FILIAL LA MERCED

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

E. F. P. EN ING

ENIERIA DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

COLORACIÒN DE LA CAPSULA, GLICOCALIX O

ENVOLTURA GLUCOIDE

CATEDRATICO:

Blgo: IBAÑEZ OJEDA, Julio

CATEDRA:

MICROBIOLOGIA GENERAL

ALUMNO:

MUÑOZ CISNEROS, Diana

SEMESTRE :

“V”

LA MERCED – CHANCHAMAYO

2018
COLORACION DE LA CAPSULA, GLICOCALIX O ENVOLTURA GLUCOIDE

I. INTRODUCCION:

Generalmente, la capsula se pone de manifiesto mediante una coloración negativa o una modificación
de ella debido a que no absorbe los colorantes normales de pared en bacterias.

Un procedimiento útil para el examen de muestras es el estudio microscópico de

preparaciones fijas - extensiones o frotis - preparados a partir de ellas y coloreadas por el
método adecuado. Esto permite eliminar el movimiento que presentan los microorganismos
en las preparaciones en fresco. La retención de colorantes de alquitrán de hulla por las
bacterias permite su fácil observación bajo el microscopio.

La forma más común de preparar un frotis es extender un poco de muestra sobre un

portaobjetos desengrasado, con el asa bacteriológica, pero también se puede hacer con un
hisopo ó presionando el portaobjetos sobre la muestra “impronta”.

Dependiendo del tipo de microorganismo o estructura del mismo que se desee observar es el
tipo de tinción que se emplea. P. ej. Tinción Simple, Diferencial de Gram, Negativa, para
cápsulas (Método de Anthony), para flagelos, los colorantes son productos químicos
sintéticos del tipo de las anilinas capaces de combinarse con una gran variedad de sustancias
impartiéndoles color. El color es impartido por su estructura química.

OBJETIVOS:
- Ejecutar, algunas de las tinciones especiales para capsula: método de Maneval,
Hiss, Anthony-Welch, nigrosina, Tinta China Pelikan Ro Wright, siguiendo los
protocolos establecidos, para luego observarlos al microscopio óptico a
inmersión.
- Reconocer, a través del microscopio óptico la estructura capsular (glicocalix)
presente en el género Klebsiella obtenido a partir de muestras biológicas.
II. MARCO TEORICO:
2.1. Capsulas y Glicocalix

Es una cubierta de grosor vartiable formada habitualmente por unidades de polisacáridos,

proteínas o ambos. Si está bien estructurada y se encuentra bien adherida a la célula, se le
denomina cápsula; si por el contrario, tiene estructura mal definida y su adhesión es débil,
se le conoce como glicocálix. De acuerdo a su estructura química, puede ser flexible o
rígida. La rigidez le confiere la característica de una matriz impermeable. Determina la
adhesión a superficies (biopelículas), constituye una barrera de protección contra la
fagocitosis y los anticuerpos e impide la desecación y la acción de otros agentes. Actúa
como barrera de difusión ante algunos antibióticos. Ejemplos de bacterias con cápsula
son Streptococcus pneumoniae y Haemophilus influenzae. Algunas bacterias poseen una
capa de material fuera de la pared celular. Cuando una capa está bien organizada y no se
elimina fácilmente, se denomina
2.2. Cápsula

Como se forman
En muchos casos, los organismos procarióticos secretan en su superficie materiales
viscosos y pegajosos. Estos materiales suelen ser polisacáridos, y en algunos casos
proteínas.
FUNCIONES

En laboratorio, muchas bacterias suelen perder la capacidad de formar cápsulas al cabo

de varios subcultivos. Así pues, la posesión o no de cápsula es algo que no afecta a la
viabilidad de las bacterias. Pero en medios naturales, las cápsulas confieren a las bacterias
una serie de propiedades, que dependen del nicho ecológico particular donde viva cada
bacteria. Estudiaremos una serie de propiedades o papeles generales, comunes a todas las
cápsulas, para concluir con algunos ejemplos de papeles específicos.
 2.3. Glicocalix

El glicocálix es una red de polisacáridos que se extiende desde la superficie de las

bacterias y otras células. Este a diferencia de la cápsula es flexible y no se une firmemente
a la superficie bacteriana
=====.

