BIOQUÍMICA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE MEDICINA
INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO
UNIDAD N°: 1
NOMBRE DE LA UNIDAD: Biomoléculas
NÚMERO DE HORAS POR UNIDAD: 21 Horas
RESULTADOS DE APRENDIZAJE DE LA UNIDAD:
Reconoce e identifica la importancia de las biomoléculas
Relaciona las alteraciones metabólicas con el origen de enfermedades
Periodo Académico: abril – agosto de 2018

Carrera: Medicina
Asignatura: Bioquímica Practica II
Curso: Segundo
Paralelo: “A”
Practica de laboratorio N: 1
Tema: Identificacion cualitativa y cuantitativa de
Biomoleculas
Horario: 7H00 A 10H00
Fecha de realización: 25 de abril de 2018
Fecha de entrega del informe de la 16 de mayo de 2018
practica:
Docente: Dra. María Angélica Barba Maggi, Msc.
Estudiantes
Apellidos y Nombres Cédula Firma
González Lozano Cinthia Mishell 1450124758
Males Caiza Cinthya Jhoana 1005102429
Mantilla Cadena Ricardo David 1724916323
Ochoa Barriga Alejandra Raquel 1726283722
Ordoñez Gallardo Paula Nicole 1600841355
Observaciones
Calificación
1
- -
1. TEMA
Identificación Cualitativa y Cuantificación de Biomoléculas
2. OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GENERAL:
Aplicar reacciones químicas para la identificación Cualitativa y Cuantificación de
Biomoléculas y establecer la importancia biomédica.
2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
2.2.1 Identificar la presencia de Biomoléculas en muestras de alimentos y de líquidos biológicos,
mediante reacciones químicas cualitativas, en base a la presencia de grupos funcionales
característicos y su afinidad por reactivos químicos específicos.
2.2.2 Establecer niveles de solubilidad de las biomoléculas en condiciones de temperatura
ambiental o de variante de temperatura.
2.2.3 Establecer la importancia biomédica de la cuantificación de la Bilirrubina en una muestra de
sangre y describir la importancia biomédica.
3. MATERIALES / REACTIVOS /SOLUCIONES
MATERIALES QUE SE RETIRAN EN EL LABORATORIO
• 22 tubos de ensayo grandes
• 5 tubos de ensayo pequeños
• 2 gradillas
• 4 pipetas graduadas de 5 ml
• 1 pipeta semiautomática de 10 - 100 ul
• 1 pipeta graduada de 100 - 1000 ul
• 2 vasos de precipitación de 250 ml
• 1 probeta
2
• 1 reverbero
• 1 malla metálica
• 1 pinza para tubo de ensayo
• 20 puntas azules
• 2 puntas amarillas
• 1 Cronómetro
• 1 vórtex
• 1 balanza
• 1 pera de succión
REACTIVOS QUE SE RETIRAN EN EL LABORATORIO
• Reactivo de Benedict
• Reactivo de Biuret
• Lugol
• Butanol
• Reactivo para cuantificar bilirrubina
MATERIAL Y MUESTRA A TRAER EN EL GRUPO QUE NO SE RETIRA EN
LABORATORIO
• Suero (recolectar en el laboratorio la muestra de sangre y obtener el suero/Tubo de tapa
roja)
• Orina (traer 1 muestra de orina en un recipiente estéril)
• Pequeñas proporción patata, maicena, leche, pera, uvas, leche, aceite; huevos (para
obtener albúmina).
GRUPALES:
• 2 Franelas de 40 cm cada una
• 1 frasco de cloro
• 1 frasco de agua destilada de 500 ml
3
• 1 frasco estéril (para torundas de algodón, pueden ser recipientes plásticos de boca
ancha)
• Torundas de algodón
• 1 frasco de alcohol
• 10 gasas estériles
• 1 frasco de jabón líquido
• 1 dermográfico (o marcador de material de vidrio)
• 2 cepillos para lavar tubos de ensayo (pequeños de 5 ml y grandes de 10 ml)
• 1 par de guantes de uso doméstico
• 1 frasco con detergente (para lavado de materiales)
• 1 recipiente de plástico para cortopunzantes con etiqueta de desechos cortopunzantes y
que indique el curso, paralelo y grupo (recipiente vacío de los desinfectantes que utilice
en casa con tapa, grande de plástico grueso)
• 4 recipientes de plástico de 100 ml de capacidad con tapas
• 50 puntas azules
• 50 puntas amarillas
• Tiras multipeg
• 1 lavacara pequeña
• 1 paquetes de toallas desechables INDIVIDUALES:
• 2 tubos al vacío de tapa roja (sin anticoagulante)
• 2 tubos al vacío con anticoagulante (tapa lila o celeste)
• 4 Jeringuillas descartables de 2 de 10 ml y 2 de 5 ml
• 2 Agujas vacuntainer tapa verde
• 2 Lancetas
• 2 venditas o curitas
• 1 Torniquete
• 1 Cápsula
4
• 1 mascarilla
• 1 par de guantes de manejo de látex
• 1 cobertor de cabello (gorra para laboratorio)
• 1 mascarilla
• 1 par de gafas para laboratorio
• 1 Mandil con el nombre del estudiante y sello de la universidad - Carrera de Medicina
• 1 toalla de mano para uso personal
4. GRÁFICO
DETERMINACION DE AZÚCARES POLISACÁRIDOS
3. Se añadió respectivamente
1. Se rotuló debidamente
2. Se añadió el ml de los gramos o ml de patata,
los tubos de ensayo
agua a cada tubo, maicena, orina, suero,
incluyendo el tubo leche.
blanco.
4. Se procedió a añadir 5. Se agitó en el vórtex 6. Se procedió a observar y

