Professional Documents
Culture Documents
MICROBIANA
BIOTECNOLOGÍA
Fines energéticos
Fines biosintéticos
NUTRICION MICROBIANA
Metabolismo:
Metabolismo
conjunto de reacciones
bioquímicas y procesos físico-químicos que
ocurren a nivel celular. Se divide en dos procesos
BIOTECNOLOGÍA
conjugados:
Catabolismo: es un proceso de degradación de compuestos (ej.:
La glucosa), resultando en la liberación de la energía retenida
en sus enlaces químicos.
Según el destino:
BIOTECNOLOGÍA
Macronutrientes: C, H, O, H, S, P, Mg, K
Forman parte de enzimas y cofactores y
facilitan la catálisis de las reacciones y el
mantenimiento de la estructura de las
proteínas, Ej
◦ Zn: centro activo de algunas enzimas
◦ Mn: facilita la transferencia de grupos
fosfato
◦ Co: componente de la vitamina B12
CLASIFICACIÓN DE NUTRIENTES
Según el destino:
Según el destino:
Ejemplos:
Las bacterias del género Brucella requieren como factores de crecimiento en sus medios de cultivo la
biotina, niacina, tiamina y ácido pantoténico.
Haemophilus necesita suplementos de grupos hemo y piridín-nucleótidos.
CLASIFICACIÓN DE NUTRIENTES
Factor o vitamina Funciones principales
p-aminobenzoico (PABA) Precursor del ácido fólico
Acido fólico Metabolismo de compuestos C1,
transferencia de grupos metilo.
Biotina Biosíntesis de ácidos grasos; fijación de
BIOTECNOLOGÍA
CO2
Cobalamina (vitamina Reducción y transferencia de
B12) compuestos C1; síntesis de desoxirribosa
Niacina (ácido nicotínico) Precursor del NAD; transferencia de
electrones en reacciones redox
Riboflavina Precursor de FAD y FMN
Ácido pantoténico Precursor de la CoA
Tiamina (vitamina B1) Descarboxilaciones; transcetolasas.
Complejo B6 (piridoxal, Transformaciones de aminoácidos y
piridoxamina) cetoácidos
Hidroxamatos Compuestos que unen hierro,
solubilización y transporte del hierro al
interior celular
Grupo Vitamina K, Transportadores de electrones
BIOTECNOLOGÍA
COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA
CÉLULA
El agua representa el 80-90 % del peso total de la
célula.
En la tabla 1 se muestra la composición elemental aproximada de la
BIOTECNOLOGÍA
Elemento
célula Porcentaje
microbiana. Funciones fisiológicas
del Peso
seco
Carbono 50 Constituyente del material celular orgánico.
Oxígeno 20 Aceptor de electrones, constituyente del agua y
compuestos orgánicos
Nitrógeno 14 Constituyente de proteínas, ácidos nucleicos,
coenzimas.
Hidrógeno 8 Constituyente del agua y de compuestos orgánicos
Fósforo 3 Constituyente de fosfolípidos, ácidos nucleicos y
coenzimas.
Azufre 1 Constituyente de aminoácidos y coenzimas
Potasio 1 Cofactor de enzimas
Sodio 1 Asociado a la presión osmótica.
Calcio 0.5 Estabilizador de la pared celular
Magnesio 0.5 Cofactor de reacciones enzimáticas.
Cloro 0.5
Hierro 0.2 Componente de los citocromos
ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO
microorganismo.
Ejemplo:
ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO
El número de nutrientes es muy grande para
considerarlos a todos, por lo tanto la descripción
del sistema se hace basándose en componentes
BIOTECNOLOGÍA
de crecimiento celular.
Si el factor de rendimiento es
aproximadamente constante para una
BIOTECNOLOGÍA
de la siguiente forma:1 1 mS
BIOTECNOLOGÍA
siendo mS el coeficiente de
mantenimiento y se utiliza para describir la
velocidad específica de consumo de
sustrato para el mantenimiento y la
expresión para el cálculo es la siguiente:
dS
dt
m
mS :
X
NUTRICIÓN MICROBIANA
OBJETIVO:
BIOTECNOLOGÍA
FUENTES DE CARBONO:
FUENTES DE NITRÓGENO:
Sales de amonio, urea, nitratos, macerado de maíz, harina de soja,
desechos de mataderos y residuos de fermentaciones,
El almidón puede separarse en las dos fracciones más importantes con agua
caliente. El componente insoluble (10 al 25 %) es la amilosa, en tanto que el
componente soluble es (75 al 90 %) es la amilopectina. La amilopectina, es
amilosa altamente ramificada mediante enlaces (1-6) glucosídicos.
CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
El jarabe de maíz, un subproducto de la extracción del almidón de maíz,
es empleado principalmente como fuente de nitrógeno, no obstante
contiene ácido láctico, pequeñas cantidades de azúcares reductores y
polisacáridos complejos.
BIOTECNOLOGÍA
FUENTES DE NITRÓGENO
• Orgánicas:
1) Hidrolizados de Proteínas (Peptonas) de carne de diferentes
órganos y animales, pescado, caseína, harina de soja, algodón,
girasol, etc. Además de aportar nitrógeno, aportan
aminoácidos, vitaminas, fosfatos y micronutrientes como el Ca,
Zn, Fe y Cu.
