[ COLUMNAS HPLC ]

Continúa el legado
de las columnas HPLC
Columnas HPLC

Creación de una cromatografía excepcional

La reputación de Waters se basa en la cromatografía, pero nosotros no

creamos cromatografía: ese es su papel. El pensamiento innovador que

surge de su laboratorio crea los análisis y los métodos cromatográficos

que sustentan su negocio. Los parámetros de su éxito se controlan a

través de los métodos y los resultados que obtiene y la columna de

HPLC que seleccione hoy tiene que respaldar su éxito en el futuro.

Los científicos eligen la gama completa de modernas columnas HPLC

de fase reversa e HILIC que ofrece Waters porque entienden que el

rendimiento y la innovación están vinculados y que su éxito depende

de ellas.

2
CORTECS

XBridge

XSelect

Atlantis

SunFire

Symmetry

XTerra

Waters Spherisorb

Nova-Pak

Resolve

Delta-Pak

µBondaPak/BondaPak

µPorasil/Porasil

3

Las columnas con partículas de núcleo sólido CORTECS® de 2,7 µm
maximizan la resolución y la capacidad de picos para todas las sepa-
raciones por LC y están optimizadas para incrementar el rendimiento
de los instrumentos HPLC. La innovadora tecnología de núcleo sólido
y la química enlazada que utilizan las columnas CORTECS le pueden
Reducción de la contrapresión
Las columnas CORTECS reducen la contrapresión de trabajo, lo que
le permite analizar métodos con instrumentos LC convencionales
sin comprometer la eficacia ni la resolución. Además, se pueden usar
columnas más largas para mejorar la resolución de los picos que
coeluyen en mezclas complejas de muestras.
Ventajas de las columnas CORTECS de 2,7 µm en cuanto a la eficacia
Mejor eficacia de su clase

ayudar al proporcionar:

■■ Reducción de la contrapresión de trabajo: menor

Eficacia (USP)
contrapresión sin sacrificar la eficacia
■■ Aumento de la sensibilidad: mejora de la relación señal-ruido CORTECS C18+, 2,7 μm

para las aplicaciones LC-MS Caudal 2,1 x 50 mm 0,17 0,35 0,52 0,69
C18 totalmente poroso, 2,5 μm
0,87
C18 de1,77
núcleo sólido
1,04
(mL/ 3,0 x 50 mm 0,35 0,71 1,06 1,41 2,12del competidor A, 2,6 μm
min) 4,6 x 50 mm 0,83 1,66 2,49 3,32 4,15 4,99

Simplificación de las transferencias de métodos:

C18 de núcleo sólido del competidor B, 2,7 μm
■■

compatibilidad con una amplia gama de sistemas Velocidad lineal (cm/min)

cromatográficos 2,1 x 50 mm 0,17 0,35 0,52 0,69 0,87 1,04

Caudal
(mL/min)
3,0 x 50 mm 0,35 0,71 1,06 1,41 1,77 2,12
4,6 x 50 mm 0,83 1,66 2,49 3,32 4,15 4,99

La selección de columnas CORTECS de 2,7 µm, tanto de fase reversa
como de fases HILIC, le aportan flexibilidad para separar rápidamente
una amplia gama de clases de compuestos. La mejora de la eficacia
de las columnas con núcleo sólido CORTECS de 2,7 µm produce picos
mejor definidos y estrechos si se comparan con los que generan las
columnas que utilizan substratos totalmente porosos; asimismo, le
permiten utilizar caudales más rápidos para poder incrementar la
velocidad de análisis de muestras.
O O
Si Si
O
O
O C18 de núcleo sólido del competidor B, 2,7 μm
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean
representativas de todas las aplicaciones.
Las columnas CORTECS de 2,7 µm muestran una eficacia excelente si se comparan con
las columnas con partículas de núcleo sólido y totalmente porosas de tamaño similar.
Condiciones experimentales: columnas: 2,1 x 50 mm; fase móvil: agua/acetonitrilo
(25/75, v/v); temperatura de la columna: 30 ˚C; detección: UV a 254 nm; volumen de
inyección: 0,5 µL; compuestos: acenafteno (200 µg/mL), octanofenona (100 µg/mL).
Ventajas de las columnas CORTECS de 2,7 µm en cuanto a la
contrapresión
CORTECS C18+, 2,7 μm
C18, totalmente poroso, 2,5 μm
C18 de núcleo sólido del competidor A, 2,6 μm
Presión de la columna (psi)

CORTECS C18+ C18 HILIC

Tipo de ligando C18 trifuncional C18 trifuncional Ninguno Un 25% menos contrapresión
que la columna de partículas
Densidad del ligando 2,4 µmol/m2 2,6 µmol/m2 N/A de núcleo sólido de 2,6 µm
de la competencia
Carga de carbono 5,7% 6,6% No enlazada Caudal
(mL/
2,1 x 50 mm
3,0 x 50 mm
0,17
0,35
0,35
0,71
0,52
1,06
0,69
1,41
0,87
1,77
1,04
2,12
min) 4,6 x 50 mm 0,83 1,66 2,49 3,32 4,15 4,99
Velocidad lineal (cm/min)
Tipo de recubrimiento
Patentado Patentado Ninguno
final 2,1 x 50 mm 0,17 0,35 0,52 0,69 0,87 1,04
Caudal
3,0 x 50 mm 0,35 0,71 1,06 1,41 1,77 2,12
Clasificación USP L1 L1 L3 (mL/min)
4,6 x 50 mm 0,83 1,66 2,49 3,32 4,15 4,99

Rango de pH 2–8 2–8 1–5 Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean
Límite de temp. a representativas de todas las aplicaciones.
45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C
pH bajo
Las columnas CORTECS de 2,7 µm consiguen reducir la contrapresión de trabajo en un
Límite de temp. a 25% sin sacrificar la eficacia. Condiciones experimentales: columnas: 2,1 x 50 mm;
45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C
pH alto
fase móvil: agua/acetonitrilo (25/75, v/v); temperatura de la columna: 30 ˚C;
Diámetro de poro 90 Å 90 Å 90 Å detección: UV a 254 nm; volumen de inyección: 0,5 µL; compuestos: acenafteno
(200 µg/mL), octanofenona (100 µg/mL).

4
Aumento de la sensibilidad
La tecnología de superficie cargada mejora la forma de los picos y la carga de compuestos al usar fases móviles con baja fuerza iónica, tales como
las preparadas con ácido fórmico. La carga superficial permanente de bajo nivel usada durante el proceso de enlace del C18+ mejora la relación señal-
ruido al no tener que utilizar aditivos ni reactivos de par iónico que, de otro modo, afectarían negativamente a las aplicaciones LC-MS.

Forma de pico excelente para el análisis de impurezas a concentraciones bajas

C18 de núcleo sólido de la competencia, 2,6 μm 1: SIR de 1 canal ES+ CORTECS C18+, 2,7 μm 1: SIR de 1 canal ES+
TIC (impureza adicionada al 0,1%) TIC (impureza adicionada al 0,1%)
Presiónmáx: 3250 psi Presiónmáx: 2750 psi
3,68e7 3,68e7
100

Relación S/N: 113 Aumento del 60% en Relación S/N: 180

%

la relación S/N

0
0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 min 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 min

(1) PDA, canal 1, 254 nm a 4,8 nm (1) PDA, canal 1, 254 nm a 4,8 nm
Rango: 8e-1 Rango: 1
4,0e-2

3,5e-2

3,0e-2 Reducción del 35% en

Imipramina la anchura del pico Imipramina
2,5e-2
UA

2,0e-2 Impureza adicionada al 0,1%

PW13,4%: 0,089 min
1,5e-2
Impureza adicionada al 0,1%
1,0e-2 PW13,4%: 0,132 min

5,0e-3

0,0
0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 min 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 min

Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean representativas de todas las aplicaciones.

El análisis por HPLC-UV/MS de la imipramina, un antidepresivo básico de baja fuerza iónica, revela la presencia de una impureza de baja concentración. El uso de la columna
CORTECS C18+ de 2,7 µm, diseñada para utilizarse con fases móviles ácidas de baja fuerza iónica, da como resultado picos más estrechos y una mejor relación señal-ruido.