las gotas de Lugol durante 5s anotar los resultados.
excepto en el tubo
blanco.
DETERMINACIÓN DE MONOSACARIDOS AZÚCARES
5
1. Se rotularon los tubos 3. Añadimos respectivamente
2. Se añadió el ml de
de ensayo las muestras adecuadas
agua en todos los tubos como pera, uvas, leche,
respectivamente.
orina y suero.
4. Se añadieron los 0.5ml 5. Agitamos los tubos en 6. Observamos el color,

del reactivo de el vórtex durante 5 registramos e interpretamos
Benedict en todos los segundos. resultados.
tubos de ensayo.
PREPARACION DE LA ALBÚMINA
1. Rotulamos los tubos de 3. Se añadie la leche, la orina

2. Añadimos en cada
ensayo y el suero en los tubos que
tubo el soluto lo necesitaban.
correspondiente.
6
4. Se añadio 0.5 ml de 5. Se agitó en el vórtex
Reactivo de Biuret a durante 5 segundos 6. Despues de llevar a
todos los tubos ebullicion, analizamos los
resultados y tomamos nota .
DETERMINACION DE LÍPIDOS
1. En los tubos ya 3. Se observo los resultados y

2. Se agrego los 2ml de
men¡mbretados se los anotamos.
añadieron todos los butanol y se agito en
solutos el vórtex durante 5
correspondientes segundos
CUANTIFICACIÓN DE BILIRRUBINAS
1. Se rotularon los tubos

