Análisis clínico II

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ANÁLISIS CLINICOS II

PRACTICA N ° 3
TEMA: Determinación Enzimática de Triglicerídeos

DOCENTE: Q.F. Enrique León Mejía

TURNO: Mañana CICLO: VII

ALUMNAS: Torres Saavedra, Jacqueline Rosaura

Villanueva Velasquez, Liseth Madelein

FECHA DE ENTREGA: 25 de julio de 2018

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DETERMINACIÓN ENZIMÁTICA DE TRIGLICERIDOS

I- INTRODUCCION
Los triglicéridos son ésteres de glicerol y ácidos grasos que provienen de la dieta
o son sintetizados principalmente en el hígado. Los triglicéridos se transportan
en el plasma en las lipoproteínas y son utilizados por el tejido adiposo, músculo
y otros. Su principal función es suministrar energía a la célula. El mayor
contenido de los triglicéridos se encuentra en quilomicrones y VLDL. 1 Hasta la
década anterior se había prestado muy poca atención a los trastornos del
metabolismo de los triglicéridos. Las razones son varias, entre ellas la hasta
entonces falta de evidencias sólidas sobre la relación de los triglicéridos con el
riesgo de cardiovascular y la conspicua relación de los triglicéridos con otros
factores aterogénicos, la cual ha dificultado conocer su relación independiente
con el riesgo cardiovascular. Además, las concentraciones de triglicéridos en un
individuo determinado varían de forma muy acusada dependiendo de un gran
número de factores ambientales y de determinados trastornos, lo cual ha sido un
obstáculo para discernir su relación con el riesgo cardiovascular y para conocer
la eficacia de las medidas terapéuticas. Sin embargo, en la actualidad tenemos ya
suficientes evidencias, como se describe más adelante, sobre la relación
independiente entre los triglicéridos con el riesgo cardiovascular y se han
realizado distintos ensayos clínicos que han constituido una amplia base de
conocimientos sobre el beneficio de tratar el exceso de triglicéridos para
prevenir las enfermedades cardiovasculares.2 La prevalencia de las
hipertrigliceridemias va en aumento de forma paralela al aumento de la obesidad
y de la diabetes mellitus en la población.2 El diagnóstico clínico no debe
realizarse teniendo en cuenta el resultado de un único ensayo, sino que debe
integrar los datos clínicos y de laboratorio. Para las pruebas de perfil lipídico el
paciente debe estar en ayuno total excepto agua, durante un lapso de 12 a 24
horas antes de la prueba. No debe haber realizado ejercicio vigoroso y bajo la
dieta corriente el día anterior de la prueba.1

Dada a su importancia en esta práctica se aprenderá a determinar el triglicérido

en suero sanguíneo, para así poder descartar cualquier tipo patologías que puede
causar el nivel elevado o bajo de triglicéridos en nuestro organismo.

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II- MARCO TEORICO

Triglicéridos

Los esteres de los ácidos grasos y del alcohol glicerina se llaman acilglicéridos o
glicéridos; se les designa a veces como “grasas neutras”, término ya arcaico.
Cuando los tres grupos hidroxilo de la glicerina se hallan esterificados con
ácidos grasos, la estructura se llama triacilglicérido.3

Los triacilglicéridos
constituyen la familia más abundante de lípidos y los principales componentes
de los lípidos de depósito o de reserva de las células animales y vegetales. A los
triacilglicéridos, que son sólidos a temperatura ambiente, se les conoce
generalmente como grasas; los que son líquidos, como aceites. Los
triacilglicéridos, que funcionan como lípidos de depósito o de almacenamiento,
son activamente sintetizados en las células de los vertebrados, particularmente
en las células hepáticas y adiposas.3

Metabolismo de las lipoproteínas ricas en Triglicéridos

Los TAG son insolubles en el plasma y deben ser transportados, junto con el
colesterol y los fosfolípidos, dentro de partículas esféricas llamadas
lipoproteínas. Las lipoproteínas son partículas macromoleculares esféricas que
transportan lípidos en la sangre y presentan una parte central interna formada por
lípidos no polares y una monocapa superficial de lípidos polares. Además, tienen
una o más apolipoproteínas asociadas a la partícula. Hay cinco clases principales
de lipoproteínas según su densidad: quilomicrones (QM), lipoproteínas de muy

