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m Great Britain.
Toxkoa. VoL 18, pp. 603-010.
® Peraamoa Peen Ltd 1990. Printed
INTRODUCCION
603
604 J. M. GUTIÉRREZ, OLGA ARROYO y R. HOLAfYOS
MATERIAL Y METODOS
Se utilizd veneno de B. asper de la zona Atléatica de Costa Rica, obtenido en nuestro labostorio, liofilizedo y
conservado a -70°C (loteBAA 1-79). Es una rr~zclade veneno de unagran cantidad de ejemplares prooedentes de
dicha regidn .
Ralones bhmcos Wobster, entre 18 y 20 gde peso,fueron inoculados intramuscularmente en el muslo wn SO pg de
veneno disuelto en 0~1 ml de solucidn selina amortiguados a pH 7~2. Previo a su inoculacidn, la solucidn se
eateriGzd por filtraâdn en membrane de 0~22Ean de poro.
Pas el anéliaia histoldgico ae tonuuron muestss de ooszdn, cerebro y miSsculo esquelético del muslo a los
siguieales intervalos : 1, 3, 6, 9,12 y 24 hr y 1 eemana . Todos los eatudios histoldgicos ae hicieron por triplicado. Las
mueatras se 6jaron en formalisa al 10'/ a t~pestus ambiente y fueron tstadas tn forma conventional pas su
posterior ooloracidn cos hematoxilina eusins. Se efectuaron experimentos costrol inoculando 0~1 ml de solucidn
ealina en idénticaa oondicionea
La CFQ ac determind en stones alosque se inoculd veseno en lasmismas condicionas deecritaspas losestudios
histoldgicos ;a los mismos intervalas de tiempo se obtuvo de la cola de cada stdn un capilar de sangre . La CFQ ac
carantiticd colorimétricamente mediante la medicidn de la craatina formada en la reaocidn ADP/fosfocreatisa
(Si~a Tecbnical Bulletin No. 520). Los tontrolea fueron inoculados con 0~1 ml da solucidn salina . EI m5mero de
animales pas cada experimento varidentre8 y 13 y pas loscontroles ac emplearon 3. La relacidn dosis-reapuesta
se obtuvo inoailando, en grupos de 10 stones, les siguientes cantidadea de veneno : 10, 20, 30, 40 y SO Pg
intramuscularmente. Tres horss despub se sasgcaron de la cola y se cuantificd los nivales de CFQ.
H edema se cuentißod de awerdo al método y Yesux~w~ et al. (1976} Cuarcata y dnto stones fueron inoculados
eo k pata trasera deracba oon 60 Ng (ea 30 pl) de venmo y oon 30 pl de sohrcion salina en la pata izquiada.Grupos de
S ratones fseron saa~iScados, sus pataa cortadas a la ahus da la articulacids y pesades ea balanrs analitica a los
siguieatas intervalos de tiempo :1,3, 6, 9y 12 hr y 1, 3, Sy 7dias. El edemase expresd camo el aummto ea pornentaje
de peso de la pata derecha en relaacüdn con la izquierde.
FICi.1 . EPBCaO MIONECAOIICO DE SO /!g DE VENENO DE B. C13j1Cr G hr DESPUÉS DE LA INOCULACIbN .
Se observan fibres de aspocto miolitico y ooagulativo, predominando las primeras . TinciSn de
Hematoxilina-Eosina
RESULTADOS
Aruilisis histol6gico
Una hora después de la inoculacien se observe una mionecrosis leve sunque evidente,
predominando las fibres de aspecto miolitico ; hubo poca hemorragia y un escaso exudado
inflamatorio. La necrosis se hizo més evidente a las 3 hr, llegando a ser intensa a las 6, 9,12 y
24 hr ; en dichos cortes histolegicos se observaron fibres necreticas de aspecto miol{tiw y
coagulativo, predominando las pimeras (Fig. 1). El cuadro hemorr$gico aumente a las 3 y
6 hr y llege a su mâximo nivel a las 9,12 y 24 hr (Fig. 2). A partir de las 6 hr se aprecie una gran
infiltracien leucocitaria, la cual se mantuvo hasta las 24 hr, constituida casi exclusivamente
por polimorfonucleares neutrefilos (Fig. 3). Una semana después de la inoculacien se
observe un cuadro con gran cantidad de fibroblastos, rectos de fibres necreticas, fibres en
regeneracien y un exudado de tipo mononuclear ; no se apreciaron ~reas hemorrâgicas (Fig.
