. MARCO TEÓRICO:

3.1

4. METODOLOGÍA

4.1. PREPARACIÓN DE MEDIOS

Medio Sólido: AGAR SANGRE, AGAR MANITOL, AGAR MUELLER HINTON

Pesar la cantidad de medio Autoclavar el matraz de Sacar del autoclave la

de cultivo óptima y erlenmeyer con un tapón de preparación, esperar que
rehidratarlo con agua gasa sin cerrarlo totalmente adquiera la temperatura
destilada en un matraz de durante 30 minutos a una adecuada, aproximadamente
erlenmeyer. presión de 121 psi. unos 40ºC.

Distribuir el medio en las

placas de Petri estériles dentro
de una campana de flujo
laminar o en las proximidades Dejar que el medio
del mechero, flameando bien la solidifique.
boca del matraz de erlenmeyer
para evitar contaminaciones.

Para el AGAR SANGRE:

 Obtener de manera aséptica la
cantidad precisa de sangre en
Mezclar con cuidado el agar
un tubo completamente estéril
con la concentración exacta
(esto quiere decir la
de sangre evitando que se
concentración exacta de 5%
formen grumos.
para el volumen de agar
preparado).

Distribuir el medio en las

placas de Petri estériles dentro
Si preparó los medios de una campana de flujo
con anterioridad Dejar que el medio laminar o en las proximidades
guardarlos en una solidifique. del mechero, flameando bien
nevera a 4ºC. la boca del matraz de
erlenmeyer para
contaminaciones.

4.2. REALIZACIÓN DE LA SIEMBRA

Siembra en medio líquido:

Marcar el material con el nombre
del grupo.
Realizar la siembra, como sigue:
Obtener con un hisopo estéril la
muestra de exudado faringeo, misma
que se lleva al tubo con medio líquido
(agitándola en el seno del medio),
tomando las precauciones necesarias
para evitar salpicaduras.

Siembra en placa:
Sobre el agar de la placa de petri se
procede a realizar el estriamiento de
la muestra de secreción faríngea,
deslizando el asa suavemente por su
superficie en zig-zag, iniciando con
un inóculo primario como se muestra
en la figura.

4.3. INCUBACIÓN
 Incubar de los medios sembrados de 35 a 37ºC hasta que haya crecimiento bacteriano.

4.4. OBSERVACIÓN DE LOS RESULTADOS

En primer lugar, observar a simple vista diversas características como el color y

el borde de las colonias crecidas en el agar así como el olor y la turbidez del
medio ya que en algunos casos suelen ser típicos de un determinado tipo de
microorganismo y pueden servir de ayuda a la hora de su identificación.

4.5. TINCIÓN

Preparar el frotis de la muestra directa,

secar y fijar al calor.

Proceder a la coloración de Gram con las

condiciones e indicaciones expuestas y
aprendidas en la práctica anterior.

4.6. OBSERVACIÓN DE LAS TINCIONES

Las bacterias Gram-positivas presentarán

una coloración violeta mientras que las
Gram-negativas la presentarán roja o rosa.
La identificación de las bacterias Gram-
positivas puede ser problemática, solamente
cuando las bacterias Gram-positivas se
encuentran en crecimiento exponencial
(cultivos jóvenes) la reacción es clara; en
fase estacionaria (cultivos viejos).

4.7. REALIZACIÓN DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS

 Una vez conocida de manera teórica la flora habitual y
patógena de muestras faríngeas y observadas las
características generales de las colonias bacterianas
desarrolladas, proceder a realizar de acuerdo a sus
particularidades, las diferentes pruebas bioquímicas que
nos ayudarán en la identificación presuntiva de los
microorganismos.

4.8

Las pruebas bioquímicas a emplearse en la práctica

incluyen métodos que permitan dar indicios sobre qué tipo
de bacteria se ha desarrollado en nuestro cultivo, que
incluyen: Prueba de la catalasa, pruebas bioquímica de
identificación para gramnegativos (si existiera desarrollo
de este tipo de bacterias), fermentación y crecimiento en
agar manitol salado, etc.