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baja densidad (VLDL), lipoproteína de densidad intermedia (IDL), lipoproteína

de baja densidad (LDL) y lipoproteína de alta densidad (HDL). Cada tipo
particular de lipoproteína tiene una composición lipídica y función definidas.
Conteniendo principalmente TAG en su parte central, los QM y las VLDL son
las principales partículas transportadoras de TAG en el plasma y son también las
lipoproteínas de mayor tamaño.4
Los QM transportan lípidos exógenos, obtenidos de la dieta y las VLDL lípidos
endógenos. A ambos tipos de lipoproteínas, y a sus remanentes, se les conoce
como las lipoproteínas ricas en TAG. Los QM son sintetizados en el intestino a
partir de los lípidos de la dieta y cuantitativamente hablando su principal
constituyente son los TAG. Las VLDL son producidas en el hígado con ácidos
grasos procedentes de tres fuentes endógenas: ácidos grasos provenientes de los
ácidos grasos unidos a la albúmina, ácidos grasos procedentes de los remanentes
de lipoproteínas captadas por el hígado y ácidos grasos sintetizados en el
hígado.4

Relación del Metabolismo de los Triglicéridos con la Aterosclerosis

TG se adherirían al endotelio, o bien a áreas dañadas de la pared vascular, donde
la LPL hidrolizaría estos lípidos de manera que, al reducir el tamaño de la
partícula, facilitaría su acceso al espacio subendotelial. Estos resultados son
compatibles con observaciones posteriores que mostraron que los remanentes de

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VLDL y QM pueden penetrar y ser retenidos en la pared arterial. Los

mecanismos precisos para el tránsito de estas partículas a través de la pared
endotelial no están esclaceridos, pudiendo tratarse de un proceso de transcitosis
o bien infiltración a través del espacio intercelular. La lipólisis de estas partículas
puede continuar en la íntima arterial en virtud de la acción de la LPL secretada
por los macrófagos allí presentes .Los AG liberados pueden ser captados por el
macrófago y posteriormente reesterificados. Pero, además, la lipólisis de las
lipoproteínas ricas en TG facilita la captación de la propia partícula por el
macrófago, puesto que éste posee diversos receptores capaces de reconocer los
remanentes de VLDL y QM, entre los que se encuentran, aparte del rLDL,
diversos receptores no regulados por el contenido celular de colesterol. Los
anteriores mecanismos conducen, en definitiva, a la deposición de lípidos
neutros en el citoplasma del macrófago, adquiriendo éste el aspecto de célula
espumosa, e incluso a la muerte celular, fenómenos ambos que acontecen en las
lesiones ateroscleróticas.4

Causas del aumento de triglicéridos

 Exceso del consumo de alimentos ricos en grasa y azúcares simples y
complejas.
 Algunos medicamentos.
 Herencia.
 Estrés.
 Exceso del consumo de bebidas alcohólicas.
 Sedentarismo.
Los triglicéridos aumentan por exceso de consumo de alimentos ricos en:

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 Azúcares simples como azúcar de mesa, dulces, helados, mieles,

chocolates, entre otros.
 Azúcares complejos como el pan, galletas, repostería, cereales de
desayuno, pastas, arroz, verduras harinosas como camote, yuca, plátano,
etc.5
Diagnóstico clínico
Se recomienda evaluar los niveles de colesterol total, triglicéridos y colesterol-
HDL en todos los pacientes adultos. Las mediciones no deben realizarse en los
sujetos que en las últimas seis semanas hayan sufrido estrés físico, incluidas
enfermedades intercurrentes agudas, cirugía o pérdida de peso. En relación con
los límites de normalidad de los lípidos, se ha considerado su evaluación con
base en el riesgo cardiovascular.
La elevación de los triglicéridos como un factor de riesgo independiente. No
obstante, hay controversia en relación con esta aseveración. Los mecanismos
conocidos de la asociación de hipertrigliceridemia con aterosclerosis son
múltiples. La hipertrigliceridemia se relaciona con mayor prevalencia de
diabetes, obesidad e hipertensión arterial.6

Tratamiento
Evite azucares y concentrados altos en azúcar como; jugos, sodas, pasteles, pan
blanco, pasta, arroz, agregar azúcar o miel.
• Evite bebidas alcohólicas
• Incluya grasas Omega 3: consuma dos a tres porciones de pescado por semana
o consuma suplementos de aceite de pescado que sean aprobados por su médico
o nutricionista. Incluya grasas monoinsaturadas como son el aceite de oliva,
aceite de canola, aguacate, almendras y maní.
Incluya productos de soya en su dieta como leche de soya, tofu y fibra soluble
como hojuelas de avena, pulpa de fruta, vegetales y legumbres.
Inclemente su actividad física cardiovascular y de resistencia. • Reduzca su peso
si esta pasado de kilos.

