Universidad de la sierra

Practica 1: Manejo de material y equipo y procedimiento básico para el

laboratorio de química.

Materia: Bioquímica

Maestra: Elvira Gil León

Integrantes:

Galindo Dávila Jorge Guadalupe

Madrid Sandoval Maria José

Miranda Bojórquez Fátima Guadalupe

Smith Ramírez Gabriela Alejandra

Sotelo Molinar Fátima Guadalupe

Valencia Noriega Edgar Osvaldo

Moctezuma, Son, 29 de Agosto del 2018

 INTRODUCCION
Centrifugación

Una mezcla se puede separar girándola muy rápidamente. Este método se llama
Centrifugación. La Centrifugación es un método que permite separar sólidos de
líquidos, o líquidos de líquidos de diferentes densidades mediante la utilización de
una centrifuga de laboratorio. La centrifuga obliga a una mezcla a experimentar un
movimiento rotatorio con una fuerza de mayor intensidad que la fuerza gravitacional,
provocando la sedimentación del sólido o de las partículas de mayor densidad.

Espectrofotometría

El espectrofotómetro es un instrumento con el que se apoya la espectrofotometría

para medir la cantidad de intensidad de luz absorbida después de pasar a través de
una solución muestra.

Con el espectrofotómetro, la cantidad de una sustancia química conocida

(concentraciones) también puede determinarse midiendo la intensidad de la luz
detectada. Dependiendo del rango de longitud de onda de la fuente de luz, se puede
clasificar en dos tipos diferentes:

Espectrofotómetro UV-Vis: utiliza luz en el rango ultravioleta (185 – 400 nm) y rango
visible (400 – 700 nm) de espectro de radiación electromagnética.

Espectrofotómetro de infrarrojos: utiliza luz en el espectro de infrarrojos (700 –

15,000 nm) del espectro de radiación electromagnética.

La estructura básica de los espectrofotómetros consiste en una fuente de luz, un

colimador, un monocromador, un selector de longitud de onda, una cubeta para la
solución muestra, un detector fotoeléctrico y una pantalla digital o un medidor.
 Objetivo:
1. Manejar adecuadamente el equipo de laboratorio.
2. Identificar los materiales y equipo usados en el laboratorio de biología.
3. Utilizar apropiadamente el equipo del laboratorio.

Materiales:
 1 Gradilla  1 Micropipeta
 1 Pipeta  1 balanza
 7 Tubos  1 Vidrio de reloj
 1 Piseta  1 Matraz volumétrico
 1 Vaso  Colorante
 1 Espatula  Cloruro de sodio
 1 Envudo

 9 Portaobjetos
Métodos

Experimento 1

1.-Se realizó una dilución en serie a partir de una solución madre (1:10) en 5 tubos.

 Solución madre: NaCl 10% colorida.

2.- Después se midió la absorbancia y transmitancia en el espectrofotómetro a

520nm.

Experimento 2

1.- Se tomó 5 ml de solución en 2 tubos.

2.- Después se centrifugo por 5´ a 3000 rpm para separar las fases.

3.- Se descanto las 2 fases.

Experimento 3
1.- Se colocó sobre un portaobjetos gotas de la solución madre con distintas
cantidades.

2.- Después se comparó el tamaño de gota usando vernier.

3.- Se Relacionó la cantidad en mililitros con tamaño de gota en milímetros 360m.

Resultados y Discusiones

Experimento 1.

Absorbancia Tramitancia
2 120
1.78 100 94.4 99.8 100.2
1.5 85.1
80
1 60
0.86
40
0.5
20
0 0.025 0.001 0 0 1.6
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5

En el primer experimento, para el primer tubo se obtuvo una absorbancia de 1.78 y

una transmitancia de 1.6 es decir, del total de luz emitida por el espectrofotómetro,
1.78 de cantidad de luz fue absorbida por la muestra y el 1.6, fue la cantidad de luz
que paso a través de la muestra, para el segundo tubo se obtuvo 0.86 de
absorbancia y 85.1 de transmitancia así mismo para los tubos 3,4 y 5 se obtuvieron
0.025, 0.001 y 0 de absorbancia y 94.4, 99.8 y 100.2 de transmitancia.