Condiciones de LC
Columnas: 3,0 x 50 mm
Fase móvil A: ácido fórmico al 0,1% en agua
Fase móvil B: ácido fórmico al 0,1% en acetonitrilo
Gradiente: del 25 al 35% de B en 4,6 minutos
Caudal: 0,8 mL/min
Temp. de la columna: 30 SDgrC
Detección: UV a 254 nm y ESI+ MS
Volumen de inyección: 10 μL

Compuestos
Imipramina (0,5 mg/mL)
Impureza adicionada al 0,1% (0,5 μg/mL)

5
Transferencia de métodos sencilla
Se puede usar una selección específica de 3 fases para separar una amplia gama de clases
de compuestos. Las fases enlazadas de fase reversa CORTECS C18 y C18+ proporcionan a los
técnicos en cromatografía un perfil de retención equilibrado de ácidos, bases y compuestos
neutros, mientras que la fase CORTECS HILIC ortogonal no enlazada ofrece una retención
superior de analitos polares. Gracias a tamaños de partículas que son compatibles con las
plataformas HPLC, UPLC® y UHPLC, cualquier método desarrollado puede transferirse de
forma óptima y sencilla sin que surjan limitaciones por el tamaño de partícula, la configura-
ción de la columna o el fabricante del instrumento.

Transferencia de métodos USP de abacavir en función del tiempo y del

consumo de eluyente
Condiciones de LC
C18 totalmente poroso, 5 μm, 4,6 x 150 mm Fase móvil A: ácido trifluoroacético al 0,1% en agua
Caudal: 1,00 mL/min Fase móvil B: metanol al 85% en agua
Volumen de inyección: 8 μL 2 Método original Columna A: columna C18 totalmente porosa de 5 μm,
0,02
Sistema: Alliance® HPLC 4,6 x 150 mm
1 Columna B: columna CORTECS C18 de 2,7 μm, 4,6 x 75 mm
UA

0,01 3
4 Columna C: columna CORTECS C18 de 1 6 μm, 2,1 x 50 mm
0,00 5 Gradientes escalados geométricamente (es decir, los mismos volúmenes de
columna por paso de gradiente):
12,0 14,0 16,0 18,0 20,0 22,0 24,0 26,0 28,0 30,0 min Columna A: del 5 al 30% de B en 23,6 minutos y
del 30 al 90% de B en 14,8 minutos
Columna B: del 5 al 30% de B en 6,4 minutos y
CORTECS C18+, 2,7 μm, 4,6 x 75 mm
Caudal: 1,85 mL/min Transferencia a 2,7 µm del 30 al 90% de B en 4,0 minutos
Volumen de inyección: 4 μL Método 4 veces más rápido Columna C: del 5 al 30% de B en 2,5 minutos y
0,02
Sistema: Alliance® HPLC Dos veces menos eluyente del 30 al 90% de B en 1,6 minutos
Fase móvil A: ácido trifluoroacético al 0,1% en agua
UA

0,01
Fase móvil B: metanol al 85% en agua
0,00 Compuestos
1. Desciclopropilabacavir
3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 min 2. Abacavir
3. 1R,4R trans-abacavir
4. o-(4-cloro-2,5-diaminopirimidina)-abacavir
CORTECS C18+, 2,7 μm, 4,6 x 75 mm
5. o-t-butilo-abacavir
Caudal: 1,85 mL/min Compatible con sistemas
0,02 Volumen de inyección: 4 μL HPLC, UHPLC y UPLC
Sistema: ACQUITY UPLC® H-Class
UA

0,01

0,00

3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 min

CORTECS UPLC C18, 1,6 μm, 2,1 x 50 mm

Caudal: 0,65 mL/min Transferencia a 1,6 µm
0,02
Volumen de inyección: 0,6 μL Método 9 veces más rápido
Sistema: ACQUITY UPLC H-Class 12 veces menos eluyente
UA

0,01

0,00

1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 3,2 3,4 3,6 min

Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean representativas de todas las
aplicaciones.

Se pueden escalar y transferir métodos desarrollados con columnas totalmente porosas de 5 µm a columnas
más cortas de 2,7 µm. Para mejorar aún más la eficacia y la productividad, se pueden usar columnas UPLC con
tamaños de partícula inferiores a 2 µm, lo que permite una mayor flexibilidad y reproducibilidad de métodos al
realizar la transferencia entre laboratorios de una misma organización o a socios con vinculación contractual.

www.waters.com/cortecs
6
[ENC ABEZADO INTERIOR DEL FOLIO]

7
 Estabilidad frente al pH
Las columnas XBridge se han diseñado de manera específica para
contener las fases enlazadas cromatográficas más estables desde
el punto de vista químico que se encuentran disponibles, lo que le
Las columnas para HPLC XBridge ® están concebidas para un permitirá explorar todas las ventajas que aporta el poder utilizar
único propósito: maximizar la productividad. Tanto si su objetivo fases móviles con un amplio rango de pH (1-12). La estabilidad
es crear un método de control de calidad como desarrollar un química, especialmente para los valores extremos de pH, se
ensayo LC/MS de vanguardia, las columnas XBridge le pueden incorpora a las partículas durante el proceso de síntesis y no se
ayudar al proporcionar: puede reproducir mediante el proceso convencional de enlace a la
base de sílice. Ninguna otra columna puede igualar la estabilidad
química de una columna XBridge.
■■ Mejora de la estabilidad frente al pH: aumento de la vida
útil de la columna Prueba acelerada de estabilidad a pH alto de las columnas de la
competencia
■■ Mejora de la fiabilidad de la columna: análisis más
110
robustos
■■ Maximización de la eficacia de las partículas: forma y 90 XBridge C18

capacidad de picos inigualables XTerra® MS C18

% N5s inicial

Gemini™ C18
70
Luna® C18(2)
Con una selección de 10 fases enlazadas diferentes para YMC™ Pro C18

aplicaciones de uso general y específicas, que abarcan la 50

Zorbax® Extend C18

gama más amplia de tamaños de partículas que se encuentra Analito: Acenafteno

disponible, ninguna otra familia de columnas HPLC le 30

0 50 100 150 200 horas

proporciona las herramientas necesarias para los retos Horas con 50 mM de TEA, pH 10, 50 °C
O
Si
O
cromatográficos más exigentes. Tanto si se necesitan métodos O

Los cromatogramas, obtenidos a intervalos regulares durante el estudio de vida útil

HPLC robustos, una transferencia óptima a UPLC® o un escalado a pH alto,O demuestran que el 86% de la Oeficacia original de las columnas XBridge
Si
preparativo para el aislamiento de productos, se puede contar se mantiene
O
Si
O después de 300 horas a un pH
O
O de 10 y a una temperatura elevada, con

con la versatilidad de una columna XBridge. pocos cambios en la forma de los picos o en el tiempo de retención.
up
Gro
lar
CH
3
Po
O O
Si Si
Si O
O CH
O 3
O O

up
Gro
lar
CH
3
Po
O O O
Si Si Si Si
O O O O
CH
3
O O O

up
Gro
lar
CH
3
Po
O O
Si Si Si
O O

XBridge CH
3 O
C18 O
C8 Shield RP18 O
Fenilo HILIC
up
Gro
lar
CH
3
Po
O
Si
O
Si
Grupo polar integrado Fenilo-hexilo Partícula BEH
Tipo de ligando C18 trifuncional CH
C8 trifuncional O
3
O
monofuncional trifuncional no enlazada
Densidad del ligando* 3,1 µmol/m2 O
3,2 µmol/m2 3,3 µmol/m2 3,0 µmol/m2 N/A
Si
O
Carga de carbono* 18% O 13% 17% 15% No enlazada
Tipo de recubrimiento final Patentado Patentado TMS Patentado N/A
Clasificación USP L1 L7 L1 L11 L3
Rango de pH 1–12 1–12 2–11 1–12 1–9
Límite de temp. a pH bajo 80 °C 60 °C 50 °C 80 °C 45 °C
Límite de temp. a pH alto 60 °C 60 °C 45 °C 60 °C 45 °C
Diámetro de poro* 130 Å 130 Å 130 Å 130 Å 130 Å
Área superficial* 185 m2/g 185 m2/g 185 m2/g 185 m2/g 185 m2/g
2,5; 3,5; 5; 2,5; 3,5; 5; 2,5; 3,5; 5;
Tamaño de partícula 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm
10 µm 10 µm 10 µm

* Valor esperado o aproximado.

