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Cromatografía en papel

ESTUDIANTES:

Guerra Dina Luz


Pérez Nayda Luz
Grupo 19A

DIRIGIDO A:

M. Sc. Jesús Arturo Reyes Lemus


Identificación: 3727168
Laboratorio De Química Orgánica
Código De Asignatura: 23337
Aula: 507B
Mesa: 5

Universidad Del Atlántico


Facultad: Ciencias De La Educación
Programa: Licenciatura En Biología Y Química
Plan De Estudios: 2011 Extendida
III Semestre - II Corte
Código Snies: 11759
Registro Calificado Resolución 4403 Del 1 De Junio De 2011

Kilómetro 7 Vía Puerto Colombia


Barranquilla - Atlántico - Colombia
Sábado, 05 De abril De 2018
UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO
FACULTAD CIENCIAS DE LA EDUCACIÓN
PROGRAMA DE LICENCIATURA EN BIOLOGÍA Y QUÍMICA
PLAN DE ESTUDIOS 2011 EXTENDIDA Cromatografía en papel
CÓDIGO SNIES: 11759
Registro calificado Resolución 4403 del 1 de Junio de 2011

Contenido

Introducción ....................................................................................................................... 3
Justificación ....................................................................................................................... 4
Marco teórico ..................................................................................................................... 5
Objetivos............................................................................................................................ 6
Metodología ....................................................................................................................... 7
Conclusiones ..................................................................................................................... 8
Bibliografía ......................................................................................................................... 9
Anexos ............................................................................................................................ 10

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Introducción

Los métodos cromatográficos son métodos de separación que involucran la


transferencia reversible de un compuesto que está adsorbido en una fase
estacionaria (adsorbente) a una fase móvil (disolvente) que fluye a través de la fase
estacionaria.

La separación surge de las interacciones mutuas de componentes de una muestra,


disolvente y adsorbente. El adsorbente está presente en un gran exceso, con una
gran superficie y con sitios polares capaces de unir reversiblemente pequeñas
concentraciones de sustancias por un proceso esencialmente electrostático.

El disolvente compite con los componentes de la muestra por los sitios de unión.
Estos componentes son desplazados reversible y continuamente en la dirección del
flujo del disolvente. El proceso descrito puede escribirse como un equilibrio
competitivo en donde hay una partición de los componentes entre la fase
estacionaria y la fase móvil:

Componentes-adsorbente ↔ disolvente-adsorbente ↔ componente-disolvente

Entre más polar sea un compuesto, más fuertemente se adsorbe en la fase


estacionaria, por lo que su migración a lo largo de ella es menor, siendo eluído
(arrastrado) más lentamente por la fase móvil, que los compuestos menos polares.

De este modo, la separación selectiva de los componentes de una muestra, por


cromatografía, se debe a las diferencias en la migración de los componentes
individuales a lo largo de la fase estacionaria.

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Justificación

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Marco teórico

La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para


realizar unos análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica muy potente no
requiere de ningún tipo de equipamiento.
La fase estacionaria está constituida simplemente por una tira de papel filtro. La
muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la solución y
evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace
ascender por capilaridad. Luego se coloca la tira de papel verticalmente y con la
muestra de abajo dentro de un recipiente que contiene fase móvil en el fondo.
Después de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al
extremo se retira el papel y se deja secar. Si el disolvente elegido fue adecuado y
las sustancias tienen color propio se verán las manchas de distinto color separadas.
Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de
revelado.
Hay varios factores de los cuales depende una cromolitografía eficaz: la elección
del disolvente y la del papel de filtro.
Un ejemplo podría ser que utilices un pedazo de papel y le hagas puntos de colores
con plumones permanentes y le pongas un lapiz del lado donde no están los puntos
de colores (esto te servirá como soporte), después en un vaso pon alcohol y coloca
la tira de papel con el lapiz horizontalmente en la parte de arriba para que el papel
no caiga y tienes que esperar para que el alcohol haga efecto en el papel, lo que
sucederá es que a los puntos de colores se les harán unas pequeñas líneas hacia
arriba.
El descubrimiento de la cromatografía en papel en 1943 por el químico inglés Archer
John Porter Martin (1910-2002) y el también bioquímico inglés Richard Laurence
Millington Synge (1914-1994) proporcionó, por primera vez, los medios de explorar
los constituyentes de plantas y para su separación e identificación. Hubo una
explosión de actividad en este campo a partir de 1945.

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Objetivos

Aplicar la cromatografía en papel como técnica de separación de una mezcla de


componentes.

Comparar la eficiencia y aplicación de la cromatografía en papel como ejemplo


de los métodos cromatográficos.

