REPÚBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA

UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA EXPERIMENTAL LIBERTADOR

INSTITUTO PEDAGÓGICO DE CARACAS
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA Y QUÍMICA
QUÍMICA ANALÍTICA INSTRUMENTAL

DETERMINACIÓN DEL PKA DE UN INDICADOR VISUAL ÁCIDO-BASE (ROJO DE METILO)

UTILIZANDO LA ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR UV-VIS

Fundamento
Las constantes de equilibrio de reacciones químicas en solución se determinan midiendo las concentraciones
en equilibrio de los reactivos y de los productos envueltos en la reacción. Existen distintas propiedades físicas
que se utilizan para determinar las concentraciones de las especies en equilibrio. Una propiedad útil para
determinar la concentración las especies envueltas en una reacción es la absorción de radiación por las
substancias en solución. Por ejemplo la absorbencia de una especie es característica de cada substancia y
generalmente es una propiedad la distingue de otra.
Un ejemplo de substancias que exhiben absorbencias características son soluciones acuosas ácidas y
básicas de indicadores visuales como rojo de metilo, azul de bromotimol, verde de bromocresol, entre otros.
Dependiendo de la estructura del indicador en medio ácido y en medio básico, éste exhibirá un color
característico. Por ejemplo, en soluciones acuosas ácidas el rojo de metilo existe como un ión zwitter, el cual
tiene las siguientes estructuras resonantes:

La forma ácida de rojo de metilo (HMR), de color rojo, al añadir una base pierde un protón y el anión
(amarillo), MR- de rojo de metilo se forma absorbiendo luz azul y violeta. De la misma forma otros indicadores
cambian de color cuando el equilibrio de disociación se desplaza hacia la forma ácida o la forma básica.

Para rojo de metilo la forma ácida es color roja y la básica es amarilla, mientras que para azul de bromotimol,
la forma ácida es amarilla y la básica es azul. El equilibrio de disociación de un indicador ácido base se puede
representar por:
HIn + H2O ------> In- + H+ (1)
y la constante de equilibrio se establece por la ecuación:

(2)
En la relación (2) hemos aproximado la actividad de cada especie envuelta en el equilibrio con la
concentración molar.
Tomando el logaritmo a ambos lados de la relación (2) y multiplicando por (-1) obtenemos:

(3)
De la ecuación (3) se obtiene la ecuación de Henderson-Haasselbach que escribimos como:

(4)
Ya que tanto In- y HIn tienen bandas de absorción en la región visible, la razón puede ser determinada
espectrofotométricamente a diferentes pH y de esta forma determinar la constante de equilibrio.
Las regiones del espectro electromagnético tienen diferentes energías que se asocian a transiciones distintas.
En general, la absorción de luz visible o ultravioleta se asocia a transiciones electrónicas en una molécula.
Cuando una especie absorbe radiación electromagnética la intensidad del rayo incidente se reduce al pasar a
través de la muestra. Para una solución, en un largo de onda de luz incidente dado, la densidad óptica o
absorbencia, A, varía de acuerdo a la ley de Beer-Lambert:

(5)

En la relación (5) Io e I representan las intensidades de la luz transmitida por el disolvente puro y la solución
con la substancia que absorbe de concentración c, respectivamente. El parámetro b es el largo del paso óptico
de luz incidente sobre la muestra, y a es el coeficiente de absortividad (también se conoce coeficiente de
extinción molar) de la especie que absorbe que es una constante de proporcionalidad característica de cada
substancia. El valor de a depende del largo de onda de la radiación utilizada para irradiar la muestra y es
característica para cada especie química. Por lo tanto, la función de absortividad con identifica la sustancia que
absorbe.
Para una mezcla de substancias, la absorbencia total se obtiene de la suma de las contribuciones
individuales. Para sistema del indicador las dos especies envueltas (forma ácida y forma básica) contribuyen a la
absorbencia total en la región visible porque hay una mezcla de ambos (a pH's intermedio) de acuerdo al
equilibrio representado en (2). La absorbencia total es:

(6)
Utilizando la ley de Beer-Lambert para ambas substancias:

(7)
 Para determinar la razón de concentraciones de HIn y In- se busca el máximo de absorbencia de cada
sustancia individual. Por el principio de Le Chatelier aplicado al equilibrio representado en la expresión (1) a pH
bien bajo hay mayor contribución de HIn y a pH bien alto hay mayor contribución de In -. En la figura 4 aparecen
los espectros de las dos especies de interés que cuyo largo de onda máximo depende del color que absorben.