8
Fiabilidad de la columna Factores de asimetría USP de la familia XBridge

La mayoría de los costes derivados del desarrollo de un método

cromatográfico están asociados con el riguroso proceso de
3 pH 3 pH 7
evaluación y validación del método final. Entendemos que
Desipramina Nortriptilina

Factor de asimetría (Tf)

la revalidación del método no es una opción, de modo que Amitriptilina Amitriptilina
evaluamos meticulosamente cada lote de columnas y fases
2
enlazadas para garantizar las columnas más reproducibles que se
encuentran disponibles. Con una columna XBridge, puede estar
seguro de que el método que desarrolle hoy será reproducible
durante toda la vida útil del análisis. 1
C8 Fenilo Shield RP18 C18 Zorbax®
SB-C18

Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean

representativas de todas las aplicaciones.

Eficacia de las partículas La combinación de la excelente estabilidad tanto de los ligandos como de las
partículas, así como la elevada eficacia cromatográfica, convierte a las columnas
Las partículas híbridas con puentes de etileno (BEH) ofrecen XBridge en la elección ideal para los métodos a pH bajos e intermedios.

muchas ventajas con respecto a las partículas basadas en sílice

convencionales, incluida la capacidad para controlar la actividad
silanólica con gran precisión. Al controlar la actividad silanólica,
se controlan y reducen las interacciones silanólicas no deseadas
que aumentan la asimetría de los picos.

H9
CH
3
C4
Si
O
CH
O 3

2
ker NH H9
CH
3
Lin C4
O O O O
Si Si Si Si Si
O O O O O
CH
3
O O O O

O O O
Si Si Si
O O O
Amida Péptidos BEH C18, 130 Å O
Péptidos BEH C18, 300 Å O
Proteínas BEH C4, 300 Å Oligo BEH C18 O

up up up
Gro Gro Gro
lar
CH
3 lar
CH
lar 3
CH
3 Po
Po Po

Si Si Si
O O O
Amida C18 trifuncional C18 trifuncional CH
C4 monofuncional C18 trifuncional
3
CH
3
CH
3

7,5 µmol/m2 3,1 µmol/m2 O

3,1 µmol/m2 O
2,4 µmol/m2 3,1 µmol/m2 O
Si Si Si
O O
12% 18% O
O 12% O 8% 18% O

Ninguno Patentado Patentado Ninguno Patentado

- L1 L1 L26 L1
2–1 1–12 1–12 1–10 1–12
90 °C 80 °C 80 °C 80 °C 80 °C
90 °C 60 °C 60 °C 50 °C 60 °C
130 Å 130 Å 300 Å 300 Å 130 Å
185 m2/g 185 m2/g 90 m2/g 90 m2/g 185 m2/g

2,5; 3,5 µm 3,5; 5; 10 µm 3,5; 5; 10 µm 3,5 µm 2,5 µm

9
Transferencia de métodos con columnas de 2,5 μm
Todas las columnas para HPLC XBridge y XSelect® (que se describen en la siguiente página)
se ofrecen con los formatos eXtended Performance [XP] de 2,5 µm a fin de ayudarle a
transferir los métodos de los instrumentos HPLC a los UPLC. Las columnas XP de 2,5 µm
mejoran el rendimiento de los instrumentos HPLC actuales y permiten conseguir una efica-
cia de separación máxima mediante la tecnología ACQUITY UPLC con tamaños de partícula
inferiores a 2 µm.

Separaciones escalables

5 µm – 150 mm
Inyección: 5,0 µL
Caudal: 0,2 mL/min
0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 min

3,5 µm – 100 mm
Inyección: 3,3 µL
Caudal: 0,3 mL/min
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 min

2,5 µm – 75 mm
Inyección: 2,5 µL
Caudal: 0,5 mL/min
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 min

1,7 µm – 50 mm
Inyección: 1,7 µL
Caudal: 0,6 mL/min
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,1 min

Columnas de diferentes longitudes y tamaños de partículas se han utilizado para reducir satisfactoriamente los
tiempos de análisis y mantener la resolución.

Condiciones de LC
Sistema: ACQUITY UPLC con detector TUV
Columnas: XBridge C18, 5 μm, 2,1 x 150 mm
XBridge C18, 3,5 μm, 2,1 x 100 mm
XBridge C18, 2,5 μm, 2,1 x 75 mm
ACQUITY UPLC BEH C18, 1,7 μm, 2,1 x 50 mm
Fase móvil A: ácido fórmico al 0,1% en agua
Fase móvil B: ácido fórmico al 0,1% en acetonitrilo
Caudal: consultar el cromatograma anterior
Volumen de inyección: consultar el cromatograma anterior
Isocrática: 95% A:5% B
Diluyente de la muestra: acetonitrilo al 3% en agua con ácido fórmico al 0,1%
Conc. de la muestra: 25 μg/mL
Temp. de la columna: 38 °C
Detección: UV a 280 nm
Velocidad de adquisición: 40 pts/s
Constante de tiempo: 0,05

www.waters.com/xbridge
10
[ENC ABEZADO INTERIOR DEL FOLIO]

11
 Las columnas para HPLC XSelect están concebidas para los
científicos encargados de desarrollar métodos, que exigen la
selección más diversa de fases enlazadas para separar con
facilidad las coeluciones de analitos más dificultosas. Las
columnas XSelect son herramientas que están:
Los substratos o partículas base influyen de manera
■■ Diseñadas para la selectividad: mejoran la capacidad para fundamental en la selectividad del analito; el ligando enlazado
separar picos que eluyen muy cerca ejerce una influencia secundaria. Cada uno de ellos, cuando
■■ Concebidas para el aislamiento y la purificación: se usa por separado, no genera cambios de selectividad
proporcionan la mayor capacidad de carga de analito que se notorios; sin embargo, juntos, el substrato y el ligando crean
encuentra disponible las herramientas definitivas para mejorar la selectividad del
analito. Es por este motivo que la familia de columnas XSelect
■■ Ideales para el rápido desarrollo métodos: reducen el
contiene tanto la tecnología de partículas de sílice de alta
tiempo y los costes asociados al desarrollo de métodos
resistencia (HSS) como la de partículas híbridas de superficie
cargada (CSH™ ) con una optimización única de ligandos
enlazados. El resultado es una gran reproducibilidad y una alta
selectividad.

F F
F F F F

F O O F CN
O O O O O
Si Si Si F Si Si Si Si F Si
O O O O O O O O
O O O O O O O

CSH CSH
XSelect CSH C18
fenilo-hexilo fluorofenilo
HSS T3 HSS C18 HSS C18 SB HSS PFP HSS CN

C6 fenilo trifun- Propilfluorofenilo Pentafluorofenilo Cianopropilo

Tipo de ligando C18 trifuncional C18 trifuncional C18 trifuncional C18 trifuncional
cional trifuncional trifuncional monofuncional

Densidad del ligando* 2,3 µmol/m2 2,3 µmol/m2 2,3 µmol/m2 1,6 µmol/m2 3,2 µmol/m2 1,6 µmol/m2 3,2 µmol/m2 2,0 µmol/m2
Carga de carbono* 15% 14% 10% 11% 15% 8% 7% 5%
Tipo de recubrimiento
Patentado Patentado Ninguno Patentado Patentado Ninguno Ninguno Ninguno
final
Clasificación USP L1 L11 L43 L1 L1 L1 L43 L10
Rango de pH 1–11 1–11 1–8 2–8 1–8 2–8 2–8 2–8
Límite de temp. a
80 ˚C 80 ˚C 60 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C
pH bajo
Límite de temp. a
45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C
pH alto
Diámetro de poro* 130 Å 130 Å 130 Å 100 Å 100 Å 100 Å 100 Å 100 Å
Área superficial* 185 m /g2
185 m /g 2
185 m /g 2
230 m /g2
230 m /g 2
230 m /g 2
230 m /g 2
230 m2/g
2,5; 3,5; 5;
Tamaño de partícula 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm 2,5; 3,5; 5 µm
10 µm

* Valor esperado o aproximado.

12
Mejora de la selectividad
La selectividad y la capacidad de retención son las herramientas más poderosas que poseen
los desarrolladores de métodos para influir en el comportamiento cromatográfico. La
familia XSelect ofrece una variada gama de columnas C18 de fase reversa (por ejemplo, CSH
C18, HSS C18 y HSS C18 SB) para separaciones de fines generales, así como columnas que
proporcionan un incremento de la retención polar (T3) y mayores opciones de selectividad
(fenilo-hexilo, fluorofenilo y ciano) para el desarrollo de métodos.

