UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

FECHA: 6 de marzo 2018

Grupo: 3

Luis Miguel Cifuentes

Johanna Alejandra Garzón
Helen Johana Quiroga

Taller: Replicación del DNA en procariotas y eucariotas

Art. 1. Cunningham, E. L., & Berger, J. M. (2005). Unraveling the early steps of prokaryotic
replication. Current opinion in structural biology, 15(1), 68-76.

Cunningham y colaboradores, presentan una revisión sobre la organización del origen de replicación
en donde el ADN procariota se empieza a replicar y de los factores que están regulando este proceso
en su etapa inicial. Con base en la lectura correspondiente a la introducción, a la arquitectura del
origen de replicación y a la regulación de activación del origen (pág. 68-69-70 hasta el parágrafo 1)
responda:

1. ¿Qué entiende por: i) replicación; ii) factores con actividad trans (trans-acting factors), iii)
factores con actividad cis (cis-acting factors) y iv) replisoma?

i) replicación: Es el mecanismo que permite al ADN duplicarse. Es decir, de una molécula de ADN,
se obtienen dos o más réplicas de la primera.

ii) factores con actividad trans (trans-acting factors): Son genes que pueden modificar o regular la
expresión de genes distantes. Son secuencias de ADN que codifican factores de transcripción.

iii) factores con actividad cis (cis-acting factors): Son regiones no codificantes del ADN que regulan
la transcripción de los genes cercanos.

iv) replisoma: Son el complejo de proteínas que se ensamblan en la horquilla de replicación

bacteriana para sintetizar ADN.

2. ¿Dónde y cuándo empieza la replicación del genoma bacteriano?

La replicación bacteriana inicia, en el sitio de origen (oriC). Entra el iniciador de la replicación (la
proteína DnaA) que se une a múltiples regiones llamadas cajas DnaA en el sitio oriC.

3. ¿Cómo están organizadas las secuencias en donde se origina la replicación en procariotas?

El cromosoma de replicación bacteriano comienza típicamente en un sitio de origen único que puede
variar entre especies en su longitud (200-1000 pb) y conservados solo entre organismos relacionados
cercanamente, aún así casi todos los sitios de origen contienen varias cajas AdnA. así como una
región rica en AT.
 4. ¿Qué entiende por análisis “in silico”?

Es un análisis o experimento llevado a cabo sólo por ordenador. En este caso fue usado para analizar
la asimetría del ADN e identificar el posible origen de Arqueas

5. ¿Cuáles son los argumentos del autor para decir que el inicio de la replicación en archeas
es más parecido al de los eucariotes que al de las bacterias?

Esto se debe a la presencia de varios orígenes de replicación en el cromosoma de las archeas, esto
para el autor se relaciona con el hecho de que las proteínas que participan en la replicación estén
más relacionadas con las que actúan en los organismos eucariotes.

6. ¿Cuáles son los mecanismos que regulan la replicación del ADN?

● Uno de los más importantes es a través de la unión e hidrólisis de nucleótidos.

● Las ATPasas usadas a lo largo de la replicación del ADN, son importantes para una función
apropiada.
● En los DnaA se requiere la unión de ATP para su auto-oligomerización (para facilitar el
desenrollamiento de regiones ricas en AT dentro del oriC)

7. Explique la función de las proteínas que aparecen en la tabla 1

Bacteriano Arquea

Iniciador DnaA Cdc6/Orc1

Helicasa DnaB MCM

Helicasa Cargador DnaC Cdc6/Orc1?

Primasa DnaG Pri1

Polimerasa PolC PolD and/or PolB

Pinza deslizante b subunit PCNA

Cargador de abrazadera Y complex RFC

proteína de unión a ADN SSB RPA

monocatenario

DnaA: Es una proteína que activa el inicio de la replicación del ADN en bacterias. (Promueve el
desenrollamiento del ADN en oriC.
Helicasa: Se encarga de romper los puentes de Hidrógeno
Cargador Helicasa:
Primasa: Sintetiza primers de ARN complementarios a la cadena de ADN
Polimerasa: Enzima encargada de transcribir o replicar ácidos nucleicos,
Pinza deslizante: Proteína en forma de anillo que impide que la ADN polimerasa de la cadena
rezagada se vaya flotando cuando vuelve a comenzar en un nuevo fragmento Okazaki.
Cargador de abrazadera
proteína de unión a ADN monocatenario: Cubre las cadenas de ADN cerca de la horquilla de
replicación, impidiendo volver a unirse en una doble hélice.

8. Explique la figura 1 y 2.
Figura 1.

a) Los iniciadores se unen al ADN de origen. Remodelan el ADN , se reclutan factores,

como helicasas y cargadores de helicasas.
b) Las helicasas se encargan de desarrollar aún más el ADN
c) Se adicionan las polimerasas y primasas al origen.