2. Se añadieron todas los 3. Se llevo a los tubos a
de ensayo
solutos y solventes incubacion a temperatura
corectamente
para la cuantificacion. ambiente, y posterior a eso
cuantificamos.
7
5. Al finalizar la práctica 6. Por ultimo se entrego todos
4. Retiramos los tubos e los materiales en perfecto
interpretamos procedimos a lavar los
tuvos de ensayo. estado
resultados.
5. FUNDAMENTO TEÓRICO O CONTENIDO CIENTÍFICO
CARBOHIDRATOS
Son las principales moléculas que almacenan energía en la mayoría de los seres vivos y también
son constituyentes estructurales de las paredes celulares. Por otro lado, ellos son importantes en
procesos de reconocimiento celular, incluyendo la adhesión de células vecinas y el transporte de
proteínas a su destino intracelular final (modificaciones de la cadena glucosídica en su paso por
el Aparato de Golgi). Químicamente, los carbohidratos están compuestos por C, H y O. La
fórmula básica de estas moléculas es (CH2O)n de la cual deriva su nombre: C, carbo; H2O,
hidrato. Se clasifican según el número de monómeros: monosacáridos, disacáridos y
polisacáridos.
El término hidrato de carbono o carbohidrato es poco apropiado, ya que estas moléculas no son
átomos de carbono hidratados, es decir, enlazados a moléculas de agua, sino que constan de
átomos de carbono unidos a otros grupos funcionales químicos. Este nombre proviene de
la nomenclatura química del siglo XIX, ya que las primeras sustancias aisladas respondían a la
fórmula elemental Cn(H2O)n (donde "n" es un entero=1,2,3... según el número de átomos). De
aquí el término "carbono-hidratado" se haya mantenido, si bien posteriormente se vio que otras
moléculas con las mismas características químicas no se corresponden con esta fórmula.
8
Los glúcidos pueden sufrir reacciones de esterificación, aminación, reducción, oxidación, lo cual
otorga a cada una de las estructuras una propiedad específica, como puede ser de solubilidad. (1)
Entre los generales se encuentran:
 MONOSACARIDOS: Son los glúcidos más elementales, constituidos por una sola molécula.
La fórmula química general de un monosacárido no modificado es (CH2O) n, donde n es
cualquier número igual o mayor a tres. Los monosacáridos poseen siempre un grupo carbonilo
en uno de sus átomos de carbono y grupos hidroxilo en el resto, por lo que pueden considerarse
polialcoholes.
Los monosacáridos se clasifican de acuerdo a tres características diferentes: la posición del
grupo carbonilo, el número de átomos de carbono que contiene y su quiralidad. Si el grupo
carbonilo es un aldehído, el monosacárido es una aldosa; si el grupo carbonilo es una cetona, el
monosacárido es una cetosa. Los monosacáridos más pequeños son los que poseen tres átomos
de carbono, y son llamados triosas; aquéllos con cuatro son llamados tetrosas, lo que poseen
cinco son llamados pentosas, seis son llamados hexosas y así sucesivamente. Los sistemas de
clasificación son frecuentemente combinados; por ejemplo, la glucosa es una aldohexosa (un
aldehído de seis átomos de carbono), la ribosa es una aldopentosa (un aldehído de cinco átomos
de carbono) y la fructosa es una cetohexosa (una cetona de seis átomos de carbono).
 DISACARIDOS: Es la combinación de 2 azúcares simples o monosacáridos. Los dos
monosacáridos se unen mediante un enlace covalente conocido como enlace glucosídico, tras
una reacción de deshidratación que implica la pérdida de un átomo de hidrógeno de un
monosacárido y un grupo hidroxilo del otro monosacárido, con la consecuente formación de
una molécula de H2O, de manera que la fórmula de los disacáridos no modificados es
C12H22O11. La sacarosa es el disacárido más abundante y la principal forma en la cual los
glúcidos son transportados en las plantas. Está compuesto de una molécula de glucosa y una
molécula de fructosa
 OLIGOSACARIDOS: Cadena corta de azúcares. Contienen hasta 10 moléculas de
monosacáridos. No obstante, la definición de cuan largo debe ser un glúcido para ser
9
considerado oligo o polisacárido varía según los autores. Según el número de monosacáridos
de la cadena se tienen los trisacáridos (como la rafinosa), tetrasacárido (estaquiosa),
pentasacáridos, etc.
Los oligosacáridos se encuentran con frecuencia unidos a proteínas, formando las
glicoproteínas, como una forma común de modificación tras la síntesis proteica. Estas
modificaciones post traduccionales incluyen los oligosacáridos de Lewis, responsables por las
incompatibilidades de los grupos sanguíneos, el epítope alfa-Gal responsable del rechazo
hiperagudo en xenotrasplante y O-GlcNAc modificaciones.
 POLISACARIDOS: Cadena compleja de azúcares. Contienen más de 10 moléculas de
monosacáridos y hasta miles. representan una clase importante de polímeros biológicos. Su
función en los organismos vivos está relacionada usualmente con estructura o almacenamiento.
El almidón es usado como una forma de almacenar monosacáridos en las plantas, siendo
encontrado en la forma de amilosa y la amilopectina (ramificada). En animales, se usa el
glucógeno en vez de almidón el cual es estructuralmente similar pero más densamente
ramificado. Las propiedades del glucógeno le permiten ser metabolizado más rápidamente, lo
cual se ajusta a la vida activa de los animales con locomoción.
(2)