Las columnas XSelect proporcionan diversas selectividades de analitos

5,6 Condiciones de LC
2 7

CSH C18
1 3 4 Sistema: ACQUITY UPLC con
5,6 detector PDA
CSH fenilo-hexilo Columnas: 2,1 x 50 mm
2
6
7 5 Fase móvil A: 10 mM de formiato de
1 3
4
CSH fluorofenilo de amonio, pH de 3,0
7

4 3
6
5 Fase móvil B: metanol
HSS CN
2 6 7
Caudal: 0,4 mL/min
1
4
3
5 Volumen de inyección: 1 μL
HSS PFP
2
7
Diluyente de la muestra: agua
1 5,6

HSS T3
3 4 Temp. de la columna: 30 °C
Gradiente: Tiempo
HSS C18
%A %B
(min)
0,00 70 30
4 3
HSS C18 SB 3,00 15 85
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 min 3,50 15 85
3,51 70 30
Diferencias de selectividad observadas para una mezcla de analitos básicos. Compuestos: [1] aminopirazina, 4,50 70 30
Detección: UV a 260 nm
[2] pindolol, [3] quinina, [4] labetalol, [5] verapamilo, [6] diltiazem, [7] amitriptilina.
Velocidad de adquisición: 20 pts/s
Respuesta del filtro: normal

Aislamiento y purificación
Las aplicaciones de alta capacidad de carga, como la purificación de compuestos, la
obtención de perfiles de impurezas y las pruebas de disolución, exigen que las columnas
tengan un excelente rendimiento. En el caso de estos tipos de aplicaciones, la carga de la
columna está limitada por su incapacidad para mantener una forma de picos simétrica. Esto
se pone de manifiesto por el excesivo ensanchamiento del pico del compuesto principal,
el cual, con frecuencia, oculta las impurezas traza que se tratan de eliminar durante la
purificación. Las columnas XSelect CSH proporcionan de forma sistemática picos estrechos
bajo condiciones de carga altas y otorgan al técnico en cromatografía la posibilidad de
separar productos de degradación o impurezas a nivel de trazas y, por tanto, permiten una
mayor capacidad de carga reduciendo el tiempo y el consumo de eluyente.
Condiciones de LC
Mantenimiento de la forma de los picos con una alta capacidad de carga Sistema: ACQUITY UPLC H-Class con
detector PDA para ACQUITY UPLC
0,08 Columnas: 2,1 x 50 mm
ACQUITY UPLC CSH C18 2,0% Concentraciones de imipramina
0,06
mantenidas constantes a 0,5 mg/mL Fase móvil A: agua
Imipramina

1,0% Amitriptilina
Fase móvil B: acetonitrilo
0,04
Fase móvil C: ácido fórmico al 2% en agua
UA

0,5%
0,02 0,1% Gradiente: Tiempo Flujo
0,00
(min) (mL/min) %A %B %C Curva
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 min
inicial 0,6 70 25 5 inicial
2,0 0,6 60 35 5 6
0,08 3,0 0,6 0 95 5 6
Kinetex® C18
0,06
3,1 0,6 70 25 5 6
5,0 0,6 70 25 5 6
Imipramina

0,04 2,0% Volumen de inyección: 5 μL

UA

1,0% Amitriptilina
0,02 0,5% Diluyente de la muestra: agua
0,1%
0,00
Conc. de la muestra: imipramina: 0.5 mg/mL; amitriptilina:
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 min
como se indica (% de la imipramina)
Temp. de la columna: 40 °C
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean representativas de todas las aplicaciones.
Detección: UV a 254 nm
La mejora de la capacidad de carga de las columnas XSelect permite la separación, identificación y cuantificación Eluyente de lavado: acetonitrilo/agua 50/50
de productos de degradación o impurezas que eluyen muy cerca. Eluyente de purga: acetonitrilo/agua 50/50

13
Desarrollo y transferencia de métodos
Al desarrollar métodos, los técnicos en cromatografía experimentados se dan cuenta
de que el desarrollo de cualquier método que utilice únicamente columnas selectivas
debe poder transferirse con facilidad entre un laboratorio y otro, independientemente
de la plataforma de LC usada. Las columnas XSelect se han diseñado para el
desarrollo de métodos y son completamente compatibles con todos los modos de
detección modernos.
Separaciones reproducibles y escalables
Condiciones de LC
XSelect CSH fluorofenilo, 5 µm 8 10 Sistema: ACQUITY UPLC con detector
2 6 PDA para ACQUITY UPLC
1 5
4 7 9
Columnas: 2,1 x 50 mm
3 Caudal: 0,5 mL/min
Fase móvil A: 15,4 mM de formiato de amonio, pH de 3,0
Fase móvil B: acetonitrilo
Gradiente: lineal del 5% al 90% de B en 5 minutos
Volumen de inyección: 5 μL
Diluyente de la muestra: agua
Temp. de la columna: 30 °C
Detección: UV a 254 nm
Velocidad de adquisición: 20 pts/s
Respuesta del filtro: normal

Compuestos
XSelect CSH fluorofenilo, 3,5 µm
1. Tiourea
2. Resorcinol
3. Metoprolol
4. 3-nitrofenol
5. Ácido 2-clorobenzoico
6. Amitriptilina
7. Dietilftalato
8. Fenoprofeno
9. Dipropilftalato
10. Ácido pirenosulfónico

ACQUITY UPLC CSH fluorofenilo, 1,7 µm

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 min

Reproducibilidad y escalabilidad de separaciones por gradiente con columnas de 2,1 x 50 mm que
contienen nueve lotes diferentes de CSH fluorofenilo que representan tres tamaños de partículas (1,7, 3,5
y 5 µm).

www.waters.com/xselect
14
[ENC ABEZADO INTERIOR DEL FOLIO]

15

Las columnas para HPLC Atlantis ® no solo ofrecen un rendimiento,
una versatilidad y una retención excepcionales para los
compuestos polares, sino además una retención equilibrada para
las mezclas complejas de analitos.
Larga vida útil de las columnas con
fases móviles de pH bajo
Las columnas Atlantis resisten la hidrólisis del ligando cuando se usan
fases móviles muy ácidas, lo que mantiene la eficacia del método, la
retención del compuesto y la selectividad crítica del analito.
20 horas de exposición a TFA al 0,5% y a una temperatura de 60 °C
90

Compatibilidad con fases móviles 80

totalmente acuosas 70

% de pérdida de retención para el metilparabeno

60
Para maximizar la retención de los compuestos polares con
métodos de fase reversa, es posible utilizar las columnas 50

HPLC de fase reversa Atlantis con tampones y fases móviles

40
muy acuosas sin correr el riesgo de que se produzca la
deshumectación de los poros ni el colapso hidrofóbico de la fase 30

estacionaria.
20

10

O 0
Si

™
O

18
us

ua
18
18

AQ

AQ
SP
dC
P
C
T3

C
r-R

Pl
-R

Aq
ire

K®

S-
®

™
is

is

S
ro

®
la

se

D
nF

D
nt

re
nt
PA
yd

ex
Po

O
lip

he
tla

tla
Su

il ®
en

k™
Ec
ll

i™

sp
A

A
ce
i™

om

ts

ac
rg

ro
ax

er
ap
rg

-P
en
ne

yd

In
rb
ne

C
Ph

H
Sy

Zo

es
do
Sy

YM
C
®

nc
ei
®

nt

YM
ex
is
ex

ie
ile
en
Sh

Sc

Atlantis
en

Ag

T3 dC18 HILIC Silica

om
om

L
G
en
en

Ph
Ph

Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean

Densidad del representativas de todas las aplicaciones.
1,6 µmol/g 1,6 µmol/g N/A
ligando*
Carga de carbono* 14% 12% N/A Durante esta prueba acelerada, las columnas se expusieron a unas condiciones de pH
bajo y alta temperatura para determinar la influencia de la pérdida del ligando a causa
Tipo de recu- de la hidrólisis. El enlace de la columna Atlantis T3 resiste la hidrólisis del ligando y
Patentado Patentado N/A
brimiento final mantiene la retención del analito bajo condiciones extremadamente adversas de la
Clasificación USP L1 L1 L3 fase móvil.
Rango de pH 2–8 3–7 1-5
Límite de temp. a
45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C
pH bajo
Límite de temp. a
45 ˚C 45 ˚C 45 ˚C
pH alto
Diámetro de poro* 100 Å 100 Å 100 Å
Área superficial* 330 m2/g 330 m2/g 330 m2/g
Tamaño de partícula 3; 5; 10 µm 3; 5; 10 µm 3; 5; 10 µm

* Valor esperado o aproximado.

16
Retención de compuestos polares
sin reactivos de par iónico
La eliminación de los reactivos de par iónico mejora los límites de
detección, así como la robustez y la reproducibilidad del método;
al mismo tiempo, reduce las labores de mantenimiento del
instrumento debidas a las condiciones adversas de la fase móvil.