2) Extracto de carne
3) Extracto de levadura: Es una mezcla de aminoácidos, péptidos,
vitaminas hidrosolubles y carbohidratos.
4) Extracto de malta: el extracto soluble en agua de la malta de la
cebada.
CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
PRECAUCIONES EN EL USO DE CARBOHIDRATOS
El calentamiento de soluciones concentradas puede causar:
BIOTECNOLOGÍA
GRASAS y ACEITES
BIOTECNOLOGÍA
Azufre, 0.5-1.0; Mg, 0.5-1. Es decir, que si queremos formular un medio para
producir una determinada cantidad de biomasa debemos proveer las
distintas fuentes que aseguren como mínimo las cantidades de elementos
que deben ser suministrados. La composición de un medio mínimo basado en
este principio, que además tiene en cuenta los requerimientos de las fuentes
de energía, ha sido calculada por Pirt para
la producción de 10 g/l de Klebsiella aerogenes.
OPTIMIZACIÓN
(1)
(2)
L
n
Xf
LnX
µ
m
ax
L
n
X0
t
L t
i
emp
o
SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
La fase lag depende además de la fase de crecimiento en que
se encuentran las células en el momento de ser sembradas y
de la composición del medio de cultivo en que fueron
crecidas. Si éste es igual a la composición del medio en que se
van a sembrar y las células están en fase exponencial, la
duración de la fase lag, en general se acorta y puede llegar a
desaparecer, lo cual es deseable ya que constituye tiempo
perdido.
La descripción matemática (modelado) de las cuatro fases
descriptas es sumamente compleja por lo que sólo veremos
una más simple que sólo contempla la fase exponencial y la
estacionaria.
rx = . X
SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
Hemos visto que varía durante el cultivo, siendo un valor constante y máximo en la fase
exponencial (m) y nulo en la estacionaria. Monod ha propuesto una relación muy simple
entre el valor de y la concentración de sustrato limitante, S, entendiéndose por éste al
componente del medio de cultivo que esté en menor proporción respecto de las necesidades
del microorganismo. Por tanto S puede ser la fuente de N, de C, algún aminoácido, etc. La
ecuación es:
= m S
KS S
= m
SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
S
= m rx = . X
KS S
Al principio del cultivo todos los nutrientes estarán en exceso, y en particular el sustrato
limitante también, por lo que la ec. se reduce a (fase exponencial)
SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
A medida que transcurre el tiempo de cultivo, S va disminuyendo (y por tanto rx) hasta
que finalmente S = 0 (fase estacionaria), y
rx = 0
Teniendo en cuenta
que rx = µ X
D = velocidad de dilución
SISTEMA DE CULTIVO EN CONTINUO
Variable de operación
fundamental en este tipo de
F cultivos es la velocidad de
D dilución, D, la que se define como
V la relación entre el caudal de
alimentación, F, y el volumen de
cultivo, V
El valor de D corresponde a las veces que se renueva el volumen del biorreactor por unidad de tiempo, así un valor
de D= 0.25 h-1 indica que en una hora se renovó un 25 % del volumen de cultivo, o bien que al cabo de 16 hs. se habrá
renovado cuatro veces el volumen de cultivo
SISTEMA DE CULTIVO EN CONTINUO
Podría pensarse que a estas alturas prácticamente ya no quedan microorganismos dentro del biorreactor, pero
no es así; debe tenerse en cuenta que estos se están multiplicando activamente lo cual compensa las
“perdidas” debidas a los microorganismos que son arrastrados fuera del biorreactor por el caudal de salida. Bajo
ciertas condiciones, ambos procesos se compensan de modo tal que la concentración de microorganismos se
mantiene constante en el tiempo, es decir que se habrá alcanzado un estado estacionario. En estas condiciones
también se mantendrán constantes en el tiempo las concentraciones de nutrientes, en particular la del substrato
limitante del crecimiento, y la de producto(s).
SISTEMA DE CULTIVO EN CONTINUO
Para poner en marcha un cultivo continuo se realiza previamente
uno batch y en un momento dado se comienza a alimentar con
medio fresco con un caudal F y por un rebalse se mantiene el
volumen constante.
Balances de
masa para
X, S y P
X = biomasa
S = subs limitante
P = producto
Cultivo continuo
BIOTECNOLOGÍA
tR = 1 / D
Por tanto si se fija un valor de D= 0.15 h-1, habrá que esperar 26,7 hs. para suponer que se ha
alcanzado el estado estacionario, lo que deberá ser corroborado experimentalmente midiendo las
concentraciones de X, S, P hasta observar que no varían con el tiempo. Usualmente con 4.tR es
suficiente
SISTEMAS DE CULTIVO DISCONTINUO
ALIMENTADO (BATCH ALIMENTADO)
Donde
F(t): caudal de alimentación
Sr(t):concentración de sustrato de la alimentación
Vf: volumen final de trabajo
Vo: volumen al inicio de la alimentación
Xo: concentración de biomasa al inicio de la alimentación
So: concentración de sustrato limitante al inicio de la
alimentación
GRÁFICAMENTE
S0'
X.V = X0.V0 + F.SR.YX/S.t
X0.V0
X.V µ < µmax
µ = µmax
X0'.V0' S0 = 0
(47)
(48)
PRODUCTIVIDAD
(49)
(50)
PRODUCTIVIDAD
dilución.
(51)
PRODUCTIVIDAD (Batch vs Continuo)
(52)
(53)