Cómo se forman
Al igual que las cápsulas cuando organismos procarióticos secretan en su superficie
materiales viscosos y pegajosos. Estos materiales suelen ser polisacáridos, y en algunos
casos proteínas.

Importancia
El glicocálix desempeña varias funciones en las bacterias. Las capas de polisacárido
externo son importantes en la adherencia o fijación de algunos microorganismos
patógenos a sus hospedadores.
El glicocálix ayuda a las bacterias a fijarse a objetos sólidos en medios acuáticos, o a
superficies tisulares en huéspedes vegetales y animales.
También pueden actuar como antígenos y estar implicadas en el reconocimiento
bacteriano, así como ayudar a la adherencia superficial y a la formación de biopelículas.

2.4. Tinción o coloración de bacterias

Los procedimientos que ponen de manifiesto diferencias entre las células bacterianas o
en partes una célula se conoce como técnica de coloración diferencial. Son algo más que
elaboradas que la técnica simple en la que las células se someten a una sola solución
colorante o reactivo colorante.

Las tinciones se combinan químicamente con el protoplasma bacteriano; si la célula no

ha muerto el proceso termina de hacerlo. El método, por consiguiente, es bastante drástico
y puede producir artificios.

Las tinciones más frecuente son sales. Las tinciones básicas consisten en un catión
coloreado unido a un anión incoloro, mientras las ácidas constituyen exactamente lo
contrario, unido a dos cationes. Las células bacterianas son abundantes en ácidos
nucleídos, los cuales portan cargas negativas en formas de fosfatos.
 2.5.Tinción acidorresistente
Las bacterias acidorresistentes son las que retiene la carbolficsina, aun cuando intente
descolorarlas con un mezcla de alcohol y ácido clorhídrico. Las bacterias
acidorresistentes se tiñen de color rojo; el resto adquiere el color del colorante de
contraste en este caso el verde o azul.

2.6.Tinción negativa
Este procedimiento consiste en la tinción de fondo con unos colorantes ácidos para
dejar las células incoloras en contraste. Comúnmente se utiliza el colorante negro
llamado nigrusína. El método sirve para observar bacterias o estructuras que
difícilmente se tiñen con las técnicas directas.

2.7.Tinción de los flagelos

Los flagelos son estructuras demasiado finas para poder ser visibles en el microscopio
de luz. Sin embargo si se tratan con una suspensión coloidal inestable de sales de
ácidos tánico para formar un precipitado denso en la pared celular y en los flagelos,
se pueden poner de manifiesto su presencia y disposición en las células. De esta
manera el diámetro aparenta que la estructura aumento de tamaño con fucsina básica
los hace visibles en el microscopio óptico.

2.8.Tinción de la cápsula
La cápsula se pone de manifiesto mediante una coloración negativa o una
modificación de esta. Uno de los métodos de ´´ tinción de la cápsula ´´ incluye el
tratamiento de las bacterias con un solución caliente de cristal violeta seguido por un
lavado con una solución de sulfato de cobre. El sulfato de cobre también imparte color
al fondo y esto resulta en que la célula y el fondo aparezcan teñido en color azul
oscuro mientras la cápsula aparece de color azul pálido.

2.9.Tinción del núcleo

1 Los núcleos se pueden teñir por la tinción de Feulgen la cual es específica para el
ADN.
 2.10. Tinción de las esporas
Las esporas se observan de la manera más simple como cuerpos refringentes
intracelulares en suspensiones de bacterias sin teñir, la parte de las esporas
relativamente impermeable, las esporas comúnmente se tiñen con verde de malaquita
y carbolfucsina o carbolfucsina