Para el sistema de rojo de metilo el largo de onda máximo de la especie ácida (color rojo) a pH = 2 es 520 nm
y el de la especie básica (color amarillo) a pH = 12 es 425 nm.
Si el paso óptico (b) es igual a uno.

(8)

Las relaciones en (8) aplican para cualquier largo de onda. Se escogen los largos de onda máximos de cada
especie (forma ácida y básica) y entonces la relación (8) para cada situación es:

(9)

Para rojo de metilo. Las expresiones en (9) se sustituyen en la expresión de absorbencia total (7):

(10)

La absorbencia total de una solución se mide en el laboratorio a cada largo de onda. Estos valores se
sustituyen en el izquierdo de la relación (10). Los valores de los coeficientes de absortividad molar que se
necesitan para resolver las ecuaciones en (10) se pueden determinar haciendo curvas de calibración a pH bien
bajo y a pH bien alto de las soluciones básicas y ácidas del indicador. Las curvas de calibración (Ley de Beer-
Lambert) se hacen midiendo la absorbencia a los dos largos de onda como función de concentración. Las
gráficas deben exhibir un comportamiento lineal y de la pendiente se obtiene el valor de coeficiente de extinción
molar. Podría argumentarse que lo que proponemos no se puede hacer ya que no sabemos las concentraciones
de las soluciones. Este problema se elimina al tomar una solución ácida o básica a cuya concentración se le
asigna el valor arbitrario de 1 o 100%. Se le mide el pH y la absorbencia a los dos largos de onda. Se diluye con
una cantidad conocida de disolvente para obtener concentraciones relativas de 0.75, 0.50 y 0.25. Para evitar
desplazar el equilibrio las diluciones deben hacerse manteniendo el pH constante. Se hacen las medidas de
absorbencia a los dos largos de onda a todas las soluciones y se generan cuatro gráficas para cada especie
(ácida y básica) a cada largo de onda

( ).
 La determinación de la constante de equilibrio requiere la determinación de la razón de concentraciones de In-
y HIn como función de pH. (ecu. 4) La ecuación (10) permite la evaluación de la razón de usando dos ecuaciones
y dos desconocidos ([HIn] y [In-] a cada largo de onda). Utilizando determinantes de Cramer puede determinar

que depende del equilibrio a ese pH.

(11)
Re-arreglando la ecuación (4) y sustituyendo (11) en (4)

(12)
Esta ecuación se lleva a gráfica y se obtiene:

El intercepto da el valor de la constante que se busca a 25ºC.

Reactivos
Indicador (rojo de metilo)
Acetato de sodio o base diluida, ácido clorhídrico, etanol 95%

Material e instrumentación necesarios

Espectrofotómetro
Ph metro
 Cubetas de 1 cm
Matraces volúmetricos y pipetas.

Procedimiento

La solución inicial del indicador se debe preparar en proporción de 0.5g en 200 mL de etanol, y luego se diluye
en 500 mL de agua destilada. Sus variaciones en pH se pueden hacer con soluciones amortiguadoras o
añadiendo distintos volúmenes de acetato de sodio 0.05M. Es importante que se regule la temperatura de la
cavidad donde se coloca la celda para las mediadas de absorbancia y pH.

 Pipetee 5.00 mL de solución provista del indicador en un matraz aforado de 100.00 mL, añada 50.00 mL
de etanol (95%) y complete la dilución con agua destilada. La solución resultante es la estándar.
 Mezcle 10.00 mL de solución estándar con 10.00 mL de HCl 0.1M y diluya hasta 100.00 mL con agua
destilada. Esta será la solución ácida (A).
 Mezcle 15.00 mL de solución estándar con 15.00 mL de NaOH 0.10 M y diluya hasta 100.00 mL con agua
destilada. Llámese solución básica (B).

