Bacteriología Veterinaria

Agentes físicos que afectan a las bacterias

En Medicina Veterinaria para manipular el medio ambiente y oponerse a la transmisión de las

bacterias e impedir su penetración dentro de los huéspedes, se hace uso de agentes físicos y
químicos.

Agentes físicos

El empleo de estos tiene como finalidad eliminar microorganismos de diferentes sustancias,

compuestos, instrumentos y alimentos.

a) El calor: la efectividad del calor como método de esterilización depende: de la temperatura y

tiempo de exposición. Las diferentes temperaturas influyen directamente sobre la capacidad de
sobrevivir o morir de las bacterias. El calor provoca desnaturalización de proteínas, al romperse
los enlaces de sus estructuras terciarias y cuaternarias, este fenómeno hace que las fibras
separadas se hagan menos solubles y los líquidos se tornen más viscosos culminando en un
proceso de coagulación (proteína no funcional), igualmente se presenta una fusión y
desorganización de las membranas y/o procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos.

a.1) Calor Seco:

El calor seco produce desecación de la célula, efectos tóxicos por niveles elevados de electrolitos,
procesos oxidativos y fusión de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor
desde los materiales a los microorganismos que están en contacto con éstos La acción destructiva
del calor sobre proteínas y lípidos requiere mayor temperatura cuando el material está seco o la
actividad de agua del medio es baja. Esto se debe a que las proteínas se estabilizan mediante
uniones puente de hidrógeno intramoleculares que son más difíciles de romper por el calor seco.

a.1.1) Incineración: La Estufa de esterilización es la más utilizada para esterilizar por calor seco.
Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposición que el autoclave. La temperatura varía
entre 120° y 180°C, requiriéndose distintos tiempos de exposición. A 140°C se necesitan por lo
menos 5 horas de exposición, mientras que a 160°C s e requieren al menos 2 horas de exposición.
Se utiliza para destruir material desechable contaminado. Las ventajas del calor seco: no es
corrosivo para metales e instrumentos, permite la esterilización de sustancias en polvo y no
acuosas, y de sustancias viscosas no volátiles, sirve para esterilizar material de vidrio. Y dentro de
las desventajas se requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido a la
baja penetración del calor.

a.1.2) Acción directa de la llama: Se lleva al rojo el material de metal como asas, lancetas,
agujas de disección.

a.2) Calor húmedo:

El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas. Estos efectos se deben

principalmente a dos razones:

a. El agua químicamente es muy reactiva y muchas de las reacciones bioquímicas eliminan

agua. Además, las estructuras secundarias y terciarias de las proteínas se estabilizan
mediante uniones puente de hidrógeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y
rotos por el agua a altas temperaturas.

MC Cristina Morán
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b. El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado que
el aire. Por lo que, los materiales húmedos conducen el calor mucho más rápidamente que
los materiales secos debido a la energía liberada durante la condensación.

a.2.1) Ebullición, usada comúnmente para reducir microorganismos del agua y alimentos, las
formas vegetativas se destruyen a temperaturas de 100°C durante 10 minutos, pero si se requiere
eliminar la mayoría de las formas esporuladas es necesario incrementar el tiempo a 30 minutos. La
adición de carbonato de sodio al 3% aumenta el poder germicida.

a.2.2) Autoclave, en ella se combina el calor húmedo, combinado con presión y tiempo. Es el
aparato más comúnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones que no
formen emulsiones con el agua y que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100°C. Una
temperatura de 121°C (una atmósfera de presión) con un tiempo de exposición mayor a 15 minutos
sirve para destruir organismos formadores de esporas. Esta consiste en un aparato de metal que
cierra herméticamente y contiene una doble cámara, en la cámara interna se colocan los
materiales ha esterilizar y en la externa agua. Asimismo el parao debe contar con manómetros y
válvulas que le permiten controlar la presión.

Consideraciones en el uso de la autoclave:

a) El aire y la condensación deben eliminarse para esterilización eficaz.

b) La temperatura requerida 121°C debe conservarse
c) Todos los mecanismos como manómetros y medidores de tiempo deben trabajar de
manera adecuada
d) Los paquetes se preparan de manera correcta (paquetes no muy grandes, ni con
envolturas impermeables, volúmenes de líquidos no muy grandes)
e) La eficiencia se puede medir fijando cinta sensible al caloren los paquetes, o utilizando
esporas de Bacillus stearothnermophilus
Ventajas del calor húmedo: Rápido calentamiento y penetración, destrucción de bacterias y
esporas en corto tiempo, no deja residuos tóxicos, hay un bajo deterioro del material expuesto,
económico
Desventajas: No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua, es corrosivo
sobre ciertos instrumentos metálicos

a.2.3) Tratamiento con vapor (tyndalización), s una esterilización fraccionada, consiste en

colocar los medios o soluciones en vapor fluyente por una hora durante tres días sucesivos. El
periodo entre sesión de flujo de vapor permite que las esporas germinen y por lo tanto se
destruyen sus células vegetativas en la siguiente exposición. La tindalización depende de que el
medio o solución tenga los nutrientes apropiados para favorecer la germinación de esporas en los
intervalos.