Azúcares: este término sólo puede usarse para los monosacáridos (aldosas y cetosas) y los
oligosacáridos inferiores (disacáridos). En singular (azúcar) se utiliza para referirse a la
sacarosa o azúcar de mesa. (3)
Metabolismo de los carbohidratos:
Los glúcidos representan las principales moléculas almacenadas como reserva en los vegetales.
Los vegetales almacenan grandes cantidades de almidón producido a partir de la glucosa
elaborada por fotosíntesis, y en mucha menor proporción, lípidos (aceites vegetales).
En el tubo digestivo los polisacáridos de la dieta (básicamente almidón) son hidrolizados por las
glucosidasas de los jugos digestivos, rindiendo monosacáridos, que son los productos digestivos
finales; éstos son absorbidos por las células del epitelio intestinal e ingresan en el hígado a través
10
de la circulación portal, donde, alrededor del 60%, son metabolizados. En el hígado, la glucosa
también se puede transformar en lípidos que se transportan posteriormente al tejido adiposo.
Por lo tanto, las principales rutas metabólicas de los glúcidos son:
 Glicólisis. Oxidación de la glucosa a piruvato.
 Gluconeogénesis. Síntesis de glucosa a partir de precursores no glucídicos.
 Glucogénesis. Síntesis de glucógeno.
 Ciclo de las pentosas. Síntesis de pentosas para los nucleótidos.
En el metabolismo oxidativo encontramos rutas comunes con los lípidos como son el ciclo de
Krebs y la cadena respiratoria. Los oligo y polisacáridos son degradados inicialmente a
monosacáridos por enzimas llamadas glicósido hidrolasas. Entonces los monosacáridos pueden
entrar en las rutas catabólicas de los monosacáridos.
La principal hormona que controla el metabolismo de los hidratos de carbono es la insulina.
(4)
PROTEINAS
Las proteínas son las moléculas orgánicas más abundantes en las células; constituyen más del
50 % de su peso seco.
Cada proteína tiene funciones diferentes dentro de la célula. Además, la mayor parte dela
información genética transmitida por las proteínas.
Las proteínas son verdaderas macromoléculas que alcanzan dimensiones de las micelas en el
estado coloidal. La estructura de tamaño micelar con cargas eléctricas en su superficie les
confiere propiedades de absorción.
Las macromoléculas proteínicas en ocasiones están compuestas por una sola cadena
polipeptídica; en tal caso reciben el nombre de monoméricas. Cuando la proteína está formada
por varias cadenas polipeptídicas que pueden o no ser idénticas entre sí, reciben el nombre de
oligoméricas.
11
Las proteínas son macromoléculas por lo cual poseen pesos moleculares elevados. Todas
producen por hidrolisis µ -aminoácidos.
Existen 20 µ -aminoácidos, como sillares para la formación de proteínas, enlazados por uniones
cabeza-cola, llamadas: Enlace Polipeptídico. (5)
Composición de las proteínas
Todas las proteínas contienen:
 Carbono
 Hidrógeno
 Nitrógeno
 Oxígeno
Y otros elementos tales como:
 Azufre
 Hierro
 Fósforo
 Cinc
(6)
Clasificación de las proteínas
Las proteínas pueden clasificarse, basándose en su:
 Composición
 Conformación
Según su composición, las proteínas se clasifican en:
 Proteínas Simples : Son aquellas que por hidrolisis, producen solamente µ -aminoácidos.
 Proteínas Conjugadas : Son aquellas que por hidrolisis, producen µ -amino-ácidos y además
una serie de compuestos orgánicos e inorgánicos llamados : Grupo Prostético.
Las proteínas conjugadas pueden clasificarse de acuerdo a su grupo prostético:
12
Nucleoproteínas (Ac. Nucleíco)
Metaloproteínas (Metal)
Fosfoproteínas (Fosfato)
Glucoproteínas (Glucosa)
Según su conformación, las proteínas pueden clasificarse en:
 Proteínas Fibrosas: Son aquellas que se hayan constituidas por cadenas polipeptídicas,
ordenadas de modo paralelo a lo largo de un eje formando estructuras compactas (fibras o
láminas). Son materiales físicamente resistentes e insolubles en agua y soluciones salinas
diluídas. Ej.: (colágeno, µ -queratina, elastina).
 Proteínas Globulares: Están constituídas por cadenas polipeptídicas plegadas estrechamente, de
modo que adoptan formas esféricas o globulares compactas. Son solubles en sistemas acuosos,
su función dentro de la célula es móvil y dinámica. Ej : (enzimas, anticuerpos, hormonas)
(7)
Existen proteínas que se encuentra entre las fibrosas por sus largas estructuras y las globulares
por su solubilidad en las soluciones salinas. Ej: (miosina,fibrinógeno). (8)
LIPIDOS
Los lípidos son un conjunto de moléculas orgánicas (la mayoría biomoléculas), que están
constituidas principalmente por carbono e hidrógeno y en menor medida por oxígeno. También
pueden contener fósforo, azufre y nitrógeno.
Debido a su estructura, son moléculas hidrófobas (insolubles en agua), pero son solubles en
disolventes orgánicos no polares como la bencina, el benceno y el cloroformo lo que permite su
extracción mediante este tipo de disolventes. A los lípidos se les llama incorrectamente grasas,
ya que las grasas son solo un tipo de lípidos procedentes de animales y son los más ampliamente
distribuidos en la naturaleza. (9)
Los lípidos cumplen funciones diversas en los organismos vivientes, entre ellas la de reserva
energética (como los triglicéridos), estructural (como los fosfolípidos de las bicapas) y
reguladora (como las hormonas esteroides).