En la primera gráfica, se puedo observar como la absorbancia va disminuyendo

desde el primer tubo con 1.78 hasta llegar al tubo 5 con 0 de absorbancia. En la
segunda gráfica, se observó que la cantidad de transmitancia fue desde 1.6 en el
primer tubo hasta 100.2 en el 5to tubo.

Esto sucede ya que, según la ley de Beer, a menor concentración o color en una
solución, mayor será la tramitación y menor será la absorbancia. También se debe
a otros factores como: las distancias que la luz debe atravesar a través de la muestra
y a la probabilidad de absorbancia de la muestra o coeficiente de extinción (BEER,
2013).

Experimento 2.

En este experimento, no se logró observar los dos componentes divididos, debido

a que el soluto o la sustancia disuelta, posiblemente era de bajo peso molecular o
el tiempo de centrifugado y las rpm no fueron suficientes para lograr precipitarlas.

Experimento 3.

ml milimetros En esta grafica se muestran los resultados obtenidos para

100 11.2 este experimento y se pudo observar que, a medida que a
200 15.1
300 18.2 cantidad de mililitros es mayor, su tamaño en milímetros
400 20.9 también aumenta. Al llegar a 1000 mililitros, su tamaño
500 23.8
disminuyo a 33.9, esto se debió a que la gota de agua
600 23.9
700 27.2 creció verticalmente en el porta objetos y las mediciones
800 35.3 fueron horizontalmente.
900 36.7
1000 33.9

Conclusión

Es importante conocer el material de laboratorio porque de esa manera se hace un

manejo adecuado del mismo. El espectrofotómetro se utiliza para determinar
concentraciones en una solución, utilizando las propiedades de la luz y su
interacción con otras sustancias. Es una herramienta muy útil en un laboratorio de
química y todos los materiales tienen su cuidado y manejo adecuado.
Investigaciones:

FUNDAMENTOS DEL METODO DE CENTRIFUGACION:

Una mezcla se puede separar girándola muy rápidamente. Este método se llama
Centrifugación. La Centrifugación es un método que permite separar sólidos de
líquidos, o líquidos de líquidos de diferentes densidades mediante la utilización de
una centrifuga de laboratorio. La centrifuga obliga a una mezcla a experimentar un
movimiento rotatorio con una fuerza de mayor intensidad que la fuerza gravitacional,
provocando la sedimentación del sólido o de las partículas de mayor densidad. Este
es uno de los principios en los que se basa la densidad: todas las partículas, por
poseer masa, se ven afectadas por cualquier fuerza. La centrifugación impone,
gracias a la aceleración centrífuga, un efecto parecido al gravitacional: Las
partículas experimentan una aceleración que las obliga a sedimentar.

Existe una correlación entre el tamaño, la densidad de una partícula y la velocidad

que separa la partícula de una mezcla heterogénea, cuando la única fuerza aplicada
es la de la gravedad. Cuanto mayor sea el tamaño y cuanto mayor sea la densidad
de las partículas, más rápido se separarán de la mezcla. Mediante la aplicación de
una mayor fuerza gravitacional efectiva a la mezcla (como una centrífuga lo hace),
la separación de las partículas se acelera. Esto es ideal en entornos industriales y
de laboratorio porque las partículas que se separan naturalmente durante un largo
período de tiempo pueden separarse en mucho menos tiempo.

La centrifugación puede dividirse en primera instancia en dos grandes grupos: La

preparativa y la analítica. En la primera, se obtienen grandes cantidades del material
que se desea estudiar, mientras que en la segunda se procede al análisis de las
macromoléculas utilizando la ultra centrifugación.
Métodos de Centrifugación

Existen varios métodos de centrifugación y una extensa variedad de técnicas

derivadas de esta.