a.2.4) Pasteurización, en este proceso se emplea para eliminar gérmenes patógenos que
pudieran estar presentes en la leche, algunas bebidas y vinos. El método consiste en calientar la
leche hasta el punto que todos los patógenos potenciales sean destruidos, En el método lento de
pasteurización, la leche se conserva a 63°C por 30 minutos, y en el método rápido 72°C por 15
segundos, después la leche se enfría con rapidez a 4°C para no favorecer el desarrollo de
microorganismos remanentes. Algunos microorganismos saprófitos logran sobrevivir a estos
métodos causando la descomposición de la leche en caso de que está no se refrigere
adecuadamente, lo cual es una desventaja.

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b) Radiaciones

Su acción depende de: El tipo de radiación, el tiempo de exposición y cantidad de energía

absorbida. Sus efectos sobre las células son letales o mutagénicos, útiles para esterilizar,
desinfectar o para tratar pacientes con cáncer.

Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los ácidos nucleicos, estructuras
proteicas y lipídicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos. Tienen
gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolábiles (sensibles al calor) como
jeringas desechables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos. No se utilizan para
medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los componentes.

Las radiaciones de acuerdo a su longitud de onda se clasifican en:

• Longitud de onda larga (200 – 295 nm), representativa del grupo es la luz ultravioleta, esta
afectan a las moléculas de DNA de los microorganismos causa fenómenos de excitación o
activación de la moléculas que influye sobre los procesos de replicación formando dímeros
de pirimidinas adyacentes e induciendo errores en la duplicación y por lo tanto la pérdida
de la viabilidad de las células. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies

• Longitud de onda corta (0.6 – 100nm), también se les conoce como ionizantes, poseen alta
energía y amplio poder de penetración, se dividen en radiaciones por partículas (rayos
catódicos) y radiaciones electromagnéticas (rayos X, gama y cósmicos). Los más
empleados son los rayos X y gama, su energía se mide en rads.

c) Filtración: Se usan membranas filtrantes con poros de un tamaño determinado. El tamaño del
poro dependerá del uso al que se va a someter la muestra. Hay que tener en cuenta que los filtros
que se utilizan generalmente en los laboratorios no retienen virus ni micoplasmas, estos últimos
están en el límite de separación según el diámetro de poro que se utilice.

Existen tres tipos básicos de filtros:

a. Filtros profundos o de profundidad: consisten de un material fibroso o granular

prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros
la retención de las partículas se produce por una combinación de absorción y de retención
mecánica en la matriz. (Filtro Seitz o de asbesto)

b. Membranas filtrantes: tienen una estructura continua, y la retención se debe

principalmente al tamaño de la partícula. Partículas más pequeñas al tamaño del poro
quedan retenidas en la matriza del filtro debido a efectos electrostáticos.

c. Filtros de huella de nucleación (Nucleoporo): son películas muy delgadas de

policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiación y sustancias
químicas. Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la membrana
verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partícula con un tamaño
mayor al del poro. Estas membranas están constituidas por material polimérico de
diferentes compuestos , predominando entre ellos, el bicloruro de polivinilideno, los ésteres
de celulosa como el acetato de celulosa, tienen una estructura rígida uniforme de material
polimérico cuyos poros son homogéneos, en bacteriología los más utilizados tienen un
poro de 0.45 y 0.22 u

La filtración se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolábiles. Su usa para esterilizar
aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftálmicas, soluciones intravenosas, drogas
diagnósticas, radiofármacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibióticos.

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d) Congelación, es de uso común en la fabricación de antígenos en los cuales es importante que

no se alteren los determinantes antigénicos. Este método se basa en el hecho de que si se congela
una suspensión bacteriana, la cristalización del agua y sales dañan a la bacteria.

Por otro lado, en genética microbiana se hace uso de fraccionamiento subcelular es con el objetivo
de obtener fracciones puras o enriquecidas en un determinado componente celular, una fracción
de membrana, complejos multiproteicos. Todo proceso de fraccionamiento subcelular tiene dos
etapas: a) rotura de las células o tejidos para obtener un lisado celular (para tal fin se emplea la
sonicación) en el que la fracción deseada se encuentre en condiciones adecuadas para su
purificación. b) separación de la fracción deseada del resto de componentes de la célula o del
tejido mediante algún criterio como puede ser una diferencia de densidad (centrifugación en
gradientes o centrifugación diferencial), la presencia de algún antígeno (cromatografía de
inmunoafinidad, inmunoprecipitación), entre otros.

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