Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Departamento de Bioquímica

“Dr. Guillermo Carvajal Sandoval”

Laboratorio de Métodos de Análisis

Efecto del pH y la concentración en la intensidad de fluorescencia de riboflavina.

Profesor(a): Rosa Martha Cabrera Martínez

Grupo 4IM2
Sección 2
Alumno: Salinas Bailón Víctor Manuel
Fundamento
La fluorescencia es un fenómeno de luminiscencia característico por tener un
proceso de absorción por parte de una molécula, la cual pasa a un estado de
excitación, para después pasar a un estado de relajación, por lo cual puede emitir
la energía en forma de calor o bien en forma de radiación.

Una forma de cuantificar la energía emitida es a partir de un fluorímetro, este

dispositivo detecta la luz emitida por la sustancia a partir de la incidencia de una
longitud de onda en la sustancia para llevar a cabo el proceso de absorción.

Todas las sustancias tienen un grado de intensidad de fluorescencia, pero en tanto

menor sea, también será menos la eficiencia cuántica, la cual se puede definir
como el porcentaje de la cantidad de moléculas luminiscentes sobre las moléculas
excitadas.
Objetivos
El alumno:
a) Conocerá el manejo de un fluorímetro de filtros.
b) Determinará el efecto del pH del disolvente sobre la intensidad de
fluorescencia.
c) Determinará el efecto de la concentración de la riboflavina sobre la intensidad
de fluorescencia.

Resultados
Intensidad
Intensidad de
Intensidad de Intensidad de de
Riboflavina fluoresceína
fluoresceína fluoresceína fluoresceína
(ppm) en 𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻
en 𝐻2 𝑂 en HCl 0.1 M en NaOH
0.9 M
0.1 M
0.0 5.00 4.99 5.00 4.98
1.0 5.74 5.13 5.85 5.00
2.0 6.40 5.27 6.56 5.01
3.0 6.85 5.39 7.26 4.81
4.0 7.81 5.51 7.90 5.04
5.0 8.94 5.62 8.49 5.04
10.0 11.27 6.12 10.95 4.85
50.0 18.18 6.89 15.22 5.11
pH 5 1 3 13
 20

18

16
Intensidad de fluorescencia

14

12
Agua
10
HCl
8
Acético
6 NaOH
4

0
0 10 20 30 40 50 60
Concentración (ppm)

Discusión
A partir del análisis gráfico se puede observar que la intensidad de fluorescencia se
ve inhibida de forma decreciente cuando el disolvente es hidróxido de sodio, ácido
clorhídrico, ácido acético y agua, esto se puede justificar porque la estructura
química de la riboflavina se ve alterada tanto en medio ácido como en un medio
básico, puesto que se limita el número de electrones libres y resonancias
conjugadas, por lo que estos cambios estructurales pueden no absorber ni transmitir
de la misma forma que en su estructura neutra.
Por otro lado, la forma en cómo se inhibe esta característica respecto a la
concentración es que al existir una gran cantidad de moléculas en un volumen,
supongamos pequeño, estas producirán choques entre las mismas, lo cual
ocasionará que la energía emitida por una molécula sea cedida en forma de calor
por otra, reduciendo la intensidad de fluorescencia. Este comportamiento es
claramente visualizado en la tendencia que sigue la gráfica del agua, en esta se
aprecia que al aumentar la concentración de la riboflavina se inhibe la intensidad de
fluorescencia, pues ya no sigue una tendencia lineal.

Bibliografía
 Christian, Gary D, “Química analítica”, 6ta edición, editorial McGraw Hill, México DF, 2009, páginas
464 -466, 505-511.
Anexos:
1. ¿Por qué se deben conocer las longitudes de onda de máxima excitación y
de máxima emisión?
Se deben de conocer puesto que a partir de estas se puede determinar a qué
longitudes de onda es posible cuantificar la intensidad de fluorescencia, esto debido
a que sólo una longitud de onda posee la energía necesaria para poder alcanzar la
absorbancia máxima, y la emisión máxima.

2. Diga cuáles son las formas coenzimáticas de la riboflavina y cuál es su papel

en el metabolismo celular
Flavina Adenina Dinucleótido (FAD) y Flavina Adenina Monucleótido (FMN)
Ambas forma parte esencial de la cadena respiratoria como coenzima del complejo
II.
3. Tres diferencias entre fluorescencia y fosforescencia
1) La fluorescencia es un fenómeno mucho más rápido de la fosforescencia, por
lo general se extingue en 10−5 𝑠, pero la fosforescencia se extingue en
cuestión de horas después de cesar la excitación.
2) Dado lo anterior, la fluorescencia es más importante en química analítica.
3) Los materiales fosforescentes dan lugar a emitir luz visible en la oscuridad.

4. Diga la estructuras resonantes de la riboflavina en medio ácido, básico y

neutro