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Metodología

Materiales y reactivos

Equipos e
implementos Reactivos

1 Gotero Fenacetina pura


1 Lápiz o pedazo de Cafeína pura
manguera Ácido acetil salicílico
2 Vidrios de reloj Alúmina
2 placas par CCD Etanol
2 Beacker de 20 mL Indicador de
1 Gradilla fluorescencia hf254
4 tubos de ensayo Solución sulfocrómica

Procedimiento:

1. Cromatografía en papel

Análisis de resultados:

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Conclusiones

Se logró aplicar la cromatografía en papel como técnica de separación de los


pigmentos determinando que la técnica es apropiada y eficiente.

Se consiguió comparar la eficiencia y aplicación de la cromatografía en papel


como ejemplo de los métodos cromatográficos.

Esta práctica de laboratorio se culminó con éxito y con los resultados obtenidos
se evidencia que se adquirió habilidad en el manejo de la técnica de separación
descrita en este informe, en donde se aprendió a utilizar los materiales e
instrumentos necesarios para la realización de esta práctica de nivel básico de
química orgánica.

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Bibliografía

Haslam, Edwin (2007). «Vegetable tannins – Lessons of a phytochemical


lifetime». Phytochemistry 68 (22–24): 2713-21. PMID 18037145.

Curso Práctico De Química Orgánica Ray Q Brewster Alhambra 1978


España 253 Pp Qd251 B743 1970.

Cromatografía de capa delgada, separación de los pigmentos de una


planta.Alonso Marrugo González Profesor Químico- MsC-PhD. Universidad
de Cartagena.

Guzmán, D. 2010. Cromatografía en papel. Laboratorio de química


orgánica. Universidad Nacional de Colombia. 23-29 Pp.

Harry W. Lewis & Christopher J. Moody (13 de junio de 1989). Experimental


Organic Chemistry: Principles and Practice (ilustrada edición).
WileyBlackwell. pp. 159-173. ISBN 978-0-632-02017-1.

Volver arriba↑ A.I. Vogel; A.R. Tatchell; B.S. Furnis; A.J. Hannaford; P.W.G.
Smith. Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry (5ª edición). ISBN
0-582-46236-3.

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Anexos
Cuestionario

1. ¿Cuáles son algunos criterios que deben tenerse en cuenta en la elección de


absorbente en una separación cromatográfica determinada?
R/:
Hay varios factores que deben tomarse en cuenta en la elección de un adsorbente
para una separación cromatográfica determinada. Desde luego debe ser insoluble
en el disolvente que se va a utilizar para la separación y no debe reaccionar con las
sustancias que van a separarse ni debe actuar como catalizador de sus
descomposición, transposición o isomerización, ha de tener un compuesto uniforme
prescindiendo de su origen y debe ser incoloro cuando sean de localizar
visualmente las unas correspondientes a compuestos coloreados.

Teóricamente cuando menor sea el tamaño de las partículas del adsorbente mayor
será el grado de separación de la mezcla tratada sin embargo desde el punto de
vista práctico se debe tener en cuenta que cuanto menor sea el tamaño de las
partículas menor será la velocidad con la que el disolvente o la solución pasaran a
través de la columna, por tanto se necesita una situación de compromiso. El
adsorbente no debe ser ni de grano muy grueso ni muy fino, el diámetro medio de
las partículas debe ser de unas 8 a 12 micras. Cuando necesariamente se tienen
que utilizar como adsorbente polvo muy fino , la velocidad de la solución o el
disolvnt6e atreves del adsorbente se puede aumentar mezclando este con un
coadyuvante de filtración tal como el “HYFLOSUPERCEL” la aplicación de una
subsidian suave ( de unos 680mm) o de cierta precisión puede también acelerar la
velocidad del disolvente atreves de la columna el adsorbente más utilizado es la
alúmina (AL203) la a variedad de alúmina con mayor poder de adsorción no se
puede preparar calentando al rojo la alúmina activada comercial durante unas
cuantas horas y dejándola después de enfriar en un desecador a vacío. Sin embrago
la alúmina activada de esta forma es un adsorbente demasiado fuerte resultando
difícil la eliminación del producto adsorbido en la columna.

Para usos generales se puede preparar un producto más adecuado calentando la


alúmina comercial periodos de tiempo más cortos a temperaturas más bajas o bien
añadiendo deliberadamente agua a las alúminas deshidratadas a temperaturas más
altas.

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El poder adsorbente de un producto determinado depende no solo de su naturaleza


sino también del disolvente utilizando en la preparación del cromatográma. Por tanto
no es posible establecer una clasificación rigurosa del poder adsorbente relativo a
las distintas sustancias que se pueden utilizar. Sin embrago se puede establecer
aproximadamente la siguiente clasificación: adsorbentes muy activos: alúmina con
un contenido de agua pequeña, carbón activado y arcilla. Adsorbentes intermedios:
gel de sílice, acido silícico, carbonato de calcio, fosfato de cálcico, magnesia y cal
apagada, adsorbentes débiles: sacarosa, inulina, almidón y talco.