4). En el cuadro No. 1 se resumen las observaciones histolegices m~s importantes del
müsculo esquelético.
En anâlisis del miocardio deje ver a las 6, 9,12 y 24 hr pequeiïas y escasas zonas de necrosis,
asi como algunos pequeiïos focos hemorrâgicos ; ambos fenemenos desaparecieron una
semana después de la inoculacien. En el examen histolegico del cerebro no se observaron
alteraciones en ninguna oportunidad. Los controles de los tres tejidos estudiados mostraron
una estructura histolegica normal, tipica de los mismos.
Pese a que et efecto local provocado por et veneno de serpientes en un fenemeno muy
complejo, en él participan une Serie de eventos cuya patogenia posee cierta sutonomia. Lo
anterior ha lido claramente demostrado en los venenos de dos especies de cascabel
..
S
dw
1r
U
TIFMPO (AOilAS)
10 20 30 40 50
VSNSNO (pg)
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901A9 DIA6
TIEMTO
FiO. i . I .URVA QUE MUESTRA EL DESARROLLO DEL EDEMA A CONSECUENCIA DE INOCULACIONES DE 60 /eg
DE VENENO DE B . OJpel EN LA PATA TRASERA .
Bl trazo repICdeRYB l03 PrOmOd10&
La determinacibn de los niveles de CFQ parece ser un valioso instrumento para evaluar la
magnitud de la mionecrosis producto del envenenamiento, pues por su sensibilidad permite
demostrar las primeras alteraciones que estân sufriendo las fibres musculares . Existen altes
concentraciones de CFQ en otros drganos como corazt5n y cerebro, por lo que niveles séricos
elevados podrian serconsecuencia de destruccit5n celular en dichos ôrganos. Sin embargo, en
el modelo experimental utilizado en este estudio, las muestras de cerebro y corazdn no
mostraron alteraciones significatives, y si bien el corazôn mostrt5 algunos focos de tejido
afectado, la necrosis del mnsculo esquelético fue mucho miis severa, por lo que resulta
evidente que la elevacibn de los niveles de CFQ se debiG fundamentalmente a la
necrosis de las fibres del mtisculo esquelético. La determinacitin de CFQ podria ser utilizada
en la pr>~ctica hospitalaria con el objeto de evaluar la magnitud del daiïo tisular,
contribuyendo de esta manera en el diseiïo de un adecuado tratamiento.
Agradecimieruos-Queremos dejar patente nuestro agradecimiento al Dr . FERNANDO CRAVES por su vaiosa ayuda
en el laboratorio y por sus sugerencias a lo largo de esta investigacibn ; ala Dra. ELSA PORTILLA por la elaboracidn
de IOS COttC3 hi6tOIÔgiC08 ; 8IOS COmpat'IerOS ALVARO FLORES, ABEL ROBLES y ALFREDO VARGAS pOi SU C01abOfa~ti~Ôn
en el trabaj0 de labOrStOr10 y a la SeflOia HILDA HERRERA dC SOLERA pOr el t[abaj0 meCanOg[$fiCO. L3ta
investigaci8n fue finaatiada por Ia Univetsidad de Costa Rica y por el Consejo National de Investigaciones
Cientificas y Tecnol6gicas (CONICIT) de Costa Rica .
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