Centrifugación Diferencial

Se basa en una diferencia en la densidad de las moléculas. Esta diferencia debe

ser grande para poder ser observada al centrifugar; Las partículas que posean
densidades similares sedimentan juntas. Este método no es especifico, por lo que
se utiliza como centrifugación preparativa para separar partículas de otros
componentes en la mezcla (por ejemplo, para separar mitocondrias de núcleos y
membrana) pero no es útil para separar moléculas.

Centrifugación Zonal

Las partículas se separan al usar medios de diferente densidad. Las partículas con
mayor densidad se sedimentarán al fondo (precipitado). Aquellos componentes de
la mezcla con menor densidad al medio quedarán en el sobrenadante mientras que
las partículas con densidad similar a la del medio de centrifugación, quedarán en
una zona intermedia entre el precipitado y el sobrenadante. El medio puede no
presentar gradientes de concentración (centrifugación zonal sin gradiente) o tener
diferencias de concentración (centrifugación zonal con gradiente).
 USO DE LA MICROPIPETA.
La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir
pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas
científicas.

Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más
habituales, denominados p20, p200 y p1000, admiten un máximo de 20, 200 y 1000
μl, respectivamente.

Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos líquidos sin

tener que lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de plástico,
que habitualmente son estériles. Existen varios tipos de puntas: por ejemplo, las
amarillas para pipetear volúmenes pequeños (por ejemplo, 10 μl), y las azules para
pipetear volúmenes grandes (por ejemplo, 800 μl).

Tipos

Existen micropipetas manuales, en las que el volumen a aspirar se fija girando un

botón en su parte superior que está conectado a un sistema analógico de
confirmación de volumen, y automáticas, en las cuales dicho sistema es digital.

Hay micropipetas simples, que sólo acogen una punta cada vez, y multicanales, que
permiten incorporar múltiples puntas (por ejemplo, ocho), absorbiendo el mismo
volumen en todas ellas.

Actualmente, se reconocen fácilmente en el mercado dos de las mejores marcas

que existen: Eppendorf y Nichiryo.
 Fundamento de la Espectrometría

La espectrometría de masas es una técnica de análisis que permite determinar la

distribución de las moléculas de una sustancia en función de su masa. El
espectrómetro de masas es un dispositivo que permite analizar con gran precisión
la composición de diferentes elementos químicos e isótopos atómicos, separando
los núcleos atómicos en función de su relación entre masa y carga (m/z). Puede
utilizarse para identificar los diferentes elementos químicos que forman un
compuesto, o para determinar el contenido isotópico de diferentes elementos en un
mismo compuesto. Con frecuencia se encuentra como detector de un cromatógrafo
de gases, en una técnica híbrida conocida por sus iniciales en inglés, GC-MS.

El espectrómetro de masas mide razones masa/carga de iones, calentando un haz

de material del compuesto a analizar hasta vaporizarlo e ionizar los diferentes
átomos. El haz de iones produce un patrón específico en el detector, que permite
analizar el compuesto. En la industria es una técnica altamente utilizada en el
análisis elemental de semiconductores, biosensores, cadenas poliméricas
complejas, fármacos, productos de síntesis química, análisis forense,
contaminación medioambiental, perfumes y todo tipo de analitos que sean
susceptibles de pasar a fase vapor e ionizarse sin descomponerse.

La técnica de detección de iones se basa en el fenómeno conocido como

desbastado (sputtering, en inglés) de partículas centradas en un blanco, que son
bombardeadas mediante iones, átomos o moléculas. Dependiendo del intervalo de
energía de la partícula primaria, ocurren colisiones elásticas e inelásticas:

 en el intervalo de los keV, las interacciones dominantes son las elásticas;

 las colisiones inelásticas aumentan según aumenta la energía. Estas son
más comunes en el intervalo de energía de los MeV.

El proceso de dispersión produce iones secundarios en el rango de las energías

cinéticas traslacionales. Las distribuciones de energía son distintas según se trate
de iones atómicos o moleculares. La eficiencia de ionización del SIMS se define
como la fracción de los átomos esparcidos que se ionizan. La eficiencia varía con
respecto al elemento de análisis en varios órdenes de magnitud. Las influencias
más obvias son el potencial de ionización y la afinidad electrónica de los iones
negativos.