Retención de compuestos polares

1 2 4
3

Atlantis T3

4
3,5
1
2

Agilent Zorbax® SB-AQ

4
1 5
2
3
Thermo Hypersil Gold AQ™

3,4
1

2
5
Phenomenex® Synergi™ Hydro-RP

1 2
3 5
4

Shiseido Capcell PAK® C18 AQ

0 1 2 3 4 5 6 7 8 min

Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean

representativas de todas las aplicaciones.

Separación de analitos muy polares con la columna Atlantis T3 y con columnas de la

competencia. Los científicos confían en la forma de picos y en la retención inigualables
que solo pueden ofrecer las columnas Atlantis.

Condiciones de LC
Columna: 4,6 x 150 mm
Fase móvil: 10 mM de formiato de amonio, pH de 3,0
Caudal: 1,3 mL/min para 3 µm
Volumen de inyección: 2,0 µL
Temp. de la columna: 30 °C
Detección: 254 nm
Velocidad de adquisición: 10 pts/s
Sistema: Alliance 2695 con detector de absorbancia
de doble longitud de onda 2487
Compuestos
1. Tiourea
2. 5-fluorocistina
3. Adenina
4. Guanosina-5'-monofosfato
5. Timina

www.waters.com/atlantis
17
 Excelente estabilidad a pH bajos
Con fases móviles de pH bajo, las columnas SunFire tienen una
vida útil que supera a la de muchas marcas de columnas para
HPLC basadas en sílice.

Las columnas SunFire™ se han convertido en el estándar de

referencia de las columnas para HPLC de sílice enlazada a C18
y C 8 más modernas. Gracias a varios años de investigación y
desarrollo de productos, las columnas SunFire son el resultado
de lo mejor de los conocimientos técnicos en cuanto a
partículas y enlaces; asimismo, ofrecen un nivel de rendimiento
cromatográfico líder en el sector.
Alta eficacia
Se precisa una combinación sinérgica de síntesis de partículas,
tecnología de relleno e ingeniería de hardware para lograr
una eficacia alta. Las columnas SunFire Intelligent Speed™
(IS™ ) y Optimum Bed Density (OBD™ ) se han desarrollado
específicamente a partir de estos conocimientos.

Formas de picos excelentes

O
O
Si
O
O
Si
CH 3
Durante años, las columnas SunFire han proporcionado picos
CH 3

simétricos para mejorar la resolución de los compuestos ácidos,

neutros y básicos a rangos de pH bajos y moderados (2–8).
SunFire C8 C18 Sílice
Comparación entre las formas de picos de las columnas SunFire
Densidad del
3,5 µmol/g 3,5 µmol/g N/A 2
ligando* 1

3
Carga de carbono* 12% 16% N/A
4 T USP – 1,26
SunFire C18
Tipo de recu- 4,6 x 150 mm, 5 µm
Patentado Patentado N/A 5 6
brimiento final
Clasificación USP L7 L1 L3
Rango de pH 2–8 2–8 2–8 T USP – 1,35 Phenomenex® Luna® C18 (2)
4,6 x 150 mm, 5 µm
Límite de temp. a
40 ˚C 50 ˚C 55 ˚C
pH bajo
Límite de temp. a T USP – 1,79 ACT® Ace® C18
40 ˚C 40 ˚C 45 ˚C
pH alto 4,6 x 150 mm, 5 µm

Diámetro de poro* 100 Å 100 Å 100 Å 0 5 10 15 20 25 30 35 40 min

Área superficial* 340 m /g 2

340 m /g2
340 m2/g
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean
2,5; 3,5; 5;
Tamaño de partícula 2,5; 3,5; 10 µm 2,5; 3,5; 10 µm representativas de todas las aplicaciones.
10 µm

Separación isocrática
* Valor esperado o aproximado. Fase móvil A: 20 mM de fosfato de dipotasio al 35%/
20 mM de fosfato monopotásico con un pH de 7,0
Fase móvil B: metanol al 65%
Longitud de onda: 254 nm
Caudal: 1,0 mL/min
Vol. de inyección: 14 µL
Temp. de la columna: 23 ˚C
Sistema: Alliance 2695 con detector de absorbancia
de doble longitud de onda 2487
Compuestos
1. Uracilo
2. Propranolol
3. Butilparabeno
4. Naftaleno

18
 Reproducibilidad entre lotes
Waters se compromete con el mantenimiento de las
especificaciones más estrictas en el sector de la HPLC. Los
procesos de fabricación y los procedimientos de empaquetado
de columnas controlados le aseguran que recibirá la mejor y
más reproducible columna HPLC que se encuentra disponible.

Reproducibilidad entre lotes de las columnas SunFire

Lote 112 (2005)

Lote 118 (2007)

Lote 130 (2007)

Lote 134 (2008)

0 5 10 15 20 25 30 35 40 min

Esta excelente reproducibilidad es consecuencia de nuestro compromiso de mantener

las especificaciones más estrictas en el sector de las columnas HPLC. Las columnas
SunFire parten de materias primas de alta pureza y se producen mediante procesos de
fabricación y procedimientos de empaquetado de columnas controlados que ofrecen
a los científicos actuales las mejores y más reproducibles columnas para HPLC que se
encuentran disponibles.

www.waters.com/sunfire
19
 Las columnas Symmetry® se fabrican con
sílice de alta pureza y mediante procesos de
fabricación controlados de forma estricta
para garantizar que recibirá una columna
que supere los estándares establecidos
para el rendimiento de las columnas HPLC.
Ninguna otra marca de columnas para LC
basadas en sílice puede igualar la reproduc-
ibilidad entre columnas y entre lotes de la
familia Symmetry. Las columnas Symmetry
están disponibles en formatos de columna,
de cartucho y de precolumna:

■■ Columnas Symmetry C18 y C 8:

ofrecen la máxima reproducibilidad
■■ Columnas SymmetryShield™ RP18 y RP8:
ofrecen una forma de picos excelente
■■ Columnas Symmetry300™ C18 y C4: ofrecen recuperaciones
elevadas de péptidos y proteínas

up up
Gro Gro
lar 3 lar
CH
3
CH Po Po
CH 3 CH 3 CH 3
Si Si Si Si CH 3
O O O O Si Si
3 O O
CH 3 CH 3
CH
3
CH CH 3 CH 3

Symmetry Symmetry SymmetryShield SymmetryShield Symmetry300 Symmetry300

Symmetry C18 C8 RP18 RP18 C18 C4

Tamaño de partícula 3,5; 5µm 3,5; 5 µm 3,5 µm 5 µm 3,5 µm 5 µm

Forma de las partículas Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica
Tamaño de poro 100 Å 100 Å 100 Å 100 Å 300 Å 300 Å
Carga de carbono 12% 12% 15% 17% 8,5% 2,8%

Recubrimiento final Si Si Si Si Si Si

Columnas Symmetry para la máxima Reproducibilidad entre lotes de las columnas Symmetry

reproducibilidad 1 2

Puede confiar en las columnas para HPLC Symmetry si desea que

Lote 136 (1998)
el rendimiento sea robusto y reproducible. Los estrictos intervalos Lote 142 (1998)

de las especificaciones de las columnas minimizan la variación Lote 149 (1999)

y le ofrecen la seguridad de que, el día de mañana, podrá seguir Lote 151 (2000)

utilizando los métodos que usa hoy en día. Lote 156 (2001)

0,0 1,50 3,0 4,5 6,00 7,5 9,0 10,5 12,0 13,5 15,0 min

Reproducibilidad sin igual un año tras otro.

Condiciones de LC Volumen de inyección: 5,0 µL
Columna: Symmetry C18, 5 µm, Temperatura: 30 °C
4,6 x 150 mm Detección: UV a 233 nm

Fase móvil A: agua
Fase móvil B: acetonitrilo RSD para tiempos de retención
Fase móvil C: pH de 3,75; 100 mM de 1. Terbinafina HCI 0,7%
formiato de amonio en agua 2. Ibuprofeno 0,8%
Caudal: 1,4 mL/min 3. Lovastatina 0,6%
Isocrática: 30% A; 60% B; 10% C 4. Simvastatina 0,7%

20
 Columnas Symmetry para formas de
picos excelentes
Las columnas SymmetryShield incorporan la tecnología de grupos
polares integrados patentada por Waters; dicha tecnología protege los
silanoles residuales de la sílice de los analitos muy básicos y mejora la
forma general de los picos. Además, al colocar el grupo polar integrado
cerca de la superficie de sílice, la actividad de los silanoles superficiales
se reduce aún más. De este modo, se confiere una selectividad y una
retención diferentes de las del ligando Symmetry C18.

