Universidad de Guayaquil Facultad

de Ciencias Químicas Carrera:

Química y Farmacia

LABORATORIO
DE
ANALISIS INSTRUMENTAL II

SEGUNDO PARCIAL

INFORME # 8 SEMESTRE: SÉPTIMO GRUPO: 2-B

Estudiante: Roxana Mina Romero Docente: Q.F. Tatiana Zamora Zamora

TÍTULO: Cromatografía de gases. Evaluación del efecto de la temperatura

OBJETIVO:
1. Reconocer los componentes del sistema cromatográfico de gases.
2. Identificar los parámetros de optimización cromatográfica por GC.
3. Determinar el efecto de aplicación de programación de temperatura para la separación
cromatográfica.

Instrucciones o consideraciones previas:

En cromatografía de gases (GC), la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna

cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil de un gas inerte, y a diferencia de la
mayoría de los tipos de cromatografia, la fase móvil no interacciona con las moléculas del analito; su única
función es la de transportar el analito a través de la columna. Existen dos tipos de cromatografía de gases: la
cromatografía gas - sólido (GSC) y la cromatografía gas-líquido (GLC).

 La cromatografía gas – sólido.- se basa en una fase estacionaria sólida en la cual se produce la
retención de los analitos como consecuencia de la adsorción física. La cromatografia gas - sólido ha
tenido una aplicación limitada debido a la retención semipermanente de las moléculas activas o
polares y a la obtención de picos de elución con colas (una consecuencia del carácter no lineal del
proceso de adsorción), de modo que esta técnica no ha encontrado una gran aplicación excepto para
la separación de ciertas especies gaseosas de bajo peso molecular.

 La cromatografía gas – líquido.- se basa en la distribución del analito entre una fase móvil gaseosa y
una fase líquida inmovilizada sobre la superficie de un sólido inerte. El concepto de cromatografía gas
- líquido fue enunciado por primera vez, en 1941, por Martin y Synge, quienes fueron también los
responsables del desarrollo de la cromatografía de distribución líquido – líquido.
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CROMATOGRAFO DE GASES
Los componentes fundamentales de un cromatógrafo de gases, son:
 Fuente de gas.
 Sistema de inyección.
 Horno y columna cromatográfica
 Sistema de detección.
 Sistema de registro.

Sistemas de inyección de muestra

El modo estándar, adecuado para aproximadamente 95% de las aplicaciones de las columnas empacadas (o
empaquetadas), es la inyección directa. La muestra es inyectada con una jeringa hipodérmica a través de un
séptum de goma (o hule) de silicona autosellante, a un alineador de vidrio (glass insert) contenido en un
bloque metálico, donde es vaporizada y barrida hacia la columna . El bloque se calienta a una temperatura
que se fija en un valor suficientemente alto para convertir prácticamente en forma instantánea la muestra
líquida en vapor. La cantidad de muestra inyectada es del orden de µL para líquidos y algo superior para gases.

 Inyectores para columnas empaquetadas: La inyección de muestras en columnas empaquetadas no

presenta problemas particulares; este tipo de columnas admiten cantidades de muestra
relativamente elevadas.
 Inyección en columnas capilares: Es necesaria una reducción del volumen de la muestra cuando se
trabaja con columnas capilares. Esto se logra mediante un inyector – divisor (inyección en split), donde
generalmente se inyecta una muestra de 1 µL pero sólo entra al capilar 0.01 µL; el resto es desechado.
Esta técnica impide la sobrecarga de la columna, pero desperdicia una porción significativa de la
muestra. Cuando se realizan análisis en cantidades pequeñas de muestra con algunos componentes en
concentraciones del orden de milésimos de parte por millón, se introduciría muy poco material en la
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columna si para estas muestras se utiliza el divisor. Para ellas se requiere de solvente o inyección sin
división (inyector en splitless).

Muestreador automático
Un muestreador automático reproduce las inyecciones y medidas manuales. Los frascos para las muestras son
de vidrio, desechables, con tapones de séptum con sellado para vapores. Los muestreadores automáticos
tienen reproducibidad mecánica y son consistentemente más precisos que un cromatografista
experimentado.

Columnas
En cromatografía de gases se usan dos tipos generales de columnas, las empaquetadas, o de relleno y las
tubulares abiertas, o capilares. Hasta la fecha, la mayor parte de la cromatografía de gases se ha realizado con
columnas de relleno, Sin embargo, en la actualidad esta situación está cambiando rápidamente, y parece
probable que en un futuro próximo, excepto para ciertas aplicaciones especiales, las columnas de relleno serán
sustituidas por las más eficaces y rápidas columnas capilares.