Partes y Funcionamiento de un espectrómetro

El espectrofotómetro es un instrumento con el que se apoya la espectrofotometría

para medir la cantidad de intensidad de luz absorbida después de pasar a través de
una solución muestra.

Un espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para

medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma
magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o
reacciones químicas que se miden en una muestra. También se utiliza en
laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos.

Fuente de luz:

La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes condiciones:
estabilidad, direccionabilidad, distribución de energía espectral continua y larga
vida. Las fuentes empleadas son: lámpara de wolframio (también llamado
tungsteno), lámpara de arco de xenón, lámpara de deuterio y lámpara LED que se
utilizan en los laboratorios.

Monocromador:

El monocromador aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o

se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática.

Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de

dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente
que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de onda hacia un
prisma el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada
se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la rendija de salida.

Compartimento de Muestra

Es donde tiene lugar la interacción con la materia (debe producirse donde no haya
absorción ni dispersión de las longitudes de onda). Es importante destacar, que
durante este proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer en su máxima expresión,
con base en sus leyes de absorción, en lo que concierne al paso de la molécula de
fundamental-excitado.

Detector:

El detector es el encargado de captar la radiación y, a su vez, dejarla en evidencia

para su estudio posterior. Existen dos tipos:

 los que responden a fotones;

 los que responden al calor.

Fotodetectores:

En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotodetectores para

percibir la señal en forma simultánea en 16 longitudes de onda, cubriendo el
espectro visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes móviles del
equipo.

Celdas

Son los recipientes donde se depositan las muestras líquidas a analizar. El material
del cual están hechas varía de acuerdo a la región que se esté trabajando; son de
vidrio o plástico si se trabaja en la región visible, de cuarzo si se trabaja en la
ultravioleta y de NaCl si se trabaja la región de infrarrojo. Se caracterizan por tener
dos paredes correspondientes a los lados ópticos por donde cruza el haz de luz.
 Características del color de la luz de espectro UV visible

Aparato que sirve para medir la intensidad de la luz absorbida por una solución en
un estrecho intervalo de longitudes de onda del espectro UV visible. A mayor
intensidad de color de una solución es mayor la absorción de la luz, de modo que
esa absorción puede utilizarse como medida directa de la intensidad de color. La
relación entre la concentración de una sustancia con la absorción se basa en la ley
de Beer-Lambert, la cual enuncia que la concentración de sustancias es
directamente proporcional a la cantidad de luz absorbida e inversamente
proporcional al logaritmo de la luz transmitida. Un espectrofotómetro es un
dispositivo que posee una fuente de radiación que se puede dirigir hacia una
muestra que se espera absorba parte de de esa radiación, la cual se puede detectar
mediante un circuito que produzca una señal reproducible. Sus componentes son
los siguientes:

 Fuente de luz.
 Filtro.
 Cubeta con la muestra.
 Célula fotoeléctrica.
 Amplificador y medidor.
Anexo
 BIBIOGRAFIA

D.J. Burton. 2001. Química Orgánica y Bioquímica. Iowa. McGraw-Hill.

Ramón Parés. Antonia Juárez. 2002. Bioquímica de los Organismos. Editorial

Reverté.

Melo Virginia. Cuamatzi Oscar. 2008. Bioquímica de los procesos metabólicos.

México. Editorial Reverté.

https://www.tplaboratorioquimico.com/laboratorio-quimico/procedimientos-basicos-
de-laboratorio/centrifugacion.html

https://www.equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_mo.php?it=1031

https://es.wikipedia.org/wiki/Espectroscopia_ultravioleta-visible

BEER, L. (22 de 04 de 2013). Universidad Veracruzana. Obtenido de

https://www.uv.mx/personal/aherrera/files/2014/05/L.-Ley-de-Bouguer-
Lambert-Beer-0.pdf