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III- PARTE EXPERIMENTAL

Materiales y Equipos a usar:

 Centrifuga

 Espectrofotómetro

 Cubetas

 Micropipetas

 Tips o puntas

 Tubos de prueba 13 x 100

 Gradillas

 Pisetas

 Ligaduras

 Alcohol

 Agujas

 Guantes descartables

Reactivos:

 GliceroKinasa

 Glicerol-3-fosfato oxidasa

 Peroxidasa

 Sol Estándar [200mg/dL]

PROCEDIMIENTO
Obtención de la M.P. suero sanguíneo
Para este análisis, la persona a quien se la va extraer la sangre tiene que estar con
12 horas de ayuno aproximadamente.
Extracción de sangre venosa
Extraer la sangre en un tubo de ensayo, aproximadamente la mitad del tubo.

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Luego de la extracción, lo llevamos a centrifugar por 10 minutos a 2500 RPM

con una cantidad de agua igual al de la muestra en otro tubo de ensayo y lo
pusimos frente a la muestra para poder equilibrar.

Finalmente se obtuvo la M.P de suero sanguíneo

Determinación de triglicéridos
Técnica
1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2. Pipetear en tubos rotulados:

Tubos Blanco St M

R. Enzimática(Ml ) 1 mL 1mL 1mL

H2O(μL) 10 μL -

Sol. Stand (μL) 10 μL

Suero sanguíneo(μL) - - 10 μL

Mezclar 20 minutos a temperatura ambiente. Leer la absorbancia a 520 nm.

Vamos a coger tres tubos de ensayo rotulados (blanco, solución estándar y

muestra) vamos a colocar 1mL del R. Enzimático a cada uno de los tubos,
luego al tubo de blanco agregar 10 μL de agua y al tubo Sol.Standar agregar 10
μL de solución estándar.

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Standar y blanco

Finalmente al tubo de la muestra agregar 10 microlitros de suero sanguíneo.

Mezclamos e incubamos 20 minutos a temperatura ambiente

Leemos la absorbancia(A) en el espectrofotómetro a - 520 nm.

IV- RESULTADOS:

RESULTADO DE ABSORVANCIA
Estándar 0.040
M. de Jacqueline 0.068
M. de Liseth 0.005
CALCULOS

Tg (mg/dL) = F X Abs X M.
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Rango de referencia

25 – 160 mg/ dL o mg%

Jacqueline:

5000 X 0.044 = 220 Triglicérido elevado según los rangos de referencia.

Liseth:

5000 X 0.05 = 25. Triglicérido normal según los rangos de referencia.

V- INTERPRETACIÓN:
Los triglicéridos se encuentran elevados en Jacqueline (220 mg/ dL) que
puedes tener diferentes causas como:

Exceso de peso: los triglicéridos aumentan generalmente a medida que

aumenta el peso.

Consumo excesivo de calorías: Los triglicéridos se elevan a medida que se

aumenta de peso o se ingieren demasiadas calorías, especialmente
provenientes de azúcar y del alcohol. El alcohol aumenta la producción de
triglicéridos en el hígado.

Medicamentos: Algunas drogas como los anticonceptivos, esteroides,

diuréticos causan aumento en los niveles de los triglicéridos, que determina
enfermedades como la diabetes, las enfermedades del hígado, del tiroides y
del riñón.

También las embarazadas pueden tener cifras elevadas de triglicéridos en

sangre. Junto con la diabetes, las causas más frecuentes de triglicéridos
elevados son la obesidad y el consumo de alcohol.

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VI- CUESTIONARIO

1. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de los triglicéridos?

Sus concentraciones son de indiscutible valor diagnóstico y pronóstico ya

que están directamente correlacionadas con el inicio y progresión de las
enfermedades vasculares de tipo ateroscleróticos, lo cual incrementa el
riesgo de sufrir ataque cardiaco y accidente cerebrovascular. Las cuales
constituyen las primeras causas de muerte en el mundo.

2. ¿Cómo trabajaría Ud. Un suero lipémico, para la determinación

bioquímica?
Las interferencias analíticas pueden causar errores clínicamente
significativos en los resultados de una magnitud biológica, lo que conduce a
establecer diagnósticos equivocados, aplicar tratamientos innecesarios o
potencialmente desfavorables para los pacientes; además, conlleva a los
laboratorios clínicos a gastos extras de reactivos, un mayor desgaste de
equipos y demora en la emisión de resultados. Tradicionalmente, la lipemia
se define como la turbidez en las muestras de suero o plasma, producida por
acumulación de partículas de lipoproteínas, especialmente las de densidad
muy baja (VLDL) y los quilomicrones que son ricos en triglicéridos.