Hornos (o estufas)
La temperatura de la columna es una variable importante que para un trabajo preciso ha de regularse a las
décimas de grado, por ello la columna normalmente se introduce dentro de un horno termostatizado. La
temperatura óptima de la columna depende del punto de ebullición de la muestra y del grado de separación
requerido. En la práctica, con una temperatura igual o ligeramente superior al punto de ebullición promedio
de la muestra, se obtienen tiempos de elución razonables (2 a 30 min). Para muestras con un amplio intervalo
de ebullición, a menudo es conveniente emplear una programación de temperatura, con lo que se aumenta
la temperatura de la columna bien de forma continua bien por etapas, al mismo tiempo que tiene lugar la
separación.

Detector de ionización de llama (FID) En cromatografía de gases, el detector de ionización de llama (FID) es
uno de los detectores más extensamente utilizado y, por lo general, uno de los más aplicables. En un
quemador, el efluente de la columna se mezcla con hidrógeno y con aire para luego encenderse
eléctricamente. La mayoría de los compuestos orgánicos, cuando se pirolizan a la temperatura de una llama
de hidrógeno/aire, producen iones y electrones que pueden conducir la electricidad a través de la llama. Entre
el extremo del quemador y un electrodo colector situado por encima de la llama, se aplica una diferencia de
potencial de unos pocos cientos de voltios, y para la medición de la corriente que resulta (de unos 10-12A) se
utiliza un amplificador operacional de alta impedancia. La ionización en la llama de los compuestos que
contienen carbono no es un proceso bien establecido, aunque se observa que el número de iones que se
produce es aproximadamente igual al de átomos de carbono transformados en la llama. El detector de
ionización de llama debido a que es un detector que responde al número de átomos de carbono que entra en
el detector por unidad de tiempo, es un detector sensible a la masa, más que un sistema sensible a la
concentración. En consecuencia, este detector tiene la ventaja de que los cambios en el caudal de la fase móvil
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tienen poco efecto sobre la respuesta del detector. Grupos funcionales, tales como carbonilo, alcohol,
halógeno y amina, originan en la llama pocos iones o prácticamente ninguno (Pérez & Magadán, 2014).

¿Qué factores influyen en la separación de los componentes?

Presión de vapor

El punto de ebullición de un compuesto a menudo está relacionado con su polaridad. Cuanto menor es el punto de
ebullición, mayor es la presión de vapor del compuesto y el tiempo de retención más corto generalmente es porque el
compuesto pasará más tiempo en la fase gaseosa. Esa es una de las razones principales por las cuales los disolventes de
bajo punto de ebullición (es decir, dietil éter, diclorometano) se usan como disolventes para disolver la muestra. La
temperatura de la columna no tiene que estar por encima del punto de ebullición porque cada compuesto tiene una
presión de vapor distinta de cero a cualquier temperatura dada, incluso sólidos. Esa es la razón por la que podemos oler
compuestos como alcanfor (0.065 mmHg / 25 ºC), naftaleno (0.084 mmHg / 25 ºC), etc. Sin embargo, sus presiones de
vapor son bajas en comparación con los líquidos (es decir, agua (24 mmHg / 25 ºC), acetato de etilo (95 mmHg / 25 ºC),
éter di etílico (520 mmHg / 25 ºC).

La polaridad de los componentes frente a la polaridad de la fase estacionaria en la columna

Si la polaridad de la fase estacionaria y el compuesto son similares, el tiempo de retención aumenta porque el compuesto
interactúa más fuerte con la fase estacionaria. Como resultado, los compuestos polares tienen tiempos de retención
largos en fases estacionarias polares y tiempos de retención más cortos en columnas no polares que usan la misma
temperatura.

Tasa de flujo de gas portador

Un alto índice de flujo reduce los tiempos de retención, pero también se observaría una separación deficiente. Al igual
que en el caso anterior, los componentes tienen muy poco tiempo para interactuar con la fase estacionaria y
simplemente se empujan a través de la columna.

Longitud de columna

Una columna más larga generalmente mejora la separación. El compromiso es que el tiempo de retención aumenta
proporcionalmente a la longitud de la columna y también se observará un aumento de picos significativo debido a una
mayor difusión longitudinal dentro de la columna.

Cantidad de material inyectado

Idealmente, los picos en el cromatograma muestran una forma simétrica (curva gaussiana). Si se inyecta una gran
cantidad de la muestra, los picos muestran una cola significativa, lo que causa una separación más pobre. La mayoría de
los detectores son relativamente sensibles y no necesitan mucho material para producir una señal detectable.
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Estrictamente hablando, bajo condiciones estándar solo el 1-2% del compuesto inyectado en el puerto de inyección pasa
a través de la columna porque la mayoría de los instrumentos de GC se operan en modo dividido para evitar la
sobrecarga de la columna y el detector. El modo splitless solo se usará si la muestra tiene una concentración
extremadamente baja en términos del analito.

Efecto de la Temperatura
La temperatura de la columna es una variable importante que para un trabajo preciso ha de regularse a las
décimas de grado, por ello la columna normalmente se introduce dentro de un horno termostatizado. La
temperatura óptima de la columna depende del punto de ebullición de la muestra y del grado de separación
requerido. En la práctica, con una temperatura igual o ligeramente superior al punto de ebullición promedio
de la muestra, se obtienen tiempos de elución razonables (2 a 30 min). Para muestras con un amplio intervalo
de ebullición, a menudo es conveniente emplear una programación de temperatura, con lo que se aumenta
la temperatura de la columna bien de forma continua bien por etapas, al mismo tiempo que tiene lugar la
separación.

