UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

TRABAJO DE INVESTIGACION

“Acción antagónica del extracto hidroetanólico de Eucalyptus globulus

sobre el crecimiento de Alternaria solani

ASIGNATURA:

FITOPATOLOGIA

PROFESOR ASESOR:

Dr. RODRIGUEZ LACHERRE, MANUEL ROBERTO

ALUMNOS:

ALIPIO RODRÍGUEZ, Anavely Leslie

ASMAT FERNANDEZ, Luis Fernando

BACILIO TACANGA, Denis Eliza

BENITES RUIZ, Stefany Geraldine

CARRANZA RODRIGUEZ, Nelly

CICLO: VII

2017
Acción antagónica del extracto hidroetanólico de Eucalyptus globulus sobre
el crecimiento de Alternaria solani

RESUMEN

El efecto inhibitorio del extracto hidroetanólico que fue preparado a partir de hojas
de Eucalyptus globulus “eucalipto”, ante Alternaria solani, fue evaluado para
comprobar si existe algún efecto inhibitorio por parte de la planta hacia el hongo.
Por estudios realizados el eucalipto es poseedor de grandes propiedades, así
como principios activos que se pueden aprovechar para el control de ciertas
enfermedades, siendo el extracto de este un controlador biológico que nos ayuda
a solucionar problemas en la actualidad en el campo de la agricultura. El diseño
experimental, consistió en dos niveles de concentración de extracto
hidroetanólico, con tres repeticiones, dispuestas, y su respectivo control. Se
evaluó el crecimiento del hongo con respecto a un testigo (control). Y se realizó el
análisis para determinar la eficacia del extracto de Eucalyptus globulus sobre el
control de Alternaria solani en condiciones de laboratorio.

Palabras clave: Eucalyptus globulus, Alternaria solani, control biológico,

patógeno, extracto.

I. INTRODUCCION

Las enfermedades de plantas, causadas por hongos, bacterias, virus, protozoos,

nematodos y plantas parásitas son uno de los mayores problemas relacionados al
bajo rendimiento de cultivos. Por estas razones, las estrategias dirigidas a
combatir y mitigar el efecto causado por el ataque de fitopatógenos es una
importante consideración en la producción de especies de importancia económica
(Kotan y col, 2013).

Los fungicidas son considerados componentes fundamentales para el control

efectivo de enfermedades de plantas causadas por hongos, y que pueden reducir
el rendimiento de producción de cultivos agrícolas hasta en un 20%. Durante los
últimos años, la investigación en fungicidas ha producido un amplio rango de
productos con nuevos mecanismos de acción, los cuales se espera tengan un
impacto significativo en el control de plagas. Estos nuevos productos incluyen
anilinopirimidinas, fenoxiquinolinas, oxazolidinedinonas, espiroquetalaminas,
estrobilurinas y activadores de resistencia sistémica adquirida (Gullino y col.,
2000).

Uno de los hongos fitopatógenos es Alternaria sp que fue descrito por Ness en
1817, en su obra Sistema Mycologicum considera a Alternaria como sinónimo de
Torula, que forma cadenas de conidios oscuros unicelulares. El género abarca
cientos de especies, es un hongo perteneciente a la familia dematiaceae, la
mayoría son saprofitas, encontrándose en el suelo, material en descomposición y
aire. Es un hongo de crecimiento rápido en diferentes medios de cultivo como
agar Sabouraud, papa dextrosa y harina de maíz; sin embargo, el agar papa
zanahoria es de elección para su identificación. (Ellis, M. 1971).

Macroscópicamente se observan colonias planas y algodonosas, de coloración

blanca grisácea inicialmente y posteriormente se observa su superficie de color
café o verde oliva oscuro, esto es como resultado del depósito de pigmento
dihidroxinaftaleno-melanina y para las observaciones microscópicas del cultivo
puede realizarse sin tinción, observándose hifas septadas, conidióforos septados
con pared lisa o rugosa, simples o simpodiales con varios poros de inserción y,
conidios únicos o en cadenas acropétalas con forma ovoide u obclavada.
(Rodríguez, 1977).

El hongo afecta hojas, tallos, flores y frutos de plantas anuales, pero también
afectan otros tipos de árboles como cítricos, mangos, marañón, papaya, etc. En
general las enfermedades causadas por Alternaria se conocen como tizones, los
síntomas involucran manchas concéntricas o tizones foliares, ahogamiento de
plántulas, pudriciones del cuello, así como pudriciones de los frutos y tubérculos
en algunas plantas. (Osawa, 1995).

