Práctica No.
3
Extracción en Fase Sólida.
Separación de colorantes sintéticos
Objetivos
 Separar una mezcla de colorantes sintéticos
usados en alimentos, Tartrazina y
Azorrubina (rojo número 3), por extracción
en fase sólida, aplicando los conceptos de
cromatografía en fase reversa.
 Comprobar la eficiencia de la separación por
medio de la cromatografía en capa fina
sobre gel de sílice.
Resultados
Compuesto Rf
Mezcla colorantes
Tartrazina
Azorrubina
Tabla 1. Referencia de frentes en cromatografía en
capa fina para eluatos obtenidos en la extracción en
fase sólida.
Análisis de Resultados
Primeramente se realizó la técnica de extracción en
fase sólida, esto para llevar a cabo la separación de
los dos colorantes azoicos; Tartrazina y Azorrubina
(rojo No.3), inicialmente se acondiciono la columna
con etanol para así propiciar por igual las
interacciones en la columna, al terminar y sin dejar
que se secara se adiciono agua destilada (a su vez
se desecharon eluatos), después se procedió a
aplicar la muestra (mezcla de colorantes) para que
así interaccionaran las moléculas de los colorantes y
las moléculas de la fase estacionaria, posteriormente
se llevó a cabo el lavado con agua destilada hasta
que el aluato se veía incoloro esto para eliminar los
compuestos no adsorbidos, por último para eluir los
compuestos retenidos en la fase estacionaria, se
adicionó a la fase estacionaria un gradiente de
metanol/agua (primero 5 mL de metanol al 10%
seguidos de 15 mL de metanol al 50% y finalmente
20 mL de metanol) de esta forma se aumentó la
polaridad de los disolventes para así extraer los
colorantes en base a la diferencia de sus
polaridades.
Cromatografía en capa fina
Una vez separados los colorantes, se aplicó una
muestra tanto la Tartrazina como la Azorrubina, y
una mezcla de ambos, en una placa fina y se
eluyeron los 3 puntos con una fase móvil de
butanol/ácido acético/agua.
Podemos observar que el Rf de la Tartrazina es
menor, por lo tanto esta interaccionando de manera
relativamente fuerte con la fase estacionaria la cual
es polar, y por otro lado el Rf de la Azorrubina es
mayor, por lo tanto esta interaccionando de manera
débil con la fase estacionaria e interacciona más con
la fase móvil que es no polar, por ello su corrimiento
es mayor. De este modo se pone en evidencia que
la Tartrazina es un compuesto de mayor polaridad
con respecto a la Azorrubina.
Conclusiones
 Se llevó a cabo la separación de Tartrazina
y Azorrubina, mediante una cromatografía
en fase reversa.
 La Tartrazina presenta una mayor polaridad
con respecto a la Azorrubina.
Cuestionario
a) Definir los siguientes conceptos:
Eluir: Arrastrar mediante un líquido o fluido
sustancias adheridas o absorbidas en una columna
cromatográfica.
Eluyente: Considerado como la fase móvil, es la
sustancia que se añade en un columna
cromatográfica para hacer eluir (mover) el producto
de interés.
Eluato: Cada una de las sustancias que migran a
través del lecho de la fase estacionaria (impulsadas
por la fase móvil) dentro de un sistema de
separación cromatográfico.
Adsorción: Fenómeno de superficie en la cual las
partículas de un fluido son retenidas sobre dicha
superficie de un material sólido.
Partición: es el reparto de los solutos entre una fase
móvil y una fase estacionaria que esta retenida en
un soporte.
Exclusión: una fase estacionaria generalmente de
gel, va a seleccionar de acuerdo a los tamaños de
que tengan las partículas.
Intercambio iónico: es una reacción química
reversible, y se produce cuando un ion de una
disolución se cambia por otro ion de igual signo
(positivo o negativo) que está unido a una partícula
solida inmóvil.
Fluido supercrítico: Es una sustancia a temperatura
y presión superiores a sus valores críticos, y que
tiene una densidad similar o superior a la densidad
critica.
b) Investigar los nombres, fórmulas y
propiedades de los colorantes
artificiales usados en alimentos y
empleados en la práctica.
Tartrazina
También conocido como amarillo No. 5, tiene un
peso molecular de 534.3 g, perteneciente a la familia
de los colorantes azoicos (contienen el grupo azo -
N=N-).Se presenta en forma de polvo y es soluble en
agua; haciéndose de color más amarillo en tanto
más disuelta este, presenta una longitud de onda
máxima de 427 nm. Es un colorante artificial
ampliamente utilizado en la industria alimentaria,
además es empleada en bebidas, purés
instantáneos, papas fritas, repostería, sopas
instantáneas, helados, caramelos, chicles,
mermeladas, yogurt, gelatinas, se trata del colorante
amarillo de las paellas (azafrán).
Azorrubina
También conocido como rojo No. 3, tiene un peso
molecular de 269.3 g, perteneciente a la familia de
los colorantes azoicos, es soluble en agua, y su color
puede ir desde el rojo hasta el marrón, se utiliza en
la industria de alimentos para impartir color a los
productos. Entre las aplicaciones más comunes se
encuentran: Bebidas con gas y sin gas, polvos y
concentrados para preparar bebidas, pastillas,
gomas de mascar y gomitas, productos lácteos
congelados, Galletas, pastas, pasteles, mermeladas
y harinas premezcladas para panificación.
c) Discutir en base a las estructuras de los
colorantes, el orden de elución esperado
de los mismos en la cromatografía en
columna y en la cromatografía en placa
fina.
Estructuralmente hablando, la Tartrazina presenta
una mayor polaridad a comparación de la Azorrubina
(rojo No.3), por lo tanto en la cromatografía en capa
fina (fase normal) va a eluir primero la Azorrubina y
después la Tartrazina, y para la cromatografía en
columna (fase inversa) va a eluir primero la
Tartrazina y después la Azorrubina.
d) Explicar si la relación de polaridades
utilizada para la fase estacionaria y para
fase móvil corresponde a la
cromatografía en columna en fase
normal o en fase reversa.
Este corresponde a una fase reversa porque se
utilizan disolventes polares, en este caso
metanol/agua, ya que la fase estacionaria es no
polar. Por otro lado en la fase normal se utilizarían
mezclas de disolventes no polares ya que la fase
estacionaria seria polar.
e) Explicar. ¿Qué se entiende cuando la
columna de cromatografía empacada
con gel de sílice de fase reversa lleva en
su etiqueta C12 ó C18?
Se refiere a que la columna cromatografía tiene en
sus partículas cadenas de 12 o 18 carbonos
respectivamente, es decir, se encuentran
modificadas para convertirse en columnas no
polares.
Bibliografía
 Douglas A. Skoog, “Principios de análisis
instrumental”. 6ta Edición. Editorial Cengage
Learning, México.
 Dominguez, Xorge Alejandro. 1975.
“Cromatografía en Papel y en Capa Delgada”.
Serie de Química.
 Universidad Nacional Autónoma de México,
Facultad de Química, Química Analítica
Instrumental II “Técnicas Cromatográficas”,
Diciembre 2007, disponible en:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/
M.Cromatogrficos_6700.pdf