13
Características
Los lípidos son moléculas muy diversas; unos están formados por cadenas alifáticas saturadas o
insaturadas, en general lineales, pero algunos tienen anillos (aromáticos). Algunos son flexibles,
mientras que otros son rígidos o semiflexibles hasta alcanzar casi una total Flexibilidad mecánica
molecular; algunos comparten carbonos libres y otros forman puentes de hidrógeno.
La mayoría de los lípidos tienen algún tipo de carácter no polar, es decir, poseen una gran parte
apolar o hidrofóbico ("que le teme al agua" o "rechaza el agua"), lo que significa que no interactúa
bien con solventes polares como el agua, pero sí con la gasolina, el éter o el cloroformo. Otra
parte de su estructura es polar o hidrofílica ("que tiene afinidad por el agua") y tenderá a asociarse
con solventes polares como el agua; cuando una molécula tiene una región hidrófoba y otra
hidrófila se dice que tiene carácter de anfipático. La región hidrófoba de los lípidos es la que
presenta solo átomos de carbono unidos a átomos de hidrógeno, como la larga "cola" alifática de
los ácidos grasos o los anillos de esterano del colesterol; la región hidrófila es la que posee grupos
polares o con cargas eléctricas, como el hidroxilo (–OH) del colesterol, el carboxilo (–COOH–)
de los ácidos grasos, el fosfato (–PO4–) de los fosfolípidos. (10)
Los lípidos son hidrofóbicos, esto se debe a que el agua está compuesta por un átomo de oxígeno
y dos de hidrógeno a su alrededor, unidos entre sí por un enlace de hidrógeno. El núcleo de
oxígeno es más grande que el del hidrógeno, presentando mayor electronegatividad. Como los
electrones tienen mayor carga negativa, la transacción de un átomo de oxígeno tiene una carga
suficiente como para atraer a los de hidrógeno con carga opuesta, uniéndose así el hidrógeno y
el agua en una estructura molecular polar.
Por otra parte, los lípidos son largas cadenas de hidrocarburos y pueden tomar ambas formas:
cadenas alifáticas saturadas (un enlace simple entre diferentes enlaces de carbono) o insaturadas
(unidos por enlaces dobles o triples). Esta estructura molecular es no polar. (11)
Clasificación
14
Los lípidos son un grupo muy heterogéneo que usualmente se subdivide en dos, atendiendo a que
posean en su composición ácidos grasos (lípidos saponificables) o no los posean (lípidos
insaponificables):
 Lípidos saponificables son los semejantes a las ceras y grasas y que tienen enlaces éster y
pueden hidrolizarse
- Simples. Son los que contienen carbono, hidrógeno y oxígeno.
- Acilglicéridos. Son ésteres de ácidos grasos con glicerol. Cuando son sólidos se les llama grasas
y cuando son líquidos a temperatura ambiente se llaman aceites.
- Céridos (ceras).
- Complejos. Son los lípidos que, además de contener en su molécula carbono, hidrógeno y
oxígeno, contienen otros elementos como nitrógeno, fósforo, azufre u otra biomolécula como
un glúcido. A los lípidos complejos también se les llama lípidos de membrana pues son las
principales moléculas que forman las membranas celulares.
o Fosfolípidos
o Fosfoglicéridos
o Fosfoesfingolípidos
o Glucolípidos
o Cerebrósidos
o Gangliósidos
 Lípidos insaponificables estos no tienen enlaces éster y no pueden hidrolizarse
o Terpenoides
o Esteroides
o Prostaglandinas.
(12)
6. DISEÑO EXPERIMENTAL
15
6.1 PRUEBAS CUALITATIVAS DE BIOMOLÉCULAS: CARBOHIDRATOS,
PROTEINAS Y LÍPIDOS
A. Determinación de azúcares polisacáridos (almidón)
1. Dispensar en tubos de ensayo debidamente rotulados
TUBOS MUESTRA REACTIVOS
X 1 ml de Agua
(BLANCO)
A1 1 ml de agua con 1 g de patata 2 gotas de
troceada lugol
A2 1 ml de leche 2 gotas de
lugol
A3 1 ml de agua con 1 g de 2 gotas de
maicena lugol
A4 1 ml de orina 2 gotas de
lugol
A5 1 ml de suero sanguíneo 2 gotas de
lugol
2. Agitar en vortex 5 segundos
3. Observar el color, registrar e interpretar resultados
B. Determinación de monosacáridos azúcares
16
X 1 ml de Agua 0,5 ml de reactivo de
(BLANCO) Benedict
B1 1 ml de agua con 1 g de pera 0,5 ml de reactivo de
troceada Benedict
B2 1 ml de agua con 1 g uvas 0,5 ml de reactivo de
troceadas Benedict
B3 1 ml de leche 0,5 ml de reactivo de
Benedict
B4 1 ml de orina 0,5 ml de reactivo de
Benedict
B5 0,5 ml de suero sanguíneo 0,5 ml de reactivo de
Benedict
3. Someter a calentamiento en ebullición 1 minuto
C. Determinación de proteínas
PREPARACIÓN DE ALBÚMINA: Abrir un huevo en un vaso de precipitación, para
recoger únicamente la clara que contiene albúmina (libre de yema).
17
X 1 ml de Agua 0,5 ml de Reactivo de
(BLANCO) Biuret
C1 Diluir 1 ml de albúmina (clara 0,5 ml de Reactivo de
del huevo) con 0,5 ml de agua Biuret
destilada
C2 1 ml de leche 0,5 ml de Reactivo de
Biuret
C3 1 ml de orina 0,5 ml de Reactivo de
Biuret
C4 0,5 ml de suero sanguíneo 0,5 ml de Reactivo de
Biuret
3. Someter a calentamiento en ebullición 1 minuto
D. Determinación de lípidos
X 1 ml de Agua 2 ml de Butanol
(BLANCO)
D1 Con una jeringuilla mida 2 ml de 2 ml de Butanol
aceite
D2 1 ml de orina 2 ml de Butanol
18
D3 O,5 ml de suero sanguíneo 2 ml de Butanol
7. REGISTRO DE DATOS DE LA PRÁCTICA
(ANEXO1)
8. CÁCULOS Y RESULTADOS
CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE BILIRRUBINA TOTAL
BT=(AM-AB) *13
BT= (0,517-0,439) *13= 1.014mg/dl
BT: Bilirrubina Total
AM: Absorbancia del tubo Muestra
AM: Absorbancia del tubo blanco
CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE BILIRRUBINA DIRECTA
BD= (AM-AB) *13
BD= (0,150-0,137) *13=0,169mg/dl
BD: Bilirrubina Directa
AM: Absorbancia del tubo Muestra
AM: Absorbancia del tubo blanco
CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE BILIRRUBINA INDIRECTA
BI= (BT-BD)
BI= (1,014mg/dl- 0,169mg/dl) = 0,845 mg/dl
19
BI: Bilirrubina indirecta
BT: Bilirrubina total
BD: Bilirrubina directa
9. OBSERVACIONES
 Realizamos 3 pruebas cuantitativas: carbohidratos, lípidos y proteínas.
 Las pruebas se registraban de acuerdo a cada caso, si las pruebas fueron positivas o negativas,
en torno al color e influencia del cambio de temperatura.
 Pudimos observar que el agua al mezclarlo con Lugol no cambia de tonalidad, al mezclarlo
con el reactivo de Benedict se tornó de un color celeste claro, al mezclarlo con el reactivo de
Biuret se torna azul marino con un olor leve a urea, al mezclarlo con Butanol se torna
transparente con olor fuerte a alcohol.
 Observamos que la patata al mezclarla con el Lugol su cascara te tiño de un color morado y
negro y liquido burbujeante.
 La leche al fusionarse con el Lugol se torna de un color amarillo claro de una sola capa, al ser
mezclada con el reactivo de Benedict la leche se corta y se vuelve de un color naranja,
también se observan dos capas, la más clara arriba y la más turbia abajo, al ser mezclada con
el reactivo de Biuret se torna de un color celeste claro.
 Observamos que la maicena al mezclarse con el Lugol aparece tres capas, una blanca más
espesa, una morada delgada y una transparente turbia.
 Observamos que al mezclar el reactivo de Benedict con la pera, se torna anaranjada, espesa,
turbia y de un olor rancio, y al mezclarlo el mismo reactivo con las uvas se crea un líquido
amarillo verdoso de apariencia turbia.
 La albumina al mezclarse con el reactivo de Biuret, se separa en dos capas, la clara del huevo
se torna celeste.
 La orina al mezclarse con el Lugol, se torna transparente y no cambia su olor, con el reactivo
de Benedict se torna de un color verde azulado y se forman dos capas espesas, al contacto con
20
el reactivo de Biuret se torna de un color verde oscuro y se crean dos capas, una sólida y otra
liquida; al mezclarse con el butanol se torna de color crema y un olor a alcohol.
 El aceite al ser mezclado con el Butanol se forman dos capas una superior de color amarillo
turbio y la inferior transparente.
 El suero sanguíneo al ser fusionado con el Lugol se torna anaranjado, transparente y
burbujeante, al fusionarse con el reactivo de Benedict se torna azul verdoso turbio y existe
una mezcla total de soluciones, al mezclarse con el reactivo de Biuret se forman dos capas
una celeste sólida y otra azul liquida; y al mezclarse con el butanol existen dos capas una
inferior transparente turbia y una superior con aspecto burbujeante.
 Se describió y aplico las generalidades de la bioquímica práctica para realizar la correcta
cuantificación de las diferentes pruebas.
 Algunas pruebas necesitaron el uso del vortex, para poder agitar las muestras y reactivos
aplicados para su correcta mezcla.
10. CONCLUSIONES
1. Aplicamos reacciones químicas para la identificación Cualitativa y Cuantificación de
Biomoléculas y establecimos la importancia biomédica.
2. Tras la realización de la práctica, concluimos que, mediante métodos para cuantificar la
bilirrubina, podemos obtener valores de bilirrubinas total y directa, es muy importante saber
que valores contenemos. Hay patologías en las cuales su diagnóstico se determina por medio
de esta prueba.
3. Identificamos la presencia de Biomoléculas en muestras de alimentos y de líquidos
biológicos, mediante reacciones químicas cualitativas, en base a la presencia de grupos
funcionales característicos y su afinidad por reactivos químicos específicos.
4. Establecimos niveles de solubilidad de las biomoléculas en condiciones de temperatura
ambiental o de variante de temperatura.
21
11. RECOMENDACIONES
1. Es importante asegurarse de mantener al reactivo de bilirrubina protegido de la luz debido a
que este tiende a reducirse por efecto de la misma.
2. Al inicio de la práctica es importante cuantificar el tiempo, para realizar la práctica
correctamente dentro del laboratorio.
3. Tener cuidado al momento de materiales que se someterán a temperaturas altas, para prevenir
daños tanto a los materiales, como a los estudiantes.
4. Utilizar siempre el equipo de bioseguridad dentro del laboratorio, para prevención de daños
personales o colectivos.
12. CUESTIONARIO
Se desarrolla el cuestionario y se cita la bibliografía, si se requieren utilizan tablas, imágenes,
deberán rotularse, numerarlas e indicar fuente
1. Explique el fundamento de las pruebas cualitativas realizadas en la práctica
1. Fundamento de la determinación de azúcares polisacáridos (almidón)
El almidón en contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol toma un color azul-violeta
característico, esto se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molécula de almidón,
produciendo una modificación en las propiedades físicas de la molécula.
La reacción genera cadenas de poliyoduro debido a la reacción generada entre el almidón y el
yodo que se encuentra en la solución del reactivo Lugol. El componente del almidón de cadena
lineal, la amilasa, forma hélices donde se juntan las moléculas de yodo, formando un color azul
oscuro a negro. La amilopectina, otro componente del almidón de cadena ramificada, forma
hélices cortas y las moléculas de yodo son incapaces de juntarse, obteniendo un color entre
naranja y amarillo. La combinación de estos dos colores nos proporciona el color violeta
característico del almidón.
2. Fundamento de la determinación de monosacáridos azúcares
22
El fundamento de esta reacción radica en que, en un medio alcalino, el ion cúprico es capaz de
reducirse por efecto del grupo aldehído del azúcar (-CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se
observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu2O).
El medio alcalino facilita que el azúcar esté de forma lineal, puesto que en disolución forma un
anillo piranósico o furanósico. Una vez que el azúcar está lineal, su grupo aldehído puede
reaccionar con el ion cúprico.En estos ensayos es posible observar que la fructosa (una
cetohexosa) es capaz de dar positivo.
Cuando se añade el reactivo de Benedict al azúcar reductor, y se aplica calor, el color de la mezcla
cambia a naranja o ladrillo intenso mientras mayor sea la abundancia de azúcares reductores.
Un cambio a color verde indica la presencia de menos azúcares reductores.
Las azúcares que no reducen, como la sacarosa, no producen cambios en color y la solución se
mantiene azul
Los monosacáridos que forman anillos no son azúcares reductores porque no tienen un grupo
aldehído libre, pero pueden reducir si se convierten en monosacáridos abiertos.
3. Fundamento de la determinación de proteínas
El reactivo de Biuret se compone de hidróxido de sodio y sulfato de cobre. El grupo amino de las
proteínas reacciona con los iones de cobre del reactivo de Biuret y el reactivo cambia de azul a
violeta.
4. Fundamento de la determinación de lípidos
Los lípidos generalmente se encuentran enlazados a proteínas y polisacáridos de los tejidos,
formando complejos con diferentes grados de estabilidad, por lo que para poder romper estos
complejos el butanol debe desnaturalizar o separar las proteínas o carbohidratos asociados con
ellos.
2. En mapas conceptuales establezca: importancia biomédica, clasificación,
funciones, y propiedades de: Proteínas, Carbohidratos y Lípidos tomando como referencia
la Bioquímica de Harper.
23
 Son fuentes de energía  La mayoría de los
(glucógeno y almidón)
FUNCIONES
CARBOHIDRATOS
IMPORTANCIA BIOMÉDICA PROPIEDADES
carbohidratos contienen
 Forman parte de la IMPORTANCIA BIOMÉDICA
carbono, hidrógeno y
pared celular de los oxígeno en una
vegetales. proporción (CH2O)n.
 Son precursores de  Tienen importancia funcional, estructural y metabólica  Pueden poseer el grupo
producción de otras funcional aldehídos o el
 Los carbohidratos se absorben al torrente sanguíneo en
biomoléculas(aminoácid grupo funcional cetona.
forma de glucosa, siendo esta, el principal combustible
os, lípidos, purinas y metabólico en el organismo humano.  Todos posen el grupo
pirimidinas) funcional OH.
 Una alteración en el metabolismo de los carbohidratos
 Intervienen en puede originar diabetes mellitus, galactosemia,  Son solubles en agua y
complejos procesos de enfermedades por depósito de glucógeno e intolerancia son insolubles en
reconocimiento celular, disolventes orgánicos.
a la lactosa.
hormonal y coagulación.  Pueden sufrir
fermentación.
CLASIFICACIÓN
MONOSACARI DISACÁRIDOS OLIGOSACÁR POLISACÁRID