El hongo se desarrolla dentro de un amplio rango de temperaturas, aunque su

desarrollo se retarda a bajas temperaturas, puede propagarse indirectamente en
los tejidos de su hospedero produciendo poco o nada de micelio sobre la
superficie de ellos, pero a menudo forma sobre la superficie del área podrida una
masa de micelio que es blanca al principio pero que después se oscurece. (Ellis,
1971).
El control de Alternaria se logra tratando las semillas con agua caliente o con
fungicidas, fertilización balanceada y todas las prácticas culturales que propicien
el desarrollo óptimo del cultivo. (Rodríguez, 1977). Otra forma de controlar a este
hongo es usando controladores biológicos como por ejemplo extractos realizados
a partir de plantas con principios activos capaces de inhibir al patógeno. Las
plantas superiores son un repositorio de fitoquímicos que sirven como principios
activos valiosos que han ayudado a combatir enfermedades a nivel mundial.
Estas incluyen entre sus mecanismos de defensa la fitotoxicidad, como estrategia
de control ante la germinación de esporas y el crecimiento micelial de hongos
fitopatógenos. (Satish y col., 2009; Khajista y Javaid, 2008).

El “eucalipto” es un árbol que cumple un importante papel económico, su nombre

científico es Eucalyptus globulus y pertenece a la familia de las Mirtáceas.
Dentro del género Eucalyptus, pueden encontrarse más de 300 especies. Este
árbol generalmente es utilizado para la obtención de algunos componentes
medicinales. (Varela, 2013). En la composición de esta planta encontramos a el
aceite esencial (1.0-3.5%), componente principal, el eucaliptol (45-75%).
Aparecen otros monoterpenos como mirteol, p-cimeno, alfa y beta-pineno,
limoneno, geraniol, canfeno, carvona, sesquiterpenos y aldehídos como mirtenal;
Flavonoides. Quercitrina, quercetina, hiperósido, rutósido, eucaliptrina.
;Triterpenos.;Ácido ursólico,Taninos (11%) Ácidos fenólicos derivados del ácido
benzoico,Ácidos gentísico, protocatéquico, gálico, Ácidos fenólicos derivados del
ácido cinámico. Ácido ferúlico,Floroglucinoles, Euglobales. (Valera, 2013)

Es un expectorante altamente activo, también se puede usar como aceite esencial

los cuales juegan un papel importante en los mecanismos de defensa del
hospedero contra fitopatógenos. Se ha demostrado que los aceites esenciales y
sus compuestos tienen un efecto fungicida (Wilson, 1997).

Son inocuos para el medio ambiente, para los consumidores y para el control de
enfermedades post cosecha. La necesidad de reducir el uso de químicos
sintéticos en la agricultura ha incrementado el interés por la posible aplicación de
aceites esenciales para el control de fitopatógenos. (García. 2008)

II. OBJETIVOS
 2.1 Objetivo general

 Determinar el efecto antagónico del extracto hidroetanólico de

Eucalyptus globulus sobre el crecimiento de Alternaria solani.

2.2 Objetivos específicos

 Describir y aplicar la metodología de aislamiento, cultivo e identificación

de hongos patógenos.
 Lograr elaborar el extracto a base de “eucalipto”.
 Obtener monocultivo de Alternaria solani.

III. MATERIAL Y MÉTODOS

3.1 Material

 Material biológico:

 Hojas de Eucalyptus globulus

 Hongo Alternaria solani

 Material para preparación de medio de cultivo:

 Agar agar  Azúcar
 Papa amarilla  Agua destilada

 Material y equipos de laboratorio

 Matraz  Mecheros
 Placas de Petri  Bagueta
 Asa bacteriológica  Estufa
 Probeta  Autoclave
 Vaso de
precipitación

 Otros:
 Cocina eléctrica  Gasa
 Frascos de boca  Hilo pabilo
ancha  Algodón
  Alcohol  Mascarilla
 Etanol  Guante
 Papel secante  Lejía

3.2 Métodos

Descripción del área experimental e identificación de la especie de

“eucalipto” (según Mostacero et al, 2009).

Las muestras se extrajeron a partir de cultivares de Solanum tuberosum

“papa” y Lycopersicum “tomate”, ubicados en el distrito de moche de la
provincia de Trujillo.Las hojas de Eucalyptus globulus “eucalipto” fueron
recolectadas de la flora existente en la Universidad Nacional de Trujillo. La
identificación taxonómica se hizo en el Herbarium Truxillense de la
Universidad Nacional de Trujillo (HUT).

La presente investigación se realizó en el laboratorio de Fitopatología SAM-

206, de la Universidad Nacional de Trujillo.

