Universidad De Cartagena

Facultad De Ciencias Farmacéuticas

Programa De Química Farmacéutica

OBTENCIÓN DE AMILASA FÚNGICA

Danial Jose Martinez; Marina de Jesus Castro; Yuri Paola Palacio; José Rojas
Álvarez.

INTRODUCCIÓN

La biotecnología tiene como fin, el desarrollo de procedimientos prácticos que permitan el

aislamiento y selección de microorganismos de interés industrial, entre estas tenemos a
las amilasas, El almidón es una fracción importante de un gran número de productos
agrícolas, como los cereales (maíz, trigo, arroz), cuyo contenido de este carbohidrato es
de 30 a 80%, las leguminosas (frijol, chícharo, haba), con 25 a 50%, los tubérculos (papa,
yuca), en los que el almidón representa entre 60 y 90%, y algunas frutas, como el plátano
y el mango, que en su estado verde o inmaduro alcanzan contenidos de almidón de hasta
70% en base seca (1). La α-amilasa (1,4, α-glucanohidrolasa) es una enzima extracelular
que hidroliza los enlaces α 1-4 glicósidicos de polisacáridos, tales como el almidón,
glicógeno o productos de degradación de los mismos (2). Tiene una actividad enzimática
que oscila entre 53-129 U/L, su peso molecular va de los 40 000 a 50 000 Da, su actividad
requiere de la presencia de iones cloruro (3). Esta enzima tiene importancia en la industria
alimentaria como en cervecería, dulcería, cereales y panadería, y específicamente en la
sacarificación maltogénica, sin embargo, su producción es limitada y es un producto de
exportación. La α-amilasa que es producida de manera natural por Aspergillus oryzae
tiene un peso molecular de 52 x 3 10 (4). Las enzimas de origen microbiano presentan
ventajas técnico-económicas: poseen tiempos de generación menores, tienen
requerimientos de espacio menor por unidad de enzima producida y una potencialidad
ilimitada en cuanto a la disponibilidad de nuevas enzimas (2). Los preparados industriales
de enzimas, se caracterizan por la actividad particular de la enzima deseada, por el efecto
del pH, temperatura, tiempo de reacción, concentraciones de la enzima y del sustrato, así
como el efecto de los inhibidores o activadores, que pueden presentarse en las
aplicaciones industriales. La producción de una enzima, incluye dos etapas principales: la
fermentación, en la que se multiplica el microorganismo productor de la enzima, y la de
recuperación y purificación en la que se aísla la enzima y se lleva al grado de pureza
adecuado para su uso (2). En la industria se utilizan más los preparados enzimáticos,
pues la purificación de la enzima podría representar costos adicionales en la producción
de alimentos. La calidad de la enzima está en función de la fermentación, pues esta
influye directamente en la coloración, olor y estabilidad de la enzima.
OBJETIVO

- Identificar microorganismos productores de amilasa.

METODOLOGIA

- Cultivo Inicial

Se eligieron 3 granos (garbanzo) de mejor aspecto, sin presencia de hongos o partículas

extrañas visibles, con ayuda de una pinza sin garra previamente flameada y enfriada, se
agregaron al medio YPD (1,5% de extracto de levadura, 2,0% peptona, 2,0% dextrosa,
2,0% agar – agar, 5% NaCl), encubando a 28 °C durante 7 dias.

- Aislamiento de los hongos

De todas las colonias, se escogió solo una y se pasó por duplicado al medio de cultivo
CASO, después de 7 días se volvió a pasar la colonia por duplicado a un medio de cultivo
de almidón al 1% a 28 °C durante 7 días.

- Identificación de cepas productoras de enzimas

Las cepas productoras de enzimas hidrolíticas del almidón se detectaron a los 7 días
mediante revelador de lugol (I2KI = 0,026% I2 + 0,26% KI).

Materiales y Reactivos

Semillas de Garbanzo
Agar YPD conteniendo 5% de NaCl
Agar almidón 1%
Agar CASO
Cloruro de Sodio al 1%
Solución de iodo al 0,026% + 0.26 de
ioduro de potasio
Solución reveladora
Solución sustrato
Frascos con algodón y alcohol
Gotero
Gradilla
Marcador indeleble punta delgada
Pinzas sin garra
Mechero
Asa en punta o redonda
Cinta pegante
Encendedor
Incubadora a temperatura ambiente
Nevera con congelador

BIBLIOGRAFIAS
1. Crueger W y Crueger A. (1993) Enzimas. En: Manual de Microbiología Industrial.
Acribia, España. Pág. 213-245

2. Fogarty,W. (1983) Microbial amylases. En: Microbial enzymes and biotechnology

Applied Science, Publishers, London. Pág. 1-92, 251.

3. Scriban R. (1985) Producción de enzimas. En: Biotecnología, El Manual Moderno.

México. Pág. 282-297.

4. Dixon M. and Edwin C. (1979) Enzyme isolation. En: Enzymes, Brace J., Academic
Press, New York. Pág. 23-47.