Las columnas SymmetryShield ofrecen una selectividad única

1 2
4
SymmetryShield RP18

3
Factor de asimetría USP = 1,2
UA

5
6

0 5 10 15 20 25 30 min

1
2
3
Symmetry C18
4 Factor de asimetría USP = 1,9
UA

7 6

0 5 10 15 20 25 30 min

La tecnología de grupos polares integrados mejora la selectividad y las formas

de los picos cromatográficos.

Condiciones de LC
Columna: SymmetryShield RP18, 5 µm, 3,9 x 150 mm
Symmetry C18, 5 µm, 3,9 x 150 mm
Fase móvil: metanol al 65%; 20 mM de
fosfato monopotásico al 35%/
fosfato de dipotasio con un pH de 7
Caudal: 1,0 mL/min
Detección: UV a 254 nm
Temp. de la columna: 23 °C

Compuestos
1. Uracilo
2. Propranolol
3. Butilparabeno
4. Dipropilftalato
5. Naftaleno
6. Amitriptilina
7. Acenafteno

www.waters.com/symmetry
21

Las columnas XTerra® MS, Shield RP y Phenyl combinan las mejores propie-
dades de la sílice y de las fases enlazadas poliméricas con la tecnología
patentada de partículas híbridas, que reemplaza uno de cada tres silanoles
por un grupo metilo durante la síntesis de partículas. Solo se puede con-
seguir dicho reemplazo durante la síntesis de partículas inicial; asimismo,
la inclusión de este grupo metilo es una parte integral de la estructura de
las partículas base. El resultado es un partícula mecánicamente fuerte que
puede usarse para separaciones a pH altos; como consecuencia, se mejora
la carga y las formas de picos de los compuestos básicos.
ción de formas de picos deficientes para las bases y un rango de pH
limitado. Una de las formas con la que los técnicos en cromatografía
han tratado de superar estas limitaciones ha sido la utilización de fases
estacionarias basadas en polímeros. Los polímeros, no obstante, no
han gozado de la aceptación de la sílice debido a su poca eficacia, a su
baja resistencia mecánica y a un orden de elución de picos impredecible
cuando se transfieren métodos de columnas poliméricas a columnas
basadas en sílice.
La tecnología de partículas híbridas supera estas limitaciones; no solo
combina los mejores atributos de ambos materiales, sino que subsana
las debilidades de cada material. El resultado es un material robusto
con una resistencia mecánica elevada, una eficacia alta, una forma de
picos excelente para las bases y un escalado sencillo de la cromato-
grafía analítica a la preparativa.

La eficacia de la sílice con la estabilidad de Comparación entre el proceso de fabricación del relleno híbrido de
los polímeros primera generación (XTerra) y el de la sílice

Proceso de fabricación tradicional de la sílice

La gran mayoría de las separaciones HPLC de fase reversa tienen lugar Partículas de sílice enlazadas y con recubrimiento final
en fases estacionarias basadas en sílice. A la sílice se le ha atribuido
durante mucho tiempo una eficacia elevada y una gran resistencia Si
O
Si
OH
O
Si

Si OH Si
O O O

mecánica. Sin embargo, la sílice tiene como inconvenientes la obten-

O
Si Si
Si Si
O O
O HO
Si Si
OH
O HO O
OH O Si
O HO
Si Si Si
OH O
O
HO O
Si Si Si
Si O O
OH
HO HO O
Si
Si Si OH Si O
O O O
Si O Si
Si O O O
Si Si Si
O O Si
O O
O Si O
Si OH OH Si
O Si
Si
Si
O
O OH OH
O
Si
O
O
Si n La cobertura superficial
Si Si Si
O O O O Si
O
rou
p
rou
p
CH
Si
Si
Si más baja
rG G
CH 3 Po
la
CH 3 Pola
r
O CH
2 CH
3

Si
Si Si O n Forma de picos
O O
CH 3 CH 3 CH
3

deficiente
n Rango de pH entre 2 y 8

XTerra MS C18 RP18 RP8 Fenilo

Partícula de sílice Politoxisilano Tetraetoxisilano

no enlazada (PEOS) (TEOS)
2,5; 3,5; 5; 3,5; 5; 3,5; 5;
Tamaño de partícula 3,5; 5 µm
10 µm 10 µm 10 µm Proceso de fabricación del relleno híbrido de primera
Forma de las generación (XTerra)
Esférica Esférica Esférica Esférica Mucho más que una modificación de la superficie
partículas
Partículas XTerra enlazadas y con recubrimiento final
Tamaño de poro 125 Å 125 Å 125 Å 125 Å
Si
H 3C

Carga de carbono 15,5% 15,0% 13,5% 12,0%

OH Si
Si
O
O
CH3
Si OH Si
O O O
O
Si Si
Si Si
O O
H 3C
Recubrimiento final Sí Sí Sí Sí
O
Si OH Si
HO O
O O Si
H 3C CH3 CH3
Si
O
Si
HO
Si n  La cobertura homogénea
O OH O
H 3C
Si Si
O
Si
más alta
O O
Si OH HO
HO O

* Valor esperado o aproximado. H3C Si CH3

O
Si
O
Si
O
Si O
Si O
Si
n 1/3 menos de silanoles
Si
O H 3C O O
Si Si Si
O O Si
O O
Si CH3 OH Si
O
O
Si
O
Si
n Excelente forma de picos
O
CH3 O Si
Si
O OH Si Si
CH3
O O
H 3C
O
Si
O
Si
O
Si
O Si CH3
n Rango de pH entre 1 y 12
O
Si Si
Si

H 3C

Partícula Metilpolietoxisilano Tetraetoxisilano Metiltrietoxisilano

XTerra (MPEOS) (TEOS) (MTEOS)
no enlazada

22
 Separaciones con la eficacia típica de la sílice trabajando a pH
típicos de rellenos poliméricos

XTerra RP18: 4,6 x 150 mm

pH 10,7

3 0,5 3
1,2

0,4
1
0,8 0,3
UA

UA
0,2
0,4 2 6
2 6
5 0,1
4
4
5
0 0

10 20 min 10 20 min

Columna polimérica: 4,1 x 150 mm

pH 10,7

0,5 3

0,4
1

0,3
UA

0,2

2 6
0,1
4
5
0

20 min 10 20 min

Condiciones de LC
Fase móvil A: 20 mM de NH4OH, pH de 10,7
Fase móvil B: acetonitrilo
Caudal: 3 mL/min
Gradiente: Tiempo Perfil
(min) %A %B
0,00 70 30
25,00 40 60
28,00 40 60
Volumen de inyección: 5 µL
Temperatura: ambiente
Detección: UV a 220 nm
Instrumento: detector de matriz de fotodiodos
2690 y 996 de Waters

Compuestos
1. Codeína
2. Yohimbina
3. Tebaína
4. Cocaína
5. Reserpina
6. Metadona

www.waters.com/xterra
23
COLUMNAS WATERS SPHERISORB
Las columnas Waters Spherisorb ® son una de las columnas HPLC más citadas en la literatura científica. Existen más de
2000 resúmenes analíticos publicados que mencionan las columnas Waters Spherisorb, lo que brinda un intervalo extraordinario de
aplicaciones y métodos validados que le pueden servir de ayuda durante el proceso de desarrollo de métodos.

Las columnas Waters Spherisorb se fabrican en un rango amplio de tamaños de partícula (3, 5 y 10 µm) y de fases enlazadas para satisfacer
cualquier necesidad cromatográfica. Además, las fases enlazadas de calidad superior de las columnas Waters Spherisorb ofrecen muchas
selectividades de separación diferentes y únicas. Las columnas analíticas Waters Spherisorb se suministran con conectores de columna de
estilo Parker, que constituyen el estándar del sector. Los cartuchos de columna Waters Spherisorb precisan conectores de cartucho de estilo
Parker reutilizables.