Entre las causas más frecuentes de la ocurrencia de muestras lipemias en el

laboratorio se encuentran: el insuficiente tiempo entre la ingesta de alimentos
y la obtención de muestra sanguíneas, algunas enfermedades metabólicas
como la diabetes mellitus, hipertrigliceridemia, insuficiencia renal crónica,
hipotiroidismo, pancreatitis, mieloma múltiple, cirrosis biliar primaria o
lupus eritematoso, la obtención de muestras sanguíneas después de infusión
intravenosa con emulsiones lipídicas para nutrición parenteral, la ingestión
de alcohol y fármacos como los inhibidores de proteasa, estrógenos,
anticonceptivos orales, entre otros .
Existen varios criterios para establecer el límite de error máximo admisible
para este tipo de interferencia. La mayoría de proveedores de reactivos
consideran una interferencia por lipemia significativa cuando el resultado de
la muestra con interferente se desvía en 10%. Este criterio es más permisivo

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en las magnitudes con pequeña variabilidad biológica y puede ser menos

permisivo en aquellas con elevada variabilidad intraindividual o
interindividual.7
3. ¿Qué recomendaciones daría Ud. Al paciente para obtener una buena
muestra de sangre?

El ayuno no debe ser mayor de 12 horas ni menor de 10 horas. La noche

anterior a su examen ingerir la última comida entre 7:00 PM y 8:00 PM,
idealmente libre de grasas.

No ingiera bebidas alcohólicas antes de 72 horas.

Prohibido fumar antes o durante sus exámenes de laboratorio.

Si viene de realizar una actividad que demande esfuerzo físico, debe

permanecer en reposo durante 30 minutos e informar al personal del
laboratorio antes de tomar sus muestras.

4. ¿Cuál es el fundamento del método para la determinación de

Triglicéridos?

Los triglicéridos son hidrolizados por una lipasa específica liberando ácidos
grasos y glicerol. El glicerol es fosforilado por la enzima gliceroquinasa y
posteriormente, el glicerol-1-fosfato es oxidado a dihidroxiacetona fosfato
por la enzima glicerol-fosfato oxidasa, generándose peróxido de hidrógeno.
Posteriormente, en una reacción del tipo Trinder, el peróxido de hidrógeno
reacciona con 4-Aminoantipirina y el ácido 3,5-Dicloro-2-Hidroxi-
bencensulfónico para producir por medio de la enzima peroxidasa un
compuesto coloreado en cantidad proporcional a la concentración de
triglicéridos presente en la muestra, midiéndose la absorbancia a 520 nm.

Triglicéridos Lipasa Glicerol ácidos grasos

Glicerol GK Glicerol-3-fosfato ADP

Glicerol-3-fosfato O2 GPO Dihidroxiacetonafosfato H2O2

2H2O2 4 AAP DCBS PAP Comp.Coloreado 4H2O

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VII- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Unidad Didáctica Bioquímica [internet]. Determinación de Triglicéridos:
Practica de Laboratorio: Universidad de San Carlos de Guatemala: 2017.[Citado
el 21 de julio de 2018].Disponible en:
https://bioquimica11usac.files.wordpress.com/2012/07/lab_4_manual_2017.pdf
2. Pinto X[internet]. Protocolos Hipertrigliceridemias: Sociedad Española de
Medicina Interna: 2008[Citado el 21 de julio de 2018].Disponible en:
https://www.fesemi.org/sites/default/files/documentos/publicaciones/capitulo-
1_3.pdf
3. Parreño J, Gutiérrez E[internet]. Colesterol y Triglicéridos y su Relación con el
Índice de Masa Corporal en Pacientes Adultos en Lima Metropolitana: Revista
de Investigación de la Universidad Norbert Wiener; 2010. [Citado el 27 de julio
de 2018]. Disponible en:
http://intranet.uwiener.edu.pe/univwiener/portales/centroinvestigacion/document
acion/revista_1/003_PARRE%C3%91O_GUTIERREZ_REVISTA_1_UNW.pdf
4. Carvajal C[internet]. Los Triglicéridos y la Aterogénesis: Medicina Legal de
Costa Rica - Edición Virtual; Vol. 34 (2), 2017.[Citado el 21 de julio de
2018].Disponible en: http://www.scielo.sa.cr/pdf/mlcr/v34n2/1409-0015-mlcr-
34-02-00082.pdf
5. Unidad de Promoción de la Salud [internet]. Triglicéridos.[Citado el 21 de julio
de 2018].Disponible en: file:///C:/Users/pc/Downloads/Trigliceridos%20altos
%20(2).pdf
6. Canalizo E, Favela E, Salas J[internet]. Guía de práctica clínica Diagnóstico y
tratamiento de las dislipidemias: Rev Med Inst Mex Seguro Soc.
2013;51(6):700-9.[Citado el 21 de julio de 2018]. Disponible en:
http://www.medigraphic.com/pdfs/imss/im-2013/im136t.pdf
7. Saldaño o, Italo M. [Internet]. Interferencia en las determinaciones de 24
constituyentes bioquímicos en el autoanalizador. 2016. Disponible en:
http://www.redalyc.org/pdf/379/37946641009.pdf

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