2. ¿En qué consiste la cromatografía de CCD preparativa?


R/:
La cromatografía preparativa comprende un amplio campo de aplicaciones, desde
el aislamiento de 1 µg. de muestra para identificación espectroscópica hasta el
aislamiento de un compuesto puro de una mezcla de 100 g. La cromatografía
preparativa se diferencia de la técnica básica en muchos aspectos, desde la
preparación de la papilla. Ésta debe hacerse con menos agua que de ordinario. Una
papilla más espesa ayuda a estabilizar el grosor de las placas que se precisa para
una carga de mayor magnitud. El espesor óptimo oscila desde un mínimo de 1 mm.
Hasta un máximo de 2 mm.

Las placas utilizadas en cromatografía preparativa son placas grandes, de


aproximadamente 20x20 cm. que permiten separar aproximadamente 1 g. de
mezcla utilizando unos 35 g. de adsorbente.

La siembra de la muestra se realiza mediante la ayuda de una jeringuilla o tubo


capilar. La siembra se realiza a lo largo de una línea recta (existen en el mercado
diverso utensilios para evitar torcerse). Si al terminar la primera siembra todavía
queda muestra, se seca la primera siembra y se aplica la segunda, intentando que
ésta quede sobre la anterior, para así conseguir que el frente sea lo más estrecho
posible. La siembra debe realizarse a lo ancho de la placa.

Una vez sembrada la muestra se desarrolla la cromatografía. Se utiliza un


adsorbente con indicador fluorescente para ver en la lámpara ultravioleta donde han
quedado las manchas de los diferentes compuestos, dichas manchas se marcan.

Una vez localizados los compuestos, éstos se extraen de la fase estacionaria, uno
a uno, con la ayuda de una espátula, sobre un papel de filtro u otro soporte.
Posteriormente se coloca cada componente en un erlenmeyer, y se mezcla con un
disolvente (metanol). Una vez disuelto el compuesto se filtra varias veces para
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separar el compuesto y la fase estacionaria. Una vez separado se elimina el


disolvente (destilación), con lo cual se obtiene el componente separado.

Si no se dispone de indicador fluorescente, no se pueden usar reveladores químicos


sobre toda la placa. El proceso a seguir es el siguiente: se raya la placa separando
totalmente una pequeña franja de placa, sobre la cual se aplica el revelador químico,
y a partir de esta franja se marcan las franjas de compuestos.
3. Usted tiene un compuesto impuro y quisiera saber cuántas sustancias están
contaminando su compuesto. Explique cómo lo haría utilizando cromatografía
de capa delgada o de papel.
R/:
Al realizar el procedimiento respectivo para una cromatografía de capa delgada la
cual separa compuestos orgánicos de una muestra sirve para determinar si el
compuesto orgánico esta impuro y que sustancias lo están contaminando. Por
consiguiente en la placa cromatografía de capa delgada al mirar el extendido de las
sustancias en la placa se mostraran puntos o manchas al ser absorbida o atraídas
con mayor fuerza por la capa estacionaria, por ende entre menos manchas allá en
el extendido menos impura será esas manchas corresponderán a las sustancias
que contaminan.

4. Entregue un dibujo que presente los resultados obtenidos, los Rf


experimentales, los compuestos encontrados en el medicamento y un breve
comentario sobre los reveladores utilizados.
R/:

5. Investigue el nombre que reciben los reveladores de yodo y ácido


sulfocrómico. ¿Por qué?
R/:
Si los compuestos separados no son coloreados es necesario revelar la posición de
dichos compuestos, para ello existen dos tipos de métodos: químicos y físicos.
Métodos químicos: Consisten en realizar una reacción química entre un reactivo
revelador y los componentes separados, para ello se pulveriza la placa con los
reactivos reveladores.
Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos
coloreados con los componentes orgánicos (con tonos amarillo-marrón), pero las

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manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente señalar las


manchas aparecidas.
Otro reactivo revelador bastante utilizado es el ácido sulfúrico, que reacciona con
los componentes orgánicos produciendo manchas negras luego de ser
carbonizadas. También es utilizado el permanganato potásico, que deja unas
manchas de color amarillo. El tamaño de las manchas no está relacionado con la
cantidad de componente separado.
Además de estos reveladores generales, existen otros específicos: 2,4 -
dinitrofenilhidracina (para aldehídos y acetonas). Verde de bromocresol (para
ácidos carboxílicos). Paradimetil aminobenzaldehido (para aminas). Ninhidrina
(para aminoácidos).

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