Spherisorb www.waters.com/spherisorb

Tipo de ligando ODS2 (C18) ODS1 (C18) ODSB (C18) C8 C6 C1 NH2 (amino)
Tamaño de partícula 3; 5; 10 µm 3; 5; 10 µm 5 μm 3; 5; 10 µm 3; 5; 10 µm 3; 5; 10 µm 3; 5; 10 µm
Área superficial 220 m /g 2
220 m /g2
220 m /g 2
220 m /g 2
220 m /g 2
220 m /g2
220 m2 /g
Forma de las partículas Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica
Tamaño de poro 80 Å 80 Å 80 Å 80 Å 80 Å 80 Å 80 Å
Carga de carbono 11,5% 6,2% 11,5% 7,75% 4,7% 2,15% 1,9%
Cobertura del
2,98 µmol/m2 1,49 µmol/m2 2,98 µmol/m2 3,12 µmol/m2 3,36 µmol/m2 2,97 µmol/m2 2,64 µmol/m2
ligando
Recubrimiento final Sí No Sí Sí Sí No No

Tipo de ligando Fenilo CN (nitrilo) OD/CN W (sílice) SCX SAX

Tamaño de partícula 3; 5; 10 µm 3; 5; 10 µm 5 μm 3; 5; 10 µm 5; 10 µm 5; 10 µm
Área superficial 220 m /g 2
220 m /g2
220 m /g 2
220 m /g 2
220 m /g 2
220 m2/g
Forma de las
Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica
partículas
Tamaño de poro 80 Å 80 Å 80 Å 80 Å 80 Å 80 Å
Carga de carbono 2,5% 3,1% 5% N/A 4% 4%
Cobertura del
2,72 µmol/m2 3,29 µmol/m2 1,15 µmol/m2 N/A – –
ligando
Recubrimiento final No No Sí N/A No No

24
COLUMNAS NOVA-PAK
Las fases enlazadas de las columnas Nova-Pak® cuentan con tamaños de partículas de 4 y 6 µm que ofrecen una resolución elevada, así como una
cromatografía más rápida y eficaz. El tamaño de partícula más pequeño, en combinación con unas longitudes más cortas de columnas, se puede
usar para reducir el consumo de eluyente, así como para mantener la resolución en el caso de las mezclas complejas. Las columnas analíticas que
tienen un relleno con un tamaño de partícula de 4 µm se encuentran disponibles como columnas de acero con longitudes de 75, 150 y 300 mm.
Las columnas de cartucho de acero con conectores reutilizables se encuentran disponibles en longitudes de 50, 100, 150 y 250 mm. Las columnas
semipreparativas Prep Nova-Pak HR se empaquetan con rellenos que tienen un tamaño de partícula de 6 µm y proporcionan un intervalo inigualable
de posibilidades de separación. El relleno de alta eficacia de las columnas Prep Nova-Pak HR ofrece separaciones más rápidas utilizando menos
eluyente, así como la ventaja adicional que aportan unas fracciones más concentradas; por tanto, reduce el coste de la cromatografía preparativa.
Todas las columnas Nova-Pak se empaquetan utilizando rigurosos procedimientos de control de calidad que se llevan a cabo en nuestras fábricas de
acuerdo con las buenas prácticas de fabricación actuales (cGMP); de esta forma, se garantiza la reproducibilidad entre lotes.

Nova-Pak www.waters.com/nova-pak

Química C18 C8 Fenilo CN Sílice Prep HR C18 Prep HR Sílice

Tamaño de partícula 4 µm 4 µm 4 µm 4 µm 4 µm 6 µm 6 µm
Forma de las partículas Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica Esférica
Tamaño de poro 60 Å 60 Å 60 Å 60 Å 60 Å 60 Å 60 Å
Carga de carbono 7% 4% 5% 2% N/A 7% N/A
Recubrimiento final Sí Sí Sí Sí N/A Sí N/A

25
COLUMNAS RESOLVE
El relleno Resolve™ sin recubrimiento final es considerablemente diferente de otros materiales de relleno de Waters. El cambio en el
comportamiento cromatográfico se detecta, por lo general, en compuestos polares que normalmente se retienen más. Se pueden obtener
cromatogramas de compuestos básicos mediante modificadores de fase móvil, como es el caso de reactivos de par iónico que reducen la
asimetría excesiva de picos. Las columnas Resolve C18 y de sílice están disponibles para aplicaciones que precisan una resolución elevada.

Resolve www.waters.com/resolve

Tipo de ligando Sílice C18 C8 CN

Tamaño de partícula 5; 10 µm 5; 10 µm 10 µm 10 µm
Forma de las partículas Esférica Esférica Esférica Esférica
Tamaño de poro 90 Å 90 Å 90 Å 90 Å
Carga de carbono 10% 10% 5% 3%
Recubrimiento final N/A No No No

COLUMNAS DELTA-PAK
Las columnas Delta-Pak™ son ideales para la separación y el aislamiento de péptidos, proteínas y productos naturales; cuentan con dos
tamaños de poro diferentes que están optimizados para las separaciones de moléculas grandes. Las columnas Delta-Pak son conocidas por el
escalado sistemático y predecible entre formatos de columna, lo que ofrece a los científicos encargados de la purificación la posibilidad de
aislar los compuestos diana con cantidades que van desde varios miligramos a varios gramos. La sílice enlazada de las columnas Delta-Pak,
que es muy estable, dispone de tamaños de partícula muy eficaces de 5 y 15 μm.

Delta-Pak www.waters.com/delta-pak

Tipo de ligando C18 C18 C4 C4

Tamaño de partícula 5; 15 µm 5; 15 µm 5; 15 µm 5; 15 µm
Forma de las partículas Esférica Esférica Esférica Esférica
Tamaño de poro 100 Å 300 Å 100 Å 300 Å
Carga de carbono 17% 7% 7% 3%
Recubrimiento final Sí Sí Sí Sí

26
Tecnología de partículas irregulares
Los primeros materiales de relleno de HPLC constaban de partículas con formas irregulares y no esféricas. Por lo general, estas columnas
reducen la estabilidad mecánica y hacen que disminuya la eficacia en comparación con las columnas empaquetadas con partículas esféricas.
Sin embargo, incluso con estas limitaciones, existen muchos métodos que precisan el uso de dichas fases enlazadas. Como principal fabri-
cante de sorbentes y fases enlazadas, Waters ha mostrado durante más de 40 años que sus columnas ofrecen un rendimiento sistemático y
fiable; por este motivo, continuará respaldando a estas marcas en el futuro.

Columnas µBONDAPAK/BONDAPAK
Si su método es adecuado para una columna μBondapak®, solo existe una columna que contenga el material de relleno μBondapak C18. Muchas
empresas afirman contar con una selectividad "similar a μBondapak", pero ninguna ha superado las rigurosas pruebas de control de calidad a las que
se ven sometidos los lotes de Waters. Los materiales de relleno μBondapak o BondaPak ® han demostrado su reproducibilidad un año tras otro desde
1973, lo que ha favorecido que las columnas μBondapak sean la marca de columnas HPLC que con más frecuencia se
ha citado.

µBondapak/ www.waters.com/bondapak
Bondapak

Tipo de ligando C18 Fenilo CN NH2

Tamaño de partícula 10 μm 10 μm 10 μm 10 μm
Forma de las partículas Irregular Irregular Irregular Irregular
Tamaño de poro 125 Å 125 Å 125 Å 125 Å
Carga de carbono 10% 8% 6% 3,5%
Recubrimiento final Sí Sí Sí No

Columnas µPORASIL/PORASIL
Las partículas μPorasil™ y Porasil™ fueron de los primeros materiales de relleno totalmente porosos que se pusieron a la venta para las
separaciones por LC. Por contraste con la capacidad de separación de fase reversa de μBondapak C18, el material no enlazado basado en sílice
de las columnas μPorasil se creó para proporcionar separaciones de fase normal para una amplia gama de tipos de muestras.

µPorasil/Porasil www.waters.com/porasil

Tipo de ligando Sílice

Tamaño de partícula 10, 15-20 μm
Forma de las partículas Irregular
Tamaño de poro 125 Å
Carga de carbono N/A
Recubrimiento final N/A

27
¿Cómo puede saber que su sistema cromatográfico funciona de forma adecuada?
Los estándares de referencia QCRM contienen mezclas de patrones seleccionadas de forma específica para ofrecer una
manera sencilla y fiable de controlar el rendimiento de cualquier sistema cromatográfico. El uso de los QCRM le puede
servir para asegurarse de que la columna y el sistema estén preparados para analizar las muestras. El uso regular de
QCRM también proporciona una oportunidad para optimizar los sistemas cromatográficos
y consultar la evolución del rendimiento de dichos sistemas a lo largo del tiempo, lo que facilita la
identificación de problemas de forma proactiva y la posibilidad de resolverlos con mayor rapidez.