Observación e identificación de Alternaria solani

La obtención de los hongos fitopatógenos se hizo directamente de las

muestras de hojas de “papa” con síntomas visibles de la enfermedad. Para
la identificación y observación del patógeno se usó el método de la cinta
scoch, que consiste en colocar un porción de cinta entre los dedos índice y
pulgar; luego se adhiere la cinta sobre la parte afectada de la muestra
realizando una ligera presión. Se colocó una pequeña gota de agua en una
lámina portaobjetos, hasta donde se llevó la cinta scoch y se la extendió
sobre la lámina; obtenido este sistema se llevó hasta el microscopio para la
observación e identificación del hongo teniendo en cuenta las
características que este posee.

La identificación se hizo por observación macro y microscópica de sus

características morfológicas. Macroscópicamente, se observaron la
apariencia y colocación característica del género Alternaria. Para las
características microscópicas se realizaron observaciones de micelio e
hifas en microscopio, usando un aumento de 40x.
 Cultivo del hongo

El cultivo se hizo en Agar papa (20g de papa + 50 mL de agua, cocción

hasta presentar un aspecto espeso, filtrado y aforado hasta los 100 mL con
agua destilada,+ 2g de azúcar y 2g de agar-agar, autoclavado durante una
hora). Las placas Petri sembradas fueron incubadas a 25°C ± 2 por 8 días.

Obtención del extracto hidroetanólico

Para llevar a cabo este proceso se recolectaron hojas de Eucalyptus

globulus procedentes de ciudad de Trujillo y la provincia de Huamachuco.

Para la preparación de los extractos se realizó un lavado de las hojas con

agua de caño y enjuagadas con agua destilada. Posteriormente se
procedió a cortar las hojas en pequeñas porciones y se las coloco en
frascos de vidrio hasta aproximadamente ¾ del envase. Luego se agregó
300 ml de etanol al 75% a cada uno de los frascos. Los envases fueron
cubiertos con bolsa plástica de color negro, se rotulo y se dejó en reposo
hasta el siguiente día; pasado este tiempo se realizaron agitaciones cada
cierto tiempo durante el día por un periodo de 6 días.

Aplicación del extracto y/o confrontación con el patógeno.

Se preparó tres matraces con medio de cultivo (agar papa), aforados hasta
los 100 ml; se retiró cuidadosamente el extracto obtenido en las placas
Petri y se cuantifico para así determinar las concentraciones a realizar,
luego de ello se procedió a diluir 1, 3 y 4.5 g de extracto en los medios
preparados, retirando la cantidad en ml del medio con respecto a la
cantidad de extracto agregado. Cada solución preparada se dispenso en
placas Petri esperando unos instantes para la solidificación del medio y
posterior sembrado. Teniendo ya el medio listo procedió a confrontar el
hongo aislado con el extracto de Eucalyptus globulus “eucalipto”

IV. RESULTADOS
Cuadro N° 1. Crecimiento radial (cm) de Alternaria solani cuando es
expuesta a distintas concentraciones de extracto de hojas de
Eucalyptus globulus.

DIAS CONTROL [1 %] [4.5 %]

C1 C2 C3 R1 R2 R3 R1 R2 R3
3 1.3 1.4 1.35 0.6 0.3 0.8 0 0 0
4 1.9 2.1 2.0 0.9 0.65 1.1 0 0 0
5 2.8 3.4 3.2 1.3 0.95 1.35 0 0 0
6 3.5 4.55 3.9 1.65 1.25 1.65 0 0 0

Cuadro N° 2. Promedio de las repeticiones de los datos mostrados en

el cuadro N° 1
DIAS CONTROL [1 %] [4.5 %]
3 1.35 0.57 0
4 2.0 0.88 0
5 3.13 1.2 0
6 3.98 1.52 0
PROMEDIO 2.62 1.04 0

Cuadro N°3. Porcentaje de inhibición del extracto de las hojas de

Eucalypus globulus sobre Alternaria solani.
DIAS CONTROL [1 %] [4.5 %]
3 48.47 % 45.19 % 100 %
4 23.66 % 15.38 % 100 %
5 19.47 % 15.38 % 100 %
6 51.91 % 46.15 % 100 %
PROMEDIO 35.88 % 30.53 % 100 %
Grafico N° 1. Crecimiento radial (cm) de Alternaria solani expuesta a
diferentes concentraciones del extracto de hojas de Eucalyptus globulus