Medidas de largo de onda máximo

 Tome el espectro de las soluciones A y B en el espectrofotómetro. Debe seguir las instrucciones que se le
proveen para su uso. Utilice agua destilada como referencia.
 Determine el largo de onda máximo para las soluciones ácida (A) y básica (B).
 Tome 5.0 mL (con bureta o pipeta) de la solución A. Esta será la solución que represente el 100% de
concentración relativa. Mida la absorbencia de esta solución en los dos largos de onda máximos (ácido y
básico) determinados en la parte anterior. Devuelva todo la solución de la celda al envase que contenía
los 5.0 mL de la solución A originales.
 Para preparar las diluciones de 75, 50 y 25% se sugiere que prepare 25 mL de agua con ácido hasta
alcanzar el pH de la solución A. Añada 1.70 mL del agua acidificada a los 5 mL de la solución de 100% y
mezcle bien. Esta será la solución de 75%. Mida la absorbencia a los dos largos de onda y devuelva la
solución de la celda al envase original y añada 3.30 mL del agua acidificada y esta será la solución de
50%. Mida la absorbencia, devuelva al envase original y añada 5.00 mL y esta será la solución de 25%.
Mida la absorbancia a los dos largos de onda.
 Repita para la solución B los dos pasos anteriores pero con agua a pH igual al de la solución B. De la
pendiente de una gráfica de absorbencia contra concentración relativa determine el de cada solución (A y
B) a los dos largos de onda máximos.

Variación en pH

 Tome 25.00 mL de la solución A. Utilice el metro de pH para ajustar la solución a pH de 4 usando NaOH
0.1 M. Llame a esta solución C.
 Mida la absorbencia de las soluciones C a los dos largos de onda máximos en la cavidad del sensor de
absorbencia.
 Varíe el pH de la solución C añadiendo base 0.10M hasta tener no menos de seis valores de pH entre
4.0 y 8.5 (de 0.5 en 0.5 unidades de pH. Mídale la absorbencia cada vez que haga un cambio en pH a los
dos largos de onda.
 Tome 25.00 mL de la solución B. Ajuste el pH a 10 usando HCl 0.1 M cotejando con el metro de pH.
Llame a esta la solución D.
 Mida la absorbencia de la solución D a los dos largos de onda máximos.
 Varíe el pH de la solución D añadiendo ácido 0.1 M hasta tener no menos de seis valores de pH entre
10.0 y 6.5 (de 0.5 en 0.5 unidades de pH). Mídale la absorbencia cada vez que varíe el pH a los dos
largos de onda máximo.

ORGANIZACION DE DATA

Tabulación: Tabule en forma clara. Asegúrese de unidades e incertidumbres e indicar las referencias de los
valores de literatura.
  Los valores de largo de onda máximos para la forma ácida y básica del indicador y los valores de
absorbencia obtenidos para cada concentración a pH ácido y a pH alcalino medidos al largo de onda
máximo de la forma ácida y la forma alcalina.
 Los valores de absorbencia obtenidos para cada concentración a pH ácido y a pH alcalino medidos al
largo de onda máximo de la forma ácida y la forma alcalina.
 La absorbencia para cada pH diferente. (Datos del sistema automatizado)
 Los valores de la literatura de Ka.

ANÁLISIS NUMÉRICO

Gráficas

Recuerde escribir título, identificar los ejes de coordenadas y especificar la escala. Asegúrese de que dibujó las
barras de error.

Incluya gráficas de:

 absorbencia contra de la solución ácida y de la solución básica de no estar disponible alguno de los
espectrofotómetros con registro gráfico sino las gráficas pueden ser obtenidas de la impresora del
espectrofotómetro acoplado a una impresora.
 absorbencia contra concentración de la forma ácida y alcalina en los dos largos de onda y determine la
absortividad molar de la forma ácida y la forma básica en los dos largos de onda máximos.
 absorbencia contra pH generadas por el sistema automatizado.
 pH contra la razón de concentraciones de la especie básica y la especie ácida para determinar pKa.

Cálculos

 Determine el largo de onda máximo de la forma ácida y básica del indicador.

 Determine coeficientes de extinción para la forma ácida y básica del indicador en los dos largos de onda.
 Determine Ka para la disociación del indicador.

Referencias Bibliográficas

Miller, J., (2002). Estadística y Quimiometría para Química Analítica. 4ª ed. España: Prentice Hall.

Scribd, (2012). CONSTANTE DE IONIZACIÓN ÁCIDA DE UN INDICADOR VISUAL. [Página Web en línea],
http://www.uprh.edu/~inieves/pKa-manual_timol.htm. [Consulta: 2012. Mayo 15].

Skoog, D., Holler J. y Nieman T. (2002). Principios de Análisis Instrumental, 5a ed. España: Mc Graw Hill.

Vogel, A. (1978). Análisis Cuantitativo Inorgánico, 4a ed. E.E.U.U.: Longman.

Elaborado por:
T.S.U. Ismael Oropeza
Revisado por:
Prof., José Zabala
Abril 2012