Dado que los análisis cromatográficos son complejos y dependen de muchas variables diferentes, como
la composición de la fase móvil, el tipo de columna y el método de detección, Waters ha formulado
mezclas de QCRM específicas diseñadas para evaluar los sistemas teniendo en cuenta estas diferencias.

Para obtener más información acerca de los estándares específicos para la calibración, la cualificación y el ajuste de instrumentos y
detectores, así como una lista más completa de los estándares y reactivos que se encuentran disponibles, visite asr.waters.com.

Nombre del Modo

Uso previsto Sistemas Contenido
producto cromatográfico

Proporciona información del Mezcla de 3 componentes que incluye:

QCRM de rendimiento cromatográfico Todos los sistemas de 10 μL/mL de acetona, 0,25 mg/mL de naftaleno y
independientemente del pH de
compuestos fase móvil usando 3 compuestos
Fase reversa UPLC/HPLC 0,4 mg/mL de acenafteno
neutros con detector UV
neutros. En una solución de 2 mL de 50/50 acetonitrilo/agua.
Almacenar a temperatura ambiente.

Mezcla de 7 componentes que incluye:

Proporciona información del
rendimiento cromatográfico,
incluido el pH de fase móvil,
QCRM de fase usando 1 marcador de volumen
reversa muerto, 3 compuestos neutros,
1 compuesto ácido y 2
compuestos básicos.
0,016 mg/mL de uracilo, 0,02 mg/mL de butilparabeno, 0,06 de mg/mL naftaleno,
Todos los sistemas de 0,4 mg/mL de propranolol, 0,34 mg/mL de dipropilftalato,
Fase reversa UPLC/HPLC 0,2 mg/mL de acenafteno y 0,1 mg/mL de amitriptilina
con detector UV
En una solución de 2 mL de 65/35 metanol/20 mM de tampón de K2HPO4 a un
pH de 7.
Almacenar a temperatura ambiente.

Proporciona información del Mezcla de 4 componentes que incluye:

rendimiento cromatográfico del
modo HILIC, incluido el pH de
HILIC QCRM fase móvil, usando 1 marcador
de volumen muerto, 1 compuesto
neutro polar y 2 compuestos
básicos polares.
0,0190 mg/mL de acenafteno, 0,0037 mg/mL de timina
Todos los sistemas de
HILIC
UPLC/HPLC
0,0037 mg/mL de adenina y 0,0077 mg/mL de citosina
con detector UV En una solución de 1 mL de 20/80 acetonitrilo/agua.
Almacenar a una temperatura refrigerada de 2–5 °C tras su recepción.

Mezcla de 9 componentes que incluye:

Proporciona información
cromatográfica y de espectrometría
de masas de cuadrupolo usando una
QDa QCRM mezcla de 8 componentes para cubrir
un amplio rango de m/z de ESI (+-) a
una concentración optimizada. Esta
solución contiene 1 par crítico para
medir el rendimiento cromatográfico.
Todos los sistemas de UPLC/HPLC
Fase reversa
con el detector ACQUITY® QDa®
100,0 μg/mL de paracetamol, 45,0 μg/mL de cafeína,
50,0 μg/mL de sulfaguanidina, 10,0 μg/mL de sulfadimetoxina,
25,0 μg/mL de val-tyr-val, 6,0 μg/mL de verapamilo, 6,0 μg/mL de terfenadina,
25,0 μg/mL de leucina-encefalina y 19,0 μg/mL de reserpina
En una solución de 1 mL con 23,5% de acetonitrilo de calidad LC-MS,
76,5% de agua de calidad LC-MS y 0,007% de ácido fórmico.
Almacenar a una temperatura refrigerada de 2–5 °C.

Mezcla de 8 componentes que incluye:

Proporciona información
cromatográfica y de espectrometría
de masas de alto rendimiento usando
Quad LCMS QCRM una mezcla de 9 componentes a
una concentración optimizada.
Esta solución contiene 2 pares
críticos para medir el rendimiento
cromatográfico.
Todos los sistemas de UPLC/HPLC
Fase reversa con espectrómetro de masas de
cuadrupolo
100 µg/mL de paracetamol, 50 µg/mL de sulfaguanidina,
10 µg/mL de sulfadimetoxina, 25 µg/mL de val-tyr-val,
6 µg/mL de verapamilo, 6 µg/mL de terfenadina,
25 μg/mL de leucina-encefalina y 8 μg/mL de reserpina
19/81 acetonitrilo/agua, 0,008% de ácido fórmico.
Almacenar a una temperatura refrigerada de 2–5 °C tras su recepción.

Mezcla de 9 componentes que incluye:

Proporciona información
cromatográfica y de espectrometría
de masas de alto rendimiento usando
una mezcla de 9 componentes a
LCMS QCRM una concentración optimizada.
Fase reversa
Esta solución contiene 2 pares
críticos para medir el rendimiento
cromatográfico.
Todos los sistemas de UPLC/HPLC
con espectrómetro de masas de
alto rendimiento
10,0 µg/mL de paracetamol, 1,5 µg/mL de cafeína,
5,0 μg/mL de sulfaguanidina, 1,0 μg/mL de sulfadimetoxina,
2,5 µg/mL de val-tyr-val, 0,2 µg/mL de verapamilo,
0,2 µg/mL de terfenadina, 2,5 µg/mL de leucina-encefalina y
0,6 μg/mL de reserpina
En una solución de 500 μL de 5,7% de acetonitrilo y 94,3% de agua.
Almacenar a una temperatura refrigerada de 2–5 °C tras su recepción.

28
Recursos adicionales

Descripción Referencia

Documentación técnica sobre patrones de referencia QCRM y la optimización del rendimiento del instrumento 720004535EN

Nota de aplicación sobre la resolución de problemas habituales del sistema con los patrones de referencia QCRM de compuestos neutros 720004635EN

Guía de selección de reactivos, patrones analíticos y columnas de Waters 720002241EN

Para obtener una lista con los números de referencia de todas las columnas mencionadas en este folleto, visite
waters.com/findmycolumn.

Herramientas on-line

Waters Reversed-P hase Column Selectivity C hart (Gráfico de Waters Column Advisor
selectividad de las columnas de fase reversa de Waters) (Asesor de columnas de Waters)
www.waters.com/selectivitychart www.waters.com/columnadvisor

Waters Part Selector and Selectivity C hart for iPad ®

(Selector de piezas y gráfico de selectividad de Waters para iPad)
www.waters.com/apps
29
OFICINAS DE VENTAS:

Austria 43 1 877 18 07

Australia 61 2 9933 1777

Bélgica y Luxemburgo 32 2 726 1000

Brasil 55 11 4134 3788

Canadá 1 800 252 4752

China 86 21 6156 2666

República Checa 420 2 617 11384

Dinamarca 45 46 59 8080

Finlandia 358 9 5659 6288

Francia 33 1 30 48 72 00

Alemania 49 6196 400 600

Hong Kong 852 2964 1800

Hungría 36 1 350 5086

India 91 080 49292200 03

Irlanda 353 1 448 1500

Israel 9723 3731391

Italia 39 02 265 0983

Japón 81 3 3471 7191

Corea 82 2 6300 9200

México 52 55 52 00 1860

Países Bajos 31 76 508 7200

Noruega 47 6 384 6050

Polonia 48 22.101 5900

Portugal 351 21 893 61 77

Puerto Rico 1 787 747 8445

Rusia/CEI 7 495 727 4490 / 336 7000

Singapur 65 6593 7100

España 34 93 600 9300 www.waters.com/hplccolumns

Suecia 46 8 555 115 00

Suiza 41 56 676 7000

Taiwán 886 2 2508 5500

Reino Unido 44 208 238 6100

Estados Unidos 1 800 252 4752

Waters, T he Science of W hat’s Possible, CORTECS, UPLC, Alliance, ACQUITY UPLC, XBridge, XSelect, Atlantis,
Waters Corporation Symmetry, XTerra, Waters Spherisorb, Nova-Pak, BondaPak, µBondaPak, QDa y ACQUITY son marcas comerciales
34 Maple Street registradas de Waters Corporation. BEH Technology, CSH, SunFire, Intellignet Speed, IS, OBD, SymmetryShield,
Symmetry300, µPorasil, Porasil, Resolve, Delta-Pak y SymmetryPrep son marcas comerciales de Waters Corporation.
Milford, MA 01757 EE. UU. Todas las demás marcas comerciales pertenecen a sus respectivos propietarios.
T EL 508 478 2000
Fax: 508 872 1990 ©2014 Waters Corporation. Impreso en EE. UU.
www.waters.com Septiembre de 2014 720003995ES AO-SIG