4.5

3.5

3
CRECIMIENTO RADIAL(Cm)

2.5

1.5

0.5

0
4 5 6 7

DIAS

CONTROL 1% 4.50%

V. DISCUSION

Alternaria solani es un hongo fitopatógeno que ataca principalmente a

cultivos de “papa” y “tomate”, que son cultivos de interés económico,
ocasionando lesiones foliares que se ven reflejados en la disminución de la
productividad, siendo este un problema en el sector agrícola. Este hongo
generalmente es controlado con sustancias químicas como fungicidas,
pero existen otras alternativas de control como los controladores biológicos
que ayudan a evitar el desarrollo del patógeno. El extracto de Eucaliptus
globulus demostró ser un buen controlador biológico que inhibió el
crecimiento del hongo gracias a que esta especie posee compuestos como
quinonas, lactonas, coumarinas, triterpenos y esteroides que son usados
como principios activos para el control del hongo.
La presencia de polifenoles, caracterizados en estudios antes realizados,
ha sido asociada a la actividad antioxidante relacionada con el efecto anti
fúngico y antimicrobiano del extracto en estudio (Amakura, 2009).
 Según los resultados obtenidos nos podemos dar cuenta que el
crecimiento del hongo en medio de cultivo libre de extracto en condiciones
de laboratorio es en promedio 2.62 cm hasta los 4 días de sembrado; por
otro lado tenemos que el crecimiento promedio del patógeno en un medio
envenenado a una concentración del 1% es 1.04 cm y al 4.5 % el
crecimiento es nulo, a las mismas condiciones del anterior, por lo que se
demuestra que el extracto obtenido logra controlar el desarrollo del hongo a
estas dichas condiciones. La grafica N°1 refleja el crecimiento del hongo a
condiciones normales y expuesto al medio envenenado, que logro controlar
o inhibir al patógeno, demostrando ser un excelente controlador biológico.

VI. CONCLUSIONES

 Se logró determinar el efecto antagónico del extracto hidroetanólico de

Eucalyptus globulus sobre el crecimiento de Alternaria solani,
demostrando que el extracto logra controlar al hongo.
 Se describió y aplicó la metodología de aislamiento, cultivo e
identificación de hongos patógenos.
 Se logró elaborar el extracto a base de “eucalipto”.
 Se logro obtener el monocultivo de Alternaria solani.
VII. AGRADECIMIENTOS

Este proyecto es el resultado del esfuerzo conjunto de todo

los que formamos el grupo de trabajo. Por esto agradecemos

a nuestro asesor Manuel Rodríguez Lacherre, a nuestros

profesores Julio Chico Ruiz y Marco Salazar por su guía y

enseñanza en el transcurso de la elaboración de nuestro

proyecto.

A nuestros padres quienes a lo largo de nuestra vida han

apoyado y motivado nuestra formación académica, creyeron

en nosotros en todo momento y no dudaron de nuestras

habilidades y finalmente un eterno agradecimiento a esta

prestigiosa universidad la cual abrió sus puertas a jóvenes

como nosotros, preparándonos para un futuro competitivo y

formándonos como personas de bien.

Sus alumnos
VIII. BIBLIOGRAFIA
 ELLIS M, B. (1971), Hyphomycetes Dematiaceous. Institución Micológica
de la Commonwealth. Kew, Surrey, INGLATERRA.
 RODRÍGUEZ R, (1977). Investigación sobre la etiología de la "mancha
seca" de las hojas del pepino Cultivado en invernadero. XOBA, Vol 2 núm.
1,41 - 44.
 Barkai-Golan R. (2008) Alternaria micotoxinas. Es: Barkai-Golan R, Najman
P (eds.). Micotoxinas en frutas y verduras. Academic Press, San Diego,
CA, EE.UU.,185-203.
 Andersen B, Sorensen JL, Nielsen KF, van den Ende BG, de Hoog S.
(2009) Un enfoque polifásico a la taxonomía de la infectoria Alternaria
especies de grupo. Hongos Genet Biol; 46: 642-656.
 Mostacero, J. Mejia, F. (2009). Fanerógamas del Perú. Editorial Concytec:
Perú.
IX. ANEXOS

FIGURA 1: Recolección de hojas de Eucalytus FIGURA 2: Hojas de Eucalyptus

globulus globulus de la Sierra

FIGURA 3: Hojas de Eucalyptus globulus FIGURA 4: Envoltura de los frascos de

de la Costa extracto etanolico.
FIGURA 5: Frascos con extracto etanolico FIGURA 6: Colación del extracto
de Eucalytus globulus etanolico.

FIGURA 6: Placas con extracto etanolico FIGURA 7: Observación de

de Eucalyptus globulus en proceso de secado. Alternaria solani

FIGURA 8: Prepacion de agar papa FIGURA 9: Agar papa

etanolico
FIGURA 10: Triturado extracto etanolico FIGURA 11: Dispensión del agar en la
placa Petri

FIGURA 12: Placa con concentración FIGURA 13: Placa con concentración
de1% de extracto de Eucalytus globulus de 1% de extracto

FIGURA 14: Placa con concentración de FIGURA 15:Placa testigo

1% de extracto
FIGURA 16: Placas con concentración de 1% de extracto de Eucalyptus globulus

FIGURA 17: Placa testigo FIGURA 18: Placa con

concentración 4.5% de extracto