REALIZACIÓN DEL ANTIBIOGRAMA

Una vez reconocida la o las bacterias, proceder a realizar el

respectivo antibiograma, incluyendo los discos de antibióticos
que se emplean en muestras de vías respiratorias altas.

Para la colocación de los discos de sensibilidad se usarán

pinzas estériles y la distancia entre disco y disco no deberá ser
menor a 1.5 cm.

Posteriormente se llevarán las placas a incubar por 24 horas.

Al día siguiente se medir con una regla los halos de inhibición

por la parte trasera de la placa y se realizará la respectiva
interpretación con ayuda de las tablas, donde se determina si
existe Sensibilidad (S), Resistencia (R), Intermedio (I) al
antibiótico.
 5. EQUIPOS Y MATERIALES:

Materiales y equipos Reactivos

 Mechero bunsen o similar.
 Asa de siembra.
 Placas de Petri con Agar sangre, agar manitol,
agar Mueller Hinton  Colorantes para tinción Gram.
 Tubos y placas de petri con cultivos bacterianos  Aceite de inmersión
de secreción faríngea.  Peróxido de Hidrógeno
 Portaobjetos. (catalasa).
 Cubetas de tinción o similar.  Discos de sensibilidad
 Hisopos estériles. antimicrobiana.
 Material de bioseguridad: mandil, guantes,
mascarilla, gorro.
 Microscopio.

6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN:

EXUDADO FARINGEO
Análisis cualitativo
mucosa faríngea Se observó los halos de la hemolisis en las placas de Agar
Sangre n° 1 y n° 2, y se observó en una gama hemolisis, es
decir no tenemos hemolisis en nuestra muestra

Agar manitol
Se observo en la placa de agar manitol Staphylococcus
aureus, por lo tanto en la placa de manitol se observó una
fermentación y una colonia completamente amarilla con un
halo agrandado

Resultado: Staphylococcus aureus

 TINCIÓN DE GRAM DE COLONIAS AISLADAS
Placa de agar sangre n°
2 Se observó en la tinción de la placa n° 2 de Agar sangre
cocos Gram positivos

EXUDADO FARINGEO
Agar Sangre
Empleando agua oxigenada a una colonia aislada se obtuvo
como resultado catalasa positivo, una prueba rápida que
determina la presencia de Staphylococcus en la muestra.

Resultado: POSITIVO

Agar manitol
Se observó una pequeña fermentación en el agar manitol
con una colonia bastante extendida y con un halo amarillo
bastante pronunciado, además corresponde a
Staphylococcus aureus.

Resultado: Staphylococcus aureus

ANTIBIOGRAMA:

EXUDADO NASOFARÍNGEO
Disco de antibiótico Diámetro en RESISTENTE INTERMEDIO SENSIBLE
centímetros
1. Kanamycin 2 X
2. Streptomycin 2 X
3. Novobiocin 3.6 X
4. Neomycin 1.8 X
5. Bacitracin 1.9 X
6. Amoxycilin 3.5 X
7. Opbochin 0.8 X
 Exudado Faríngeo

Staphylococcus

Catalasa El Staphylococcus aureus catalasa positivo es una bacteria Gram positiva redondeada. Este
microorganismo coloniza con frecuencia la piel y membranas mucosas sin causar infección.
No invade la piel sana, pero mínimas roturas de la barrera cutáneo-mucosa le permiten
penetrar en los tejidos y causar una gran variedad de infecciones y cuadros clínicos debidos
a la producción de toxinas. La catalasa es secretada en forma extracelular y reacciona con
una sustancia presente en el plasma denominada “factor de reacción con la catalasa (CRF)”
para formar un complejo que, a su vez, reacciona con el fibrinógeno para formar fibrina
(formación de coágulos). (Santos,2007)

7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:

7.1 CONCLUSIONES
 Se aprendió como preparar los medios de cultivo, para qué tipo de muestras se utiliza
cada uno de ellos, además se tomó muestras de la faringe, se logró una correcta
comprensión del tratamiento previo y posterior de los materiales con los que se toma
la muestra y la adecuada manera de tomarla; se preparó las siembras de la muestra en
los agares siguiendo los pasos y recomendaciones dados por el docente procurando
no cometer errores para que no afecte a los resultados finales del cultivo de bacterias.