DOS IDOS OS
Dependiendo el Son producto de Son producto de Son producto de

número de átomos condensación de condensación de 3 a condensación de
pueden ser: dos unidades de 10 unidades de más de 10 unidades
 Triosas monosacáridos. monosacáridos. de monosacáridos.
 Tetrosas
 Pentosas
 Hexosas
Dependiendo del
grupo funcional:
 Aldosas
 Cetosas
24
 Tienen función defensiva, ya  Son solubles en agua cuando
que crean anticuerpos y
FUNCIONES
PROTEINAS PROPIEDADES
adoptan una constitución globular.
regulan factores contra agentes  La proteína típica nace durante la
IMPORTANCIA BIOMÉDICA
extraños o infecciones. traducción.
 Actúan como catalizadores  Madura a través de eventos de
acelerando las reacciones procesamiento postraduccional.
químicas del metabolismo. La importancia biomédica de las proteínas radica  Alterna estados de trabajo y
 Poseen funciones estructurales en que estas intervienen en distintos procesos del reposo por intervención de
como por ejemplo la reticulina, organismo, por ejemplo los filamentos de actina factores reguladores.
elastina, etc. y miosina forman la maquinaria contráctil de los  Envejece por oxidación.
 Realizan funciones músculos, la hemoglobina transporta oxígeno,  Muere por degradación de los
transportadoras, por ejemplo la etc. El exceso o deficiencia de las proteínas se aminoácidos que la componen.
mioglobina y la hemoglobina. relacionan con patologías específicas.
CLASIFICACIÓN
SEGÚN SU SEGÚN SU FORMA SEGÚN SU FUNCIÓN

COMPOSICION TRIDIMENSIONAL
 Simples  Fibrosas Estructurales De transporte Protectoras Hormonales Enzimáticas

Por hidrólisis dan solo Forman fibras
aminoácidos largas
 Compuestos  Globulares
Por hidrólisis dan otros Están enrolladas
componentes en formas
compactas y casi
esféricas
25
 Participa junto con las FUNCIONES
LÍPIDOS PROPIEDADES  Son insolubles en agua
proteínas y carbohidratos  Solubles en solventes no
en la composición de la IMPORTANCIA BIOMÉDICA polares (éter y
membrana celular. cloroformo)
 Posee funciones de reserva  La mayoría de lípidos
energética  La importancia biomédica de los lípidos se debe a que tienen pesos moleculares
 Actúa como aislador estos constituyen parte fundamental de la dieta debido a su relativamente bajos.
térmico de los tejidos valor energético, vitaminas liposolubles, ácidos grasos
subcutáneos. esenciales contenidos en la grasa de alimentos naturales.
 Las lipoproteínas  Los lípidos tienen funciones esenciales en la nutrición y
transportan proteínas en la la salud.
sangre.
CLASIFICACIÓN
SIMPLES COMPLEJOS LIPIDOS PRECURSORES

Y DERIVADOS
 Fosfolípidos
 Grasas ésteres de Además de alcohol y ácidos grasos contiene un
ácidos grasos con residuo de ácido fosfórico  Ácidos grasos
glicerol  Glucolípidos  Glicerol
 Ceras ésteres de Contienen ácidos grasos, esfingosina y  Otros alcoholes
ácidos grasos con carbohidrato.  Aldehídos grasos
alcoholes  Otros lípidos complejos  Cuerpos cetónicos
monohídricos de  Aminolípidos  Hidrocarburos
masa molecular  sulfolípidos  Hormonas
relativa
 Vitaminas
liposolubles
26
13. BIBLIOGRAFIA
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14. Rodríguez J. MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA. 4th ed. Monterrey: Universidad Autónoma de
Nueva León; 1987.
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México D. F.: McGraw-Hill; 2013.
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

Periodo Académico: abril – agosto de 2018

Identificación Cualitativa y Cuantificación de Biomoléculas

2.1 OBJETIVO GENERAL:

Aplicar reacciones químicas para la identificación Cualitativa y Cuantificación de

Biomoléculas y establecer la importancia biomédica.

2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

2.2.1 Identificar la presencia de Biomoléculas en muestras de alimentos y de líquidos biológicos,

mediante reacciones químicas cualitativas, en base a la presencia de grupos funcionales

característicos y su afinidad por reactivos químicos específicos.

2.2.2 Establecer niveles de solubilidad de las biomoléculas en condiciones de temperatura

ambiental o de variante de temperatura.

2.2.3 Establecer la importancia biomédica de la cuantificación de la Bilirrubina en una muestra de

sangre y describir la importancia biomédica.

3. MATERIALES / REACTIVOS /SOLUCIONES

MATERIALES QUE SE RETIRAN EN EL LABORATORIO

• 22 tubos de ensayo grandes

• 5 tubos de ensayo pequeños

• 1 pipeta semiautomática de 10 - 100 ul

• 1 pipeta graduada de 100 - 1000 ul

• 2 vasos de precipitación de 250 ml

• 1 pinza para tubo de ensayo

REACTIVOS QUE SE RETIRAN EN EL LABORATORIO

• Reactivo para cuantificar bilirrubina

MATERIAL Y MUESTRA A TRAER EN EL GRUPO QUE NO SE RETIRA EN

• Suero (recolectar en el laboratorio la muestra de sangre y obtener el suero/Tubo de tapa

• Orina (traer 1 muestra de orina en un recipiente estéril)

• 2 Franelas de 40 cm cada una

• 1 frasco de agua destilada de 500 ml

• 1 frasco de jabón líquido

• 1 dermográfico (o marcador de material de vidrio)

• 2 cepillos para lavar tubos de ensayo (pequeños de 5 ml y grandes de 10 ml)

• 1 par de guantes de uso doméstico

• 1 frasco con detergente (para lavado de materiales)

• 1 recipiente de plástico para cortopunzantes con etiqueta de desechos cortopunzantes y

en casa con tapa, grande de plástico grueso)

• 4 recipientes de plástico de 100 ml de capacidad con tapas

• 1 paquetes de toallas desechables INDIVIDUALES:

• 2 tubos al vacío de tapa roja (sin anticoagulante)

• 2 tubos al vacío con anticoagulante (tapa lila o celeste)

• 2 Agujas vacuntainer tapa verde

• 1 par de guantes de manejo de látex

• 1 cobertor de cabello (gorra para laboratorio)

• 1 par de gafas para laboratorio

• 1 Mandil con el nombre del estudiante y sello de la universidad - Carrera de Medicina

• 1 toalla de mano para uso personal

DETERMINACION DE AZÚCARES POLISACÁRIDOS

4. Se procedió a añadir 5. Se agitó en el vórtex 6. Se procedió a observar y

4. Se añadieron los 0.5ml 5. Agitamos los tubos en 6. Observamos el color,

1. Rotulamos los tubos de 3. Se añadie la leche, la orina

1. En los tubos ya 3. Se observo los resultados y

1. Se rotularon los tubos

5. FUNDAMENTO TEÓRICO O CONTENIDO CIENTÍFICO

procesos de reconocimiento celular, incluyendo la adhesión de células vecinas y el transporte de

proteínas a su destino intracelular final (modificaciones de la cadena glucosídica en su paso por

el Aparato de Golgi). Químicamente, los carbohidratos están compuestos por C, H y O. La

hidrato. Se clasifican según el número de monómeros: monosacáridos, disacáridos y

fórmula elemental Cn(H2O)n (donde "n" es un entero=1,2,3... según el número de átomos). De

Entre los generales se encuentran:

La fórmula química general de un monosacárido no modificado es (CH2O) n, donde n es

Los monosacáridos se clasifican de acuerdo a tres características diferentes: la posición del

grupo carbonilo, el número de átomos de carbono que contiene y su quiralidad. Si el grupo

carbonilo es un aldehído, el monosacárido es una aldosa; si el grupo carbonilo es una cetona, el