CROMATOGRAFIA EN COLUMNA.

SEPARACION DE UNA MEZCLA AZUL

VICTORIA / NARANJA DE METILO
PROCEDIMIENTO:
1. Introducir en la columna un copito de algodón, luego X g de alúmina, la
cantidad depende del tamaño de la columna. Se coloca una capa fina de arena
y/o algodón. Golpear suavemente la columna para que la fase estacionaria se
acomode, sin dejar espacios vacíos.
2. Se ajusta la altura para que debajo se pueda alinear una serie de 4 tubos de
ensayo colocados en la gradilla. Estos servirán para recoger las fracciones. Se
rotulan #1, #2, #3 y #4. Añadir, con un gotero, suficiente etanol para que se
humedezca toda la columna. Golpear otra vez para lograr que se eliminen
burbujas de aire y quede bien compacta la fase estacionaria. Se permite que
empiece un goteo moderado de solvente y se recoge éste en el tubo de ensayo
#1. Durante este proceso, se sigue añadiendo solvente para que la columna
no se seque.
3.Cuando el solvente se encuentre 1,5-2 cm por encima de la fase
estacionaria, se añaden 3 gotas de la mezcla de tintes, se adiciona etanol
poco a poco hasta que la mezcla se introduzca en la fase estacionaria, luego
se agrega etanol hasta casi llenar la columna de vidrio, se recoge la primera
fracción en el tubo #2 hasta que el solvente sea incoloro.
4.Se cambia al tubo de ensayo #3 y el solvente a agua sin dejar secar
la columna. Se añade suficiente agua para obtener una fracción de color
claro hasta que nuevamente empiece a recoger gotas incoloras. Se cambia
ahora al tubo #4 y se recoge la fracción del último tinte.
5. Medir el volumen de cada fracción y anotar su color.
6. Realizar el mismo procedimiento cambiando la fase móvil por 1:1, 2:1, 1:2
mezcla agua-etanol.