2.11. Tinción Gram.

Una característica taxonómica importante de las bacteria es su respuesta a la tinción
a de Gram esta característica parece ser fundamental, reacción a la tinción se
correlaciona a con muchas otras propiedades morfológicas en maneras relacionadas
filogenéticamente. Microorganismo potencialmente gram positivo puede verse como
tal cuando concurre un conjunto de particular de condiciones ambientales en un
cultivo joven. El procedimiento para tinción de Gram se inicia con la aplicación de
un colorante básico el cristal de violeta. Luego se aplica una solución de yodo en este
momento todas las bacterias de tiñen de azul.
Continuación las células se tratan con alcohol las células grampósitiva contienen el
cristal violeta−yodo y permanecen de color azul; en cambio las gramnegativa se
descoloran completamente por el alcohol. Por último se aplican un colorante de
contraste safranina, que es un colorante rojo. De esta manera, las células
III. MATERIALES Y METODOS
A. MATERIALES:
- Muestra: heces
- Mechero
- Laminas porta objeto y cubreobjetos
- Cubeta de Tinción
- Agua destilada
- Colorante: azul de metileno de Loeffler o safranina
- Microscopio óptico
B. PROCEDIMIENTO:
1. Método de Nigrosina o Tinción Negativa
Técnica:
a. Mezclar una gota de suspensión del germen capsulado en una gota de
nigrosina al 10% sobre una lámina portaobjeto durante un minuto.
b. Hacer una extensión empleando otra lamina.
c. Secar y fijar al calor de una llama de mechero.
d. Contra colorear con azul de metileno de Loeffler o safranina.
e. Lavar con agua destilada.
f. Sacar al calor de una llama de mechero.
g. Observar al microscopio óptico con objetivo de inmersión.

IV. RESULTADOS Y DISCUSION:

 La capsula aparece transparente bajo un fondo bacterias y el cuerpo
bacteriano aparece de color azul rojizo.
- salmonella
- Parte periférica
V. CONCLUSIONES:

- Se ejecutó algunas de las tinciones especiales para capsula: método de Nigrosina

o tinción negativa, siguiendo los protocolos establecidos, para luego observarlos
al microscopio óptico a inmersión.
- Se reconoció, a través del microscopio óptico la estructura capsular (glicocalix)
presente en el género Klebsiella obtenido a partir de muestras biológicas.

VI. BIBLIOGRAFIA:
 http://www.telmeds.org/wp-content/uploads/2016/11/Tinciones-en-
Microbiolog%C3%ADa.pdf
 http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-
content/uploads/2017/02/03-COLORACIONES.pdf
VII. CUESTIONARIO:
1. ¿Qué bacterias son formadoras de capsula?
- Bacilos
- Estreptococos
- Fagocitosis
- Estafilococo Aureus
- Haemophilus Influenzae
2. ¿Por qué la presencia de capsula en una bacteria aumenta su virulencia?
Por qué los factores de virulencia los permite cumplir con cada una de sus etapas
los que pueda de estructuras o productos celulares.
3. Como se origina la síntesis de la capsula bacteriana?
El glucocalix es un polímero de poli péptidos o de ambos su complejidad química
varia ampliamente entre distintos especies bacterianas, el material glucocalix es
viscoso y en su mayoría se forma en el interior de la célula.
4. Los micoplasmas (PPLO) son formadoras de capsulas?. Si es así que tipo de
polímeros forma?
Los micoplasmas (PPLO) son un grupo de bacterias que carecen de pared celular,
pueden tener vida libre en el suelo y aguas.
5. En el método de Anthony-Welch ¿Qué función cumple el sulfato de cobre?
Este método permite a la tinción de la capsula de la bacteria, se utiliza como tinte
primario cristal violeta al 1% o azul de metileno y este lleva la función de teñir
todo, tinción de capsula por frotis color oscuro con reactivos.
6. ¿Qué asociación tienen las lectinas con las capsulas bacterianas?
Las lactinas son proteínas que se unen azucares con elevada especialmente para
cada tipo distinto, no se deben confundir con los glicoproteínas.
7. Dentro de la propiedad de adherencia que tiene las bacterias capsuladas,
indique Ud. algunos efectos benéficos que aquellas pueden brindar a los
organismos superiores. Fundamente.

El derivado de bacillos lactoresporus, es un probiotico muy potente que está en

capsula en una espora esta concentración permite que el prebiótico sobreviva en
los ácidos.
VIII. ANEXOS:

 Pasos para la tinción negativa

 Capsula de las bacterias.