REACTIVOS

 Dimetil sulfóxido (calidad reactivo)

 Benceno (estándar certificado)
 Butanol (estándar certificado)
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MATERIALES
 Columna Capilar de tipo Zebron ZB-5ms (30 m x 0.25 mm x 0.50 um)

EQUIPOS
 Cromatógrafo de gases
 Detector FID, Gas de arrastre Helio, Inyector split

ACTIVIDADES PARA DESARROLLAR/ TÉCNICA OPERATORIA O PROCEDIMIENTO:

 Preparar una solución de patrón benceno y butanol (solución mezcla) del orden de 50 ppm de concentración.
 Encender el sistema cromatográfico y abrir el paso del gas de arrastre.
 Revisar la literatura para definir las condiciones de temperatura de ebullición de los compuestos a analizar,
peso molecular, polaridad. Así también características de la columna cromatográfica.
 Colocar en el software las condiciones básicas del método analítico.
o Temperatura del inyector: 250°C
o Temperatura del detector: 250°C
o Flujo de gas de arrastre: 55cm/seg
o Volumen de inyección: 1ul
o Inyección Split 50:1
 Inyectar en el sistema cromatográfico 1ul de la solución patrón condiciones de temperatura de columna.
 Registrar los tiempos de retención de los compuestos.

RESULTADOS :
TABLA DE DATOS
compuestos Condiciones de temperatures ensayadas

Ensayo 1 Isotérmica a 30 °C

Ensayo 2 Temperature programa inical a 30 °C , luego incremento de 10°C/min.

Ensayo 3 Temperature programa inical a 30 °C , luego incremento de 20°C/min.

Ensayo 4 Temperature programa inical a 30 °C , luego incremento de 30°C/min.

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Tiempo de retención (min)

COMPUESTO.
Ensayo 1 Ensayo 2 Ensayo 3 Ensayo 4

Benceno 2.9 min 2.59 min 2.18 min 2.5 min

Butanol 3.8 min 2.59 min 2.14 min 2.3 min

CARACTERÍSTICAS DE LA FASE ESTACIONARIA

Composición de las columnas

ZB-5ms Formado por un 95% del polímero dimetilposiloxano y 5% de Fenil-arileno.
Mejora la resolución de compuestos aromáticos.
ZB-5MSi Formado por un 95% del polímero dimetilposiloxano y 5% de Fenil.
Alta selectividad por su composición química.
 Dimensiones : 30 metros x 0.25 mm x 0.50 μm
 Muy polar
Caracteristicas de la  Fase de arileno muy estable
fase estacionaria  Limites de temperature de -60 hasta 325/350 °C
 Altamente inerte para mejorar la forma de los picos de
compuestos ácidos / básicos, drogas de abuso y pesticidas.
 Los niveles de sangrado bajo certificado por la MS brindan la
máxima sensibilidad.

CONCLUSIÓN
En esta práctica se logró conocer los componentes que conforman una cromatografía de gas y la función que posee
cada uno de sus componentes , el inyector, la columna y el detector son los más importantes en Cromatografía de
gases .
Al analizar a través de GC, se deben tener en cuenta dos factores: acción, el punto de ebullición de un compuesto y su
capacidad para interactuar con la fase estacionaria.

Es de vital importancia recalcar que la temperatura que se establecerá para trabajar en el análisis cromatográfico
toma un papel importantísimo al denotar que la misma influye en como interactuará el analito con las fases del
proceso, y como consecuencia afectarán el tiempo en que efluyan los componentes separados de la mezcla-analito.
Una variación establecida por condiciones fisicoquímicas, que permiten determinar si un compuesto por dicha
temperatura se mantendrá condensado en la fase estacionaria, o se evaporará y fluirá por la columna y va a eluir en
un tiempo menor al del resto de compuestos presentes.
Relacionándose siempre las distintas temperaturas de ebullición de esos compuestos presentes en la muestra
analizada.
Es recomendable, tomar en cuenta dichas temperaturas y establecer patrones de temperatura y probar varias veces
hasta lograr tiempo de elución totalmente razonables en el cromatograma.
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BIBLIOGRAFÍA
 Hively, RA y RE Hinton, J.Gas chromatoraphy. 6 (1968) 203-217.
 Mehran M. et al., HRC, 14 (1991) 745-750.
 Grob, RL (1995). La práctica moderna de la cromatografía de gas, (tercera edición): Teoría de la cromatografía
de gases (pp.100). Nueva York: John Wiley & Sons, Inc.
 Aucejo, A. M. (2010). Laboratorio de Análisis Instrumental. Valencia: Universitat de Valencia.