Método de ensayo cualitativo para determinar Listeria en alimentos

(Método Ambiental BAM)

Identificación: LMA-14 Página: 1 de 11

Revisión: 01 Vigencia: AAAA-MM-DD

ÍNDICE
1. OBJETIVO.........................................................................................................................2
2. ALCANCE..........................................................................................................................2
3. DEFINICIONES Y ABREVIATURAS......................................................................................2
4. RESPONSABILIDADES.......................................................................................................3
5. PROCEDIMIENTO.............................................................................................................3
6. CONTROL Y ARCHIVO DE REGISTROS...............................................................................6
7. FRECUENCIA DE REVISIÓN...............................................................................................7
8. DOCUMENTOS DE REFERENCIA.......................................................................................7
ELABORADO REVISADO APROBADO
NOMBRE: Gabriela Valencia Blanca Esthela Blanca Esthela Bravo
Bravo
CARGO: Ayudante Docente Docente

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Método de ensayo cualitativo para determinar Listeria en alimentos (Método

Ambiental BAM)

1. OBJETIVO
El presente procedimiento tiene como objetivo describir la metodología
para realizar el aislamiento de Listeria en alimentos.

2. ALCANCE
Esta técnica es aplicable para determinar la presencia o ausencia de Listeria
en leche cruda y pasterizada, derivados lácteos, carne cruda, productos
cárnicos y hortalizas.

3. DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
N.A

4. RESPONSABILIDADES
Actividad JM PT
Fundir y plaquear los medios de cultivo E
Supervisar todas las actividades relacionadas con el ensayo D
Realizar el ensayo E
Leer las placas o tubos luego de la incubación y registrar los resultados E
Revisar y firmar el Informe de Ensayo D/E

D: Decide
JM: Jefe del laboratorio de Microbiología P: Participa
PT: Personal Técnico E: Ejecuta
I: Recibe información
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Ambiental BAM)

5. PROCEDIMIENTO
5.1 RECEPCION Y PROCESAMIENTO

Para la manipulación, transporte y almacenamiento se recomienda una

temperatura de 4 ºC en la cual Listeria monocytogenes crecerá pero
lentamente.

Si la muestra es congelada, no descongelar hasta su análisis.

Muestras no compuestas:

Si compuestos de muestras no son requeridos, una porción analítica

individual de 25 g de muestra es homogeneizada en Stomacher o
Blender con 225 mL de caldo BLEB basal.

Guarde un porción de 25 g de muestra para enumeración del patógeno

si es necesario y mantenga a 5ºC si el producto no es congelado, si es
congelado mantenga en un congelador que no descongele.

5.2 PRE- ENRIQUECIMIENTO Y ENRIQUECIMIENTO

Incubar por 4 h a 30º C los veinticinco gramos de muestra homogenizada

en caldo BLEB basal (Caldo de Enriquecimiento tamponado para
Listeria).

Una vez cumplidas las 4 h de incubación con caldo BLEB basal, agregar
los siguientes agentes selectivos: 0,455 mL de solución acuosa de
acriflavina clorhidrato al 0,5%, 1,8 mL de solución acuosa de sal sódica
de ácido nalidíxico al 0,5% y 1,15 mL de solución de cicloheximida al 1%
en etanol al 40%. Si no dispone de cicloheximida puede utilizar
pimaricina o natamicina 25 mg/L que es mucho más seguro su uso que
la cicloheximida. Otra posibilidad es que si las matrices de interés (por
ejemplo: leche y crema pasteurizada, yogurt y productos de origen
marino precocidos congelados) poseen baja cantidad de mohos y
levaduras puede prescindir de un anti- fúngico. Esto no es recomendable
para quesos madurados con mohos, mariscos ahumados o
deshidratados y productos frescos.
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Ambiental BAM)

Continuar la incubación para completar las 48 h, siempre a 30ºC.

5.3 AISLAMIENTO

 A las 24 y 48 h, traspasar por aislamiento una asada del cultivo del

caldo BLEB sobre los siguientes medios selectivos que contienen
esculina: OXFORD o PALCAM.

 Incubar a 35º C por 24-48 h las placas de Agar Oxford, PALCAM.

5.4 REAISLAMIENTO

Las colonias de Listeria son negras con un halo negro sobre los medios
que contienen esculina. Otras bacterias pueden formar colonias
débilmente negras –marrón, pero el desarrollo del color requiere dos
días.

 Transferir 5 o más colonias típicas desde el agar OXFORD y PALCAM

a placa de agar soya tripticasa con extracto de levadura al 0,6%
(TSAye). Sembrar por aislamiento para obtener colonias aisladas
típicas y puras.

IDENTIFICACION

 A partir de una colonia típica del agar TSAye traspasar a un tubo con
caldo soya tripticasa con extracto de levadura 0,6% (TSBye) para
realizar las pruebas de fermentación de carbohidratos, reducción
nitrato a nitritos, prueba de motilidad en agar SIM

Incubar el tubo con caldo TSBye a 35ºC por 24 h.

 A partir de colonias típicas de las placas de agar TSAye realizar las

pruebas de motilidad, catalasa, tinción Gram, hemólisis, test de
CAMP.
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Ambiental BAM)

6. CONTROL Y ARCHIVO DE REGISTROS

Los registros correspondientes a los ensayos se archivan en el
Laboratorio de Microbiología.

7. FRECUENCIA DE REVISIÓN
El responsable del laboratorio de Microbiología debe coordinar la revisión
del presente procedimiento al menos cada año.

8. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
Food Drug Administration Bacteriological Analytical Manual, BAM online
chapter 10, January 2003.

Instituto de Salud Pública de Chile. Procedimiento de detección de

Listeria monocytogenes en alimentos, BAM ONLINE. Fecha de revisión:
26/07/2010. Págs.: 1-8