Una vez entran las pinzas deslizantes, los cargadores de pinza y las proteínas de unión al ADN
monocatenario en el ADN. la maquinaria replisomal se completa y la replicación continua hasta la
fase de elongación.

Figura 2.
Es la comparación de las estructuras de origen procariota. por cajas de reconocimiento de origen
(ORB)

a) Diagrama esquemático de los orígenes bacterianos para E.coli con ( 260 bp, con cinco cajas
de DnaA) y S.solfataricus con ( 320 bp, con tres repeticiones)
b) Diagrama esquemático de los orígenes arqueales para S.lividans con ( 600 bp, con
diecinueve cajas de DnaA) y M.Thermoautotrophicus putative con ( 901 bp, con diez
repeticiones)
● Se observan caracteristicas en comun como,regiones ricas en AT
● En bacterias se utilizan solo pocas secuencias de repetición de origen (E.coli y S.lividans)
Mientras que en Arqueas tienen orígenes evolucionados que contienen varias repeticiones
( S.lividans y M.Thermoautotrophicus)

Art 2. Symeonidou, I. E., Taraviras, S., & Lygerou, Z. (2012). Control over DNA replication in time and
space. FEBS letters, 586(18), 2803-2812.

Symeonidou y colaboradores presentan una revisión sobre los principales eventos que ocurren en la
replicación del ADN eucariota durante el ciclo celular y de los mecanismos que controlan o regulan la
activación del inicio de la replicación en tiempo y en espacio. Con base en su lectura de la
introducción y la sección 2: La dinámica de los complejos que se unen al origen son los que dictamina
cuándo y dónde se la replicación podría dar inicio (pág 2803 y 2804) responda:

1. ¿Qué entiende por la activación del origen (origen firing) y que resulta una vez es activado
este origen?

Se refiere al desenrollado del ADN, el cual se da en los sitios de origen de replicación, que a su vez
dan origen a dos horquillas que se mueven en direcciones opuestas

2. ¿Quién está gobernando cuándo y dónde el replisoma cataliza la síntesis de ADN?

Los factores de carga son los encargados de activar el complejo pre-replicativo a través de la carga de
los complejos MCM2-7 a los orígenes, los cuales, al estar cargados, “autorizan” a los orígenes para
iniciar la replicación.

3. Explique la figura 1 presentado qué eventos ocurren en cada una de las fases del ciclo celular.
Licensing (loading) = Se reconoce el ORC (Complejo del reconocimiento del origen) en la molécula de
ADN, por factores de carga que reclutan complejos MCM2-7 (Helicasa) a los orìgenes, formando el
Pre-RC (Complejo pre replicativo). Esto sucede en la mitosis tardìa y el inicio de la fase G1. Donde la
actividad de la quinasa Cdc28/Clb es baja. (La unión y la separación de todos los componentes que
constituyen los pre-RC se verían reguladas por procesos de desfosforilación-fosforilación y/o
localización subcelular mediados por los complejos Cdc28/Clb.)

Activation= Se reclutan factores de iniciaciòn (Pre IC) y aquì se activan las helicasas MCM2-7, las
cuales reclutan la maquinaria de replicación, lo cual desencadena el desenrollamiento del ADN, la
migración de las horquillas bidireccionalmente, cada vez más alejadas del punto de origen y la
formación de complejos del replisoma, Esto ocurre en la fase G1/S.

Replication= En la fase S comienza el proceso de replicaciòn, donde el replisoma, que contiene:

Topoisomerasa, ADN polimerasa I y II, ligasa, primasa, helicasa y proteìnas ssb. Empiezan a separar
las hebras (Complementaria y rezagada) y por complementariedad de bases, la síntesis de dos
nuevas hebra. Allì es donde se desmonta el replisoma y las MCM2-7 son liberadas a la cromatina.

Replication block= Despuès de las fases S y G2 las helicasas no pueden volver a unirse al sitio de
origen, solo tiene lugar despuès de la mitosis, esto para asegurar que la replicación se repita solo una
vez en el ciclo celular. Aquì se marca el inicio de un nuevo ciclo.
 4. Compare cuáles son las similitudes y diferencias que encuentra en el proceso de replicación
entre procariotas y eucariotas. Para completar esta respuesta puede consultar un libro de
biología molecular.

Eucariotas Procariotas

Varios orígenes de replicación Un origen de replicación

La replicación es bidireccional

Requieren un primer de ARN

Las DNA polimerasas polimerizan en dirección 5` a 3`

5 tipos de ADN polimerasa 3 tipos de ADN polimerasa

Velocidad de replicación menor (horas) Velocidad de replicación mayor (minutos)

Replicación de histonas y ADN Replicación de ADN

Fragmentos de okazaki 100-150 nucleòtidos Fragmentos de okazaki 1000-2000 nucleòtidos