 Se reconoció las diferentes bacterias que habitan en la faringe y se logró reconocer

las características específicas de estás al estar agrupadas en colonias en el agar, se
determinó a que grupo pertenecen y la patogenicidad de las mismas.

 Se aisló colonias de bacterias en agares estériles para obtener cultivos puros con el
fin de estudiarlos a profundidad y determinar a qué tipo de bacterias pertenecen, es
posible gracias a métodos empleados a grupos de bacterias con diferentes soluciones
o sustancias y la reacción que tienen a ellas; además se realizó un antibiograma para
conocer la resistencia que tienen a algunos fármacos empleados en el agar tales como:

7.2 RECOMENDACIONES

 Es recomendable preparar los materiales y agares días antes de la práctica y

mantenerlos en condiciones ideales para su conservación en la refrigeradora, todo
esto con el fin de desarrollar en el laboratorio una práctica rápida y eficiente.

 Se recomienda hacer los agares o trabajos de laboratorio siempre con algún docente
o persona encargada del laboratorio, para que supervise el trabajo realizado a fin de
evitar accidentes o incidentes de cualquier tipo dentro del laboratorio.

 Es recomendable tener todos los materiales necesarios antes de empezar a desarrollar

la práctica para realizarla sin complicaciones, de una manera correcta y sin
interrupciones.
  Se recomienda realizar la práctica con mecheros a centímetros de los agares, y con
materiales previamente esterilizados, caso contrario en los cultivos se pueden
presentar colonias de bacterias y hongos debido a la contaminación del material o por
no tener cuidado con los agares.

8. BIBLIOGRAFÍA:

1. Cantón, R. (2002). Lectura interpretada del antibiograma: Enferm Infecc Microbiol

Clin, 20, pp. 176-185

9. ANEXOS

Cuestionario de evaluación

 Señale las condiciones necesarias y los pasos secuenciales adecuados para la toma u
obtención correcta de una muestra de exudado faringeo (en no más de una página).

 Investigue cuáles son los microorganismos que crean una verdadera patología en las
vías respiratorias superiores e inferiores, enfocando su estudio en las características
bacterianas más representativas y en las enfermedades que producen (no más de
cuatro páginas).

 Mediante un diagrama de flujo, esquematice el protocolo de rutina que se debe

seguir para el estudio microbiológico de un exudado faríngeo.
 ANEXOS I

a. b. c.

NOTAS ESPOCH SÍNTESIS DE CLORURO DE T- AMILO

A.-Caja petri con agar sangre. FACULTAD DE CIENCIAS LÁMINA ESCALA FECHA
B.- Sellado de cajas petri para
ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIAS
ponerlo a incubar.
A. Observar las placas LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
previamente hechas con
1 1:1 22-06-2018
una técnica llamada
siembra de estrías por
agotamiento.
 ANEXOS II

d. e. f.

NOTAS ESPOCH SÍNTESIS DE CLORURO DE T- AMILO

d. Presencia de colonias FACULTAD DE CIENCIAS LÁMINA ESCALA FECHA

ailsadas en caja #01
Agar sangre. ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIAS
e. Colonias de bacterias
2 1:1 22-06-2018
ya desarolladas. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
f. Presencia de bacterias
en caja #02 Agar manitol
 g. h.

NOTAS ESPOCH SÍNTESIS DE CLORURO DE T- AMILO

g.- Medición de los halos FACULTAD DE CIENCIAS LÁMINA ESCALA FECHA

de inhibición.
h.- Vista microscópica ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIAS
presencia de bacterias
3 1:1 22-06-2018
Gram negativas. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA