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ASIGNATURA: ANÁLISIS INSTRUMENTAL

CARRERA: INGENIERIA QUIMICA

CLAVE DE LA ASIGNATURA: AEF - 1003

SATCA: 3-2-5

SEMESTRE: CUARTO

ELABORADO POR: ING. MA. ISABEL GONZALEZ MORALES

Revisión Autorización
Ing. Pedro Salvador Rosas
H. Academia de Jefe de División de
Ingeniería Química Ingeniería Química

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ÍNDICE DE PRÁCTICAS

No. de Nombre de la práctica Página


Práctica
No.1 Reglamento de Laboratorio 5

No. 2 Elaboración de una curva de calibración con un 7


estándar externo.

No. 3 Uso y aplicación del turbidímetro. 10

No. 4 Curva de calibración para determinar la linealidad del 13


espectrofotómetro

No. 5 Comprobación experimental de la ley de Bouguer-Beer 17

No. 6 Determinación de níquel en una muestra de agua 21


mediante espectrofotometría de absorción atómica.

No. 7 Cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) 25

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PRESENTACIÓN

El presente manual tiene como finalidad que los estudiantes tengan la capacidad para
explicar fenómenos involucrados en los métodos de análisis instrumental para la
identificación y cuantificación de sustancias de interés científico, ambiental e industrial
vistas a nivel laboratorio y su proyección a escala. El Ingeniero Químico tiene la
capacidad de diseñar, seleccionar, adaptar, escalar equipos y procesos en los que se
aprovechen de manera sustentable los recursos Químicos, Petroquímicos, identificar y
aplicar tecnologías emergentes relacionadas con el campo de acción, participar en el
diseño y aplicación de normas y programas de gestión, aseguramiento de la calidad, en
empresas e instituciones del ámbito de la Ingeniería Química, realizar investigación
científica y tecnológica y difundir sus resultados.

Durante el desarrollo de la materia se realizaran una serie de ejercicios que le permitan


al estudiante ser capaz de elegir de manera certera el método instrumental de análisis
que llevara a cabo en el desarrollo de una investigación, posteriormente se abarcan los
temas más importantes referidos a las principales habilidades que el estudiante del área
de Química debe desarrollar en el aprendizaje de su trabajo en un laboratorio.

Como parte del manual de prácticas se desarrollaran cada una de estas de la siguiente
forma: iniciando con el reglamento que rige al laboratorio de Bioquímica y Química,
seguido de la elaboración de una curva de calibrado utilizando un estándar externo, uso
y aplicación de un turbidímetro, una curva para determinar la linealidad y manejo del
espectrofotómetro, Comprobación experimental de la ley de Bouguer-Beer,
Determinación de níquel en una muestra de agua mediante espectrofotometría de
absorción atómica, así como el manejo de la cromatografía de líquidos de alta
resolución HPLC y el conocimiento de los distintos equipos manejados en análisis
instrumental.

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COMPETENCIAS A DESARROLLAR.

Competencias específicas Competencias genéricas


Comprenderá los principios generales Competencias instrumentales
de la absorción de la radiación
 Capacidad de análisis y síntesis.
electromagnética y espectrometría de
masas y los aplicará como métodos  Capacidad de organizar y planificar
analíticos para la identificación de  Conocimientos básicos de la carrera
sustancias y cuantificación de las  Comunicación oral y escrita en su propia
mismas en trabajos de investigación, lengua.
resolución de problemas y toma de  Habilidades básicas de manejo de la
decisiones. computadora.
 Habilidad de gestión de información.
 Solución de problemas
 Toma de decisiones

Competencias interpersonales
 Capacidad crítica y autocrítica
 Trabajo en equipo
 Habilidades interpersonales
 Capacidad de trabajar en equipo
interdisciplinario.
 Compromiso ético
 Capacidad de comunicarse con profesionales
de otras áreas.

Competencias sistémicas
 Capacidad de aplicar los conocimientos
 en la práctica
 Habilidades de investigación
 Capacidad de aprender
 Capacidad de generar nuevas ideas
 (creatividad)
 Habilidad para trabajar en forma
 Autónoma
 Búsqueda del logro

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Práctica No. 1
Nombre de la práctica: REGLAMENTO DE LABORATORIO.

1. Competencia específica a desarrollar.

El estudiante recordará las normas que rigen la entrada y estancia dentro del
laboratorio de Ingeniería Química- Bioquímica, para la realización de prácticas en el
mismo, por parte de cualquiera de las asignaturas.

2. Introducción.

El reglamento de laboratorio es la normativa vigente, dentro de ésta área de trabajo,


para poder realizar de manera eficiente y sin riesgos, la totalidad de las prácticas
asignadas por el docente o academia correspondiente para el mejor aprovechamiento
de la asignatura por parte del alumno.
En él, se consideran los puntos de asistencia a clases, vestimenta, equipo de seguridad
y protección personal, reactivos, equipos de laboratorio y requisitos generales de
acceso y permanencia en él.
De igual manera importante es la estancia dentro de las instalaciones. Por lo que
también, se hacen algunas prohibiciones que deben tomarse en cuenta con mucha
atención.

3. Material, Equipos y Reactivos

Materiales Equipos Reactivos Equipo de


seguridad
 Copia del reglamento  N.A. . N.A N.A
oficial vigente del
laboratorio de Ing.
Bioquímica y Química
del ITESCO.
 Norma mexicana  N/A N/A N.A
NOM-005-STPS-1998

PONER N.A. EN CASO DE QUE NO APLIQUE.

4. Procedimiento.
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a) De forma grupal, leer el reglamento oficial vigente del laboratorio de Ing.


Bioquímica y Química del ITESCO.

b) Al término de la lectura (o según lo indique el docente), comentar los aspectos


que no se consideren claros

c) Realizar una breve visita (acompañados por el docente) a todas las áreas del
laboratorio de Ing. Bioquímica y Química del ITESCO e identificar claramente el
área destinada para la elaboración de las prácticas de la asignatura de
Bioquímica.

d) De forma general contrastar el reglamento de laboratorio con la norma NOM-005-


STPS-1998

5. Cuestionario.

a) Cuál es la importancia de contar con un reglamento en el laboratorio escolar?

b) Sabes quién es el encargado del mismo? De ser afirmativa la respuesta, escribe


su nombre, o en su defecto investiga al respecto.

c) Sabes a quien acudir si existe algún problema o accidente? De ser afirmativa la


respuesta, escribe su nombre, o en su defecto investiga al respecto.

6. Referencias bibliográficas.

 Reglamento de laboratorio de Ingeniería Bioquímica y Química del Instituto


Tecnológico Superior de Coatzacoalcos.

 Norma mexicana NOM-005-STPS-1998

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Práctica No. 2
Nombre de la práctica: Elaboración de una curva de calibración con un estándar
externo.

1. Competencia específica a desarrollar.

Elaborar una curva de calibración con una solución patrón externa, utilizando
sacarosa como analito, para posteriormente leer la concentración de una muestra
problema.

2. Introducción.

La mayor parte de los métodos analíticos son relativos, es decir el contenido de analito
en la muestra se obtiene a través de un patrón de referencia. Se denomina disolución
patrón o estándar a una disolución de concentración exactamente conocida. La gráfica
que representa la respuesta analítica en función de la concentración del analito
correspondiente se llama curva de calibrado o curva estándar.

En la calibración con un estándar externo, la muestra se prepara por separado del


estándar. La propiedad analítica medida depende de manera conocida y reproducible
de la concentración del analito. En teoría, la medida de la propiedad es directamente
proporcional a la concentración. Los estándares externos se usan para calibrar
instrumentos y procedimientos cuando no hay efectos de interferencias de los
componentes de la matriz en la disolución del analito.

Se preparan una serie de estándares externos de distintas concentraciones conocidas


del analito. Idealmente se utilizan tres o más disoluciones en el proceso de calibración.
La calibración con un único patrón, no es recomendable pues conlleva un alto riesgo de
error.

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La calibración se lleva a cabo al obtener la señal de respuesta como función de la
concentración conocida del analito. Al representar gráficamente los datos y ajustarlos a
una ecuación matemática se obtiene la curva de calibrado.

Cuando se emplean estándares externos, se supone que cuando en la muestra y el


estándar esté presente la misma concentración de analito, se obtendrá la misma
respuesta. Sin embargo, esto no siempre ocurre así y en esos casos es necesario
recurrir a otros métodos de calibración como el del estándar interno o el de adiciones
estándar a las muestras.

3. Material, Equipos y Reactivos

Materiales Equipos Reactivos Equipo de


seguridad
7 Matraces aforados de 50 mL 1 Balanza analítica 100 gr Sacarosa. Bata de algodón
2 Vasos de precipitados de 250 1 Refractómetro de 100 mL Muestra manga larga
mL. mano por equipo. problema con Zapatos cerrados
Lentes de
1 Espátula. contenido de
seguridad
1 Vidrio de reloj. 500 mL azúcar. Guantes de látex
1 Agitador. Agua destilada.
1 Pizeta.
1 Pipeta
1 Pipeta graduada de 10 ml

4. Procedimiento.

1. Hacer los respectivos cálculos para preparar 50 mL de cada uno de los


estándares, desde el cero hasta el 35% de sacarosa.

2. Una vez tenidas las cantidades de sacarosa necesarias, pesar en la balanza


analítica dichas medidas y aforar a 50 mL con cada uno de los matraces.

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3. Hechos los estándares externos, leer el contenido de grados Brix de cada uno en
el refractómetro de mano.

4. Teniendo los grados Brix de cada uno de los estándares, elaborar la curva de
calibración de estándar externo.

5. Leer cada una de las muestras problema con contenido de azúcar en el


refractómetro de mano.

Ubicar las muestras problema dentro de la curva de calibración de estándar externo y


obtener el porcentaje de sacarosa contenida en cada una.

5. Cuestionario.

1.- ¿Qué es una disolución patrón?

2.- ¿En qué consiste la calibración?

3.- ¿Qué es un estándar externo? ¿Cuándo se emplean?

4.- ¿Qué significado y usos tiene un refractómetro?

6. Referencias bibliográficas.

1.- Sierra Alonso, I. Análisis instrumental: Algunas herramientas de enseñanza-


aprendizaje adaptadas al EEES Volumen 1 de Análisis instrumental. España: Netbiblo.
(2009)

2.- http://ocw.um.es/ciencias/analisis-quimico/material-de-clase-1/tema-1.pdf

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Práctica No. 3
Nombre de la práctica: USO Y APLICACIÓN DEL TURBIDIMETRO
.

1. Competencia específica a desarrollar.

Conocer los fundamentos para la utilización del turbidímetro y poder medir la turbidez
en una muestra problema.

2. Introducción.

Se entiende por turbidez o turbiedad la falta de transparencia de un líquido debida a la


presencia de partículas en suspensión. Cuantos más sólidos en suspensión haya en el
líquido (generalmente se hace referencia al agua), más sucia parecerá ésta y más alta
será la turbidez. La turbidez es considerada una buena medida de la calidad del agua,
cuanto más turbia, menor será su calidad.

El turbidímetro es un instrumento nefelométrico que mide la turbidez


causada por partículas suspendidas en un líquido. Haciendo pasar un rayo de luz a
través de la muestra, se mide la luz reflejada por las partículas en un ángulo de 90º con
respecto al rayo incidente. Las lecturas se dan en UNT (Unidades Nefelométricas de
Turbidez).

El compuesto utilizado en la preparación de la solución patrón para la medición de la


turbidez es la formacina. La formacina se puede obtener utilizando sulfato de hidracina
y hexametilentetramina, se prepara en proporciones conocidas para formar el patrón de
turbidez de 400 UNT.

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3. Material, Equipos y Reactivos

Materiales Equipos Reactivos Equipo de


seguridad
5 Tubo de ensayo para cultivos. 1 Turbidímetro 40 Estándares de Bata de algodón
2 Vaso de precipitado de 250 mL turbidez de 0,02, manga larga
mL 10 y 1000 UNT. Zapatos cerrados
Pizeta Muestra Lentes de
1
problema (Agua seguridad
25 de la llave). Guantes de látex
mL Agua destilada

300
mL

PONER N.A. EN CASO DE QUE NO APLIQUE.

4. Procedimiento.

1. Encender el equipo en tecla ON/OFF.


2. Introducir cada uno de los estándares, presionar la tecla “Enter” para solicitar la
lectura.
3. Comparar la medición obtenida con la marcada en la etiqueta del estándar.
4. Verificar que tan bien funciona el equipo y conocer el error presente en las
mediciones.
5. Una vez calibrado el equipo, introducir la muestra problema y verificar la
medición.
6. Presionar nuevamente la tecla “Enter” para solicitar la lectura de la muestra
problema.

5. Cuestionario.

1.- ¿Qué significan las siglas UNT?

2.- ¿Qué importancia tiene el turbidimetro dentro del análisis instrumental?

3.- ¿Cuál es la relación de la Nefelometría con el Turbidímetro?

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6. Referencias bibliográficas.

1. http://www.conagua.gob.mx/CONAGUA07/Noticias/NMX-AA-038-SCFI-2001.pdf

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Práctica No. 4

Nombre de la práctica: Curva de calibración para determinar la linealidad del


espectrofotómetro

1. Competencia específica a desarrollar.

Construir la gráfica de una curva de calibración de la absorbancia contra la


concentración de un sistema para determinar la linealidad y calibración del equipo.

2. Introducción.

Una curva de calibrado representa la respuesta de un método analítico a


concentraciones conocidas analito. El espectrofotómetro mide la absorbancia de la luz
que es proporcional a la cantidad de sustancia analizada. Las disoluciones que
contienen concentraciones conocidas de analito se llaman disoluciones patrón o
estándar. Las disoluciones que contienen todos los reactivos y disolventes usados en el
análisis, pero sin analito se llaman disoluciones blancos o simplemente blancos. Los
blancos miden la respuesta del procedimiento analítico a las impurezas o especies
interferentes que existan en los reactivos.

Para construir una curva de calibración se deben preparar muestras conocidas del
analito que cubran un intercambio adecuado de concentraciones que cubran un
intervalo adecuado de concentraciones que disminuyan proporcionalmente al diluir cada
una a la mitad de la concentración anterior y medir después de la respuesta del
procedimiento analítico (absorbancia) a estos patrones.

Se traza después un gráfico con las absorbancias obtenidas frente a la concentración


de las muestras. Se traza una recta que mejor se ajuste a los datos situados del tramo
lineal.

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Se considera que un equipo está bien calibrado cuando se obtiene una buena
respuesta lineal de la señal analítica proporcional a la cantidad de analito.

Puede usarse el apoyo de la computadora para hallar automáticamente la recta por


ajuste de mínimos cuadrados y calcular la pendiente y también la ordenada en el
origen.

3. Material, Equipos y Reactivos

Materiales Equipos Reactivos Equipo de


seguridad
1 Matraz volumétrico de 100 ml 1 Espectrofotómetro 20 CoCl2 0.17 M Bata de algodón
tubos de ensaye de 16x150 1 UV-Visible mL en HCl. al 1% manga larga
10 mm Zapatos cerrados
Gradilla Agua destilada Lentes de
200
1 Pipeta graduada de 5 ml seguridad
Perilla mL Guantes de látex
1 Hoja de papel milimétrico
1 Regla
celdas para el
1 espectrofotometro

P1ONER N.A. EN CASO DE QUE NO APLIQUE.

4. Procedimiento.

1. Preparar tubos de ensaye con soluciones de CoCl2 0.17M en HCl al 1% cuyas


concentraciones vayan disminuyendo.
2. Tomar las lecturas de la absorbancia de cada uno de los tubos en el
espectrofotómetro UV-Visible.
3. Elaborar una gráfica obtenida y determinar si se presentó la linealidad
esperada.
4. Colocar una gradilla 5 tubos de ensaye, numerados del 1 al 4 y uno señalado
como blanco.

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5. Realizar las siguientes diluciones señaladas en la siguiente tabla:

Tubo N° 1 2 3 4 Blanco

CoCl2 3 ml 3 ml

Agua 3 ml y agitar 3 ml 3 ml

3 ml del 3 ml del
tubo 2 agitar tubo 3 agitar

HCl al 1% 3 ml

Concentración 1:1 1:2 1:4 1:8 0

Ver el siguiente esquema:

5. Cuestionario

1.- ¿Qué tipo de grafica se obtiene si hay linealidad en el equipo con las soluciones de
Cloruro de cobalto II?
2.- ¿Cuántos gr de Cloruro de cobalto II se deben pesar para preparar la solución 0.17
M?

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1. Bibliografía sugerida:
2. AYRES Gilbert H. ANALISIS QUIMICO CUANTITATIVO. Ed. Harla. México,
(1991).
3. HARRIS Daniel C. ANALISIS QUIMICO CUANTITATIVO. Grupo Ed.
Iberoamericano (1992)

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Práctica No. 5

Nombre de la práctica: Comprobación experimental de la ley de Bouguer-Beer.

1. Competencia específica a desarrollar.

Construir gráfica de calibración (absorbancia contra concentración) de un sistema en


que por medio de una reacción se desarrolla color, y determinar el límite de la ley de
Bouguer-Beer.

2. Introducción.

El hierro reacciona con la 1,10 fenantrolina, para dar un complejo anaranjado rojizo muy
estable. Esta reacción es la base de un sensible método de determinación de pequeñas
cantidades de hierro.
Puesto que solo los iones de ferrosos reaccionan con el reactivo es preciso reducir todo
el hierro (si se hallara en Hierro III) antes de iniciar el desarrollo del color. La
hidroxilamina sirve dentro de un intervalo de pH limitado, como excelente reactivo para
la reducción del hierro III a través de la siguiente ecuación:

2 NH2OH + OH- + 2 Fe+3 2 Fe+2 + N2 + 4 H2O

3. Material, Equipos y Reactivos

Materiales Equipos Reactivos Equipo de


seguridad
7 Matraz volumétrico de 100 1 Espectrofotómetro 2 mL Solución STD Bata de algodón
ml UV-Visible patrón de manga larga
7 Tubos de ensaye de 1 Balanza analítica sulfato ferroso Zapatos cerrados
16x125mm amoniacal Lentes de
6 Tubos de ensaye 16 x 150 (concentración seguridad
Guantes de látex
mm = 10mg % de
1
1 Gradilla Fe++
1 Pizeta 5 mL Solución
1 Pipeta graduada de 10 ml reductora de
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1 Perilla hidroxilamina
2 Celdas para 10 Solución Buffer
espectrofotómetro mL de pH=3
1 Bureta graduada 50 ml Solución de
20
1 Pinzas para bureta 1,10
1 mL
Soporte universal fenantrolina
Vasos de precipitado de Solución
150 ml problema
Agitador
Regla y papel milimétrico

PONER N.A. EN CASO DE QUE NO APLIQUE.

4. Procedimiento.
1. Efectuar cálculos necesarios para preparar en 6 matraces volumétricos de 100
ml, una serie cuya concentración sea la siguiente: 0.5 mg%, 1.0 mg%, 2.0 mg%,
3.0 mg%, 4.0 mg% y 5.0 mg%, a partir de la solución STD de concentración de
10 mg% de Fe+2.
2. La muestra problema recibido en un matraz volumétrico de 100 ml, deberá de
diluirse aforando a 100 ml con agua destilada.
3. Colocar el mismo volumen de cada uno de los matraces incluyendo el matraz
problema, en 7 tubos de ensayo y adicionar los reactivos desarrolladores de
color y esperar el tiempo necesario para que presente la coloración en todos los
tubos.
4. Realizar los cálculos para preparar 100 ml de las soluciones necesarias para la
elaboración de la curva de calibración.
5. Con los datos calculados llenar la siguiente tabla:

N° de matraz Concentraciones (mg % Ml de STD de Fe+2


Fe+2
Blanco 0 0
1 0.5
2 1.0
3 2.0
4 3.0
5 4.0
6 5.0

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6. Medir con una bureta ámbar las cantidades calculadas del STD de Fe+2 y
depositarlas en matraces volumétricos de 100 ml numerados del 1 al 6 y aforar con
agua destilada. Colocar el tapón de cada matraz y homogenizar.
7. Recibir en un matraz volumétrico de 100 ml la muestra problema y aforarla
cuidadosamente con agua destilada, homogeneizando la mezcla de la misma
manera que los matraces del punto 2. Etiquetar como PROBLEMA.
8. Tomar una alícuota de 10 ml de la solución problema y colocarlo en un tubo de 16 x
150mm y etiquetado como problema
9. Depositar en otro tubo 10 ml de agua destilada y etiquetado BLANCO.
10. Colocar 6 tubos de 16 x 150 mm limpios y secos y numerados del 1 al 6.
11. Medir 10 ml de cada matraz preparado, utilizando diferentes pipetas volumétricas
para cada uno, y depositarlos en los tubos correspondientes según su número.
12. Agregar a cada tubo de la serie preparada, al tubo problema y al tubo blanco , 0.2 ml
de solución amortiguadora (pH=3), 0.2 ml de solución reductora de hidroxilamina y
0.2 ml de solución de 1
13. Seleccionar la longitud de onda de 525 nm y leer las absorbancias de las soluciones
de los tubos de 1 a 6 y muestra PROBLEMA en el espectrofotómetro calibrándolo
antes de realizar cada lectura con el tubo marcado con BLANCO.
14. Leer las absorbancias de cada uno de los tubos en el espectrofotómetro UV-visible.
15. Elaborar la curva de calibración correspondiente, graficando las concentraciones vs.
Las absorbancias y determinar la concentración del problema mediante la curva.

5. Cuestionario

1. ¿Cuál es el enunciado de la ley de Lambert-Beer?


2. Investiga el fundamento de la espectrofotometría de absorción.
3. Dibuja el diagrama óptico de los elementos que constituyen un espectrofotómetro
simple

6. Bibliografía sugerida:

1. AYRES Gilbert H., ANALISIS QUIMICO CUANTITATIVO. Ed. Harla. México. (1991)
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2. HARRIS Daniel C., ANALISIS QUIMICO CUANTITATIVO. Grupo Ed.


iberoamericano (1992)
3. SKOOG D., WEST D.M HOLLER F.J. QUIMICA ANALITICA.Ed. McGraw-Hill.
6a.Ed.1995

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Práctica No. 6

Nombre de la práctica: Determinación de Níquel en una muestra de agua mediante


espectrofotometría de absorción atómica.

1. Competencia específica a desarrollar.

Identificar los componentes del espectrofotómetro de absorción atómica, relacionar los


aspectos fundamentales del método y realizar la determinación del contenido de las
trazas de níquel presentes en una muestra de agua, mediante este quipo.

2. Introducción.

Cuando la disolución de una sal metálica se atomiza en una llama a temperatura


elevada, se evapora el disolvente, se vaporiza la sal y las moléculas se disocian en
átomos neutros. Algunos de estos átomos puedes resultar excitados por la energía
térmica de la llama; al recuperar su estado electrónico normal emiten luz, fenómeno que
constituye el fundamento de la fotometría de emisión de llama. No obstante, la mayor
parte de los átomos, probablemente en un orden del 99%, quedan sin excitar y en
condiciones adecuadas para absorber energía radiante de las frecuencias
características de sus líneas de resonancia, con transición desde su estado
fundamental a un nivel de energía más elevado.
En la espectrofotometría de absorción atómica la fuente de energía radiante está
constituida precisamente por el elemento que se requiere determinar; al someter esta
fuente a una excitación eléctrica se produce la emisión de una radiación formada por
sus frecuencias características; así por ejemplo, si se va a determinar sodio, la fuente
puede ser una lámpara convencional de capos de sodio. En la determinación de los
demás elementos, que no sean alcalinos ni mercurio (para las cuales se utilizan
lámparas de vapor) la fuente es un tubo de descarga o una lámpara en el que el cátodo
es cilíndrico y está formado por el elemento que se investiga; el tubo cerrado tiene
como gas portador argón o hielo a baja presión (1-1 mm de Hg).

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Aplicado a una potencia de varios cientos de voltios a los electrodos que producen
emisión catódica de radiación características del material de cátodo. Si este haz de
energía se hace pasar por una muestra vaporizada interpuesta entre la fuente de
radiación y la rendija de estrada de un monocromador dispuesto para seleccionar la
línea espectral que interese en cada caso, se podrá determinar la fracción de energía
de dicha línea absorbida por la muestra. La intensidad de la línea espectral se mide
mediante un tubo fotomultiplicador y amplificador, primeramente sin muestra vaporizada
interpuesta en el camino óptico; el descenso de intensidad observado es proporcional al
número de átomos del elemento que se investigan que se encuentran en el camino del
haz. Habiendo una calibración con cantidades conocidas del elemento problema se
constituye una curva de calibración. El principio de este método es análogo al de la
espectrofotometría de absorción convencional de disoluciones o de líquidos, excepto a
lo que se refriere a la naturaleza de la fuente de energía y al estado físico de la
muestra.
Los quemadores utilizados en la vaporación de la muestra presentan normalmente una
rendija de salida larga y estrecha, colocada de forma paralela al rayo de propagación
del haz que procede de la fuente energética; de esta manera existen muchos átomos
absorbentes en el camino del haz y se haces mayor sensibilidad. Se puede conseguir
un aumento adicional de sensibilidad utilizando espejos reflectores que obliguen al haz
a travesar varias veces el vapor de la muestra antes de la medida de la intensidad.
Cuando se manejan concentraciones elevadas puede ser conveniente utilizar líneas
espectrales más débiles.
La espectrofotometría de absorción atómica, introducida por Walsh, se ha aplicado ya al
análisis de unos 50 elementos en una amplia variedad de materiales y cada día
aparecen nuevas aplicaciones. Aunque la espectrofotometría de llama de absorción y
de emisión presenta en común varias fuentes de error, algunas de ellas son más fáciles
de evitar o minimizar en los métodos de absorción que en los de emisión. El método es
especialmente útil para la determinación de elementos que vaporizan sin excitarse
apreciablemente en llamas de elevadas temperaturas de oxi-acetileno o similares.

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3. Material, Equipos y Reactivos

Materiales Equipos Reactivos Equipo de


seguridad
6 Matraces aforados de 100 ml 1 Espectrofotometría 2 mL STD de niquel Bata de algodón
Matraz aforado de 1000 ml de absorción atómica de 1000 ppm manga larga
3 Vaso de precipitado de 250 ml 3 Pipeta de 10 a 100 20 HNO3 Zapatos cerrados
Pizeta µl concentrado Lentes de
mL
Pipeta graduada de 5 ml Agua seguridad
Perilla 100 desionizada Guantes de látex
1 Vaso de precipitado de 250 ml mL Muestra
problema de
agua.

PONER N.A. EN CASO DE QUE NO APLIQUE.

4. Procedimiento.

1. Preparar la muestra adicionando 3 ml de HNO3 concentrado por cada 100 ml de


muestra con la finalidad de que cualquier átomo de níquel se convierta en la sal de
nitrato soluble.
2. Si se observan partículas sin disolver aun, adicionar 3 ml de HCl concentrado por
cada 100 ml de muestra con el fin de convertir el níquel en cloruro soluble.
3. Preparar diluciones de un STD de níquel en solución de HNO 3 al 3% para elaborar
la curva de calibración en el EAA, leyendo las absorbancias de las disoluciones en
las mismas condiciones de las muestras.
4. Utilizar lámpara de cátodo hueco con el filamento de níquel.
5. Encender el quemador del equipo utilizando una mezcla de aire-acetileno como
combustible.
6. Utilizar una solución de HNO3 al 3 % como Blanco.
7. Obtener lecturas de absorbancias de las diluciones STD y la muestra problema y
verificar la gráfica y la lectura que proporciona el equipo.
8. Preparar los STD de 10,0 5,0 2,0 1,0 y 0,5 ppm de níquel en HNO3 al 3 %. (se
pueden preparar 100 ml de cada uno).
9. Preparar un vaso de pp de 250 ml con agua des-ionizada para lavar el capilar, orto
con HNO3 al 3% rotulado como Blanco y otro con la muestra problema.

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10. Siguiendo las instrucciones de manejo del EAA, crear el método correspondiente
para la determinación de las ppm de níquel en una muestra de agua, programado la
longitud de onda a que absorbe el níquel, ajustar con la función de los mínimos
cuadrados, la secuencia adecuada para realizar la calibración mediante la lectura de
los 5 estándares leer las muestras deseadas.

5. Cuestionario
1. ¿Por qué se le conoce a este método con el nombre de espectrofotometría de
absorción atómica?
2. ¿Cuál es la longitud de onda que absorbe el níquel?
3. ¿este procedimiento se rige también por la ley de Bouguer-Beer?Explique la
respuesta ya sea negativa o positiva

6. Bibliografía sugerida
1. HARRIS Daniel C. ANALISIS QUIMICOS CUANTITATIVOS. Grupo Ed.
Iberoamericano (1992)
2. SKOOG D., WEST D.M. HOLLER F.J. QUIMICA ANALITICA. Ed. McGraw-Hill.
6a.Ed. 1995.

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Práctica No. 7

Nombre de la práctica: Cromatografía de líquidos de alta resolución HPLC.

1. Competencia específica a desarrollar:

Comprender el fundamento teórico de la cromatografía de líquidos de alta resolución y


conocer los componentes de este equipo.

2. Introducción:

La cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) es, dentro de las técnicas


cromatográfica, el más utilizado. El proceso de separación cromatográfica puede
definirse como la transferencia de masas entre una fase estacionaria y una móvil.
La mezcla que contiene los compuestos a separar es disuelta e inyectada en una
columna rellena de fase estacionaria a través de la cual es forzada a pasar por una fase
móvil impulsada por la bomba de alta presión. Dentro de la columna la mezcla se
separa en sus componentes en función de su interacción entre las dos fases.
Esta separación puede ser modificada eligiendo adecuadamente tanto la fase móvil
como la estacionaria, el flujo de la fase móvil o la temperatura de la separación. De esta
forma la técnica de HPCL adquiere un alto grado de versatilidad difícil de encontrar en
otras técnicas, siendo capaz de separar los componentes de una gran variedad de
mezclas.

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3. Material, Equipos y Reactivos

Materiales Equipos Reactivos Equipo de


seguridad
1 Accesorios para cromatógrafo 1 Cromatógrafo de 50mL Mezcla de Bata de algodón
de líquidos de alta resolución. líquido de alta alcoholes manga larga
resolución. Zapatos cerrados
Lentes de
seguridad
Guantes de látex

PONER N.A. EN CASO DE QUE NO APLIQUE.

4. Procedimiento:

1. Investigar el fundamento teórico del funcionamiento del HPLC.


2. Investigar cuales son los componentes y accesorios del HPLC CECIL modelo
ADEPT SYSTEM 4.
3. Identificar cada una de las partes en el equipo del laboratorio.
4. Investigar una técnica para separación de compuestos mediante el HPLC.

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Actividades a desarrollar.
1. Elaborar un resumen de una o dos cuartillas máximo con la investigación requerida
sobre el HPLC.
2. Consultar el manual del equipo de Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución
(HPLC) marca CECIL, modelo ADEPT SYSTEM 4 que se encuentra en el
laboratorio de Ingeniería Bioquímica y Química del ITESCO. y elaborar una lista de
todos los componentes y accesorios con que cuenta este equipo.
3. Por equipo identificar cada uno de los componentes del HPLC con asesoría del
docente.
4. Por equipo entregar la técnica investigada en limpio, realizada en computadora e
impresa en hojas tamaño carta y que contenga:
a) Hoja de presentación.
b) Título de la técnica.
c) Objetivo.
d) Introducción.
e) Tabla con el material, reactivo y equipos necesarios.
f) Procedimiento.
g) Bibliografía.

5. Cuestionario:

1. ¿Cuál es el motivo por el cual este equipo debe poseer un sistema de bombeo para
hacer circular la fase móvil?
2. ¿Cuál es la función del desgasificador y porque es necesario su empleo en este
instrumento?
3. ¿En qué ocasiones se requiere colocar la columna en un comportamiento
termostátizado?.

6. Referencias bibliográficas:

1. HARRIS Daniel C. ANALISIS QUIMICO CUANTITATIVO. Grupo Ed. Iberoamericano


1992.

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2. SKOOG D., WEST D.M. HOLLER F.J. QUIMICA ANALITICA. Ed. Mc Graw-Hill. 6a Ed.
1995.

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