Grupo 2- Subgrupo 2

Macromoléculas de levadura

Obtención e identificación de proteínas

Metodología: Se siguió el protocolo de bioseguridad citado por Burbano (2014). Con las siguientes
modificaciones:

a) Solo se añadió la punta de una cuchara en arena y levadura

b) Se agregó 5 ml de ácido tricloroacético al 5% en lugar de 10 ml
c) En la primera centrifugación el tubo de ensayo revienta por lo cual se procede a realizar
nuevamente la centrifugación.

Figura 1. Arena lavada, levadura y 5 ml de ácido tricloroacetico al 5%

Figura 2. Centrifugación a 3000 R.P.M de la muestra de la figura 1

Figura 3. Sobrenadante y precipitado de la centrifugación de la figura 2

Figura 4. Separación de sobrenadante y sedimento

Figura 5 Al sedimento se le agrega 10 ml de cloruro de sodio al 10%, se agita cuidadosamente, se

calienta la suspensión por 10 minutos y por último se pasa a centrifugar
Figura 6: Se centrifuga 3 minutos a 1500g (5000 r.p.m. aprox.). El sedimento contendrá las
proteínas y el sobrenadante los ácidos nucleicos. (Ruptura de tubo de ensayo)

Figura 7: Se divide el sobrenadante del sedimento. El Sobrenadante se lo pasa a baño en

hielo

Al final a cada tubo se le agrega 1 solución de sulfato cúprico a 0.1M y 2 ml de hidróxido

de sodio se mezcla y se obtienen resultados.
RESULTADOS:

Al precipitado se lo resuspende en 2 ml de cloruro de sodio al 0.15 al cual

se lo marca con la palabra ‘’muestra’’

En un segundo tubo se coloca 2ml de solución salina (Cloruro de sodio

(0.15M) y 1ml de solución albumina o caseína a este tubo se lo marcara
como ‘’ control +’’

En un tercer tubo se coloca solo solución salina y se lo marca como

‘’control –‘’

Para obtener estos resultados a cada tubo se le agrega 1 solución de sulfato cúprico a
0.1M y 2 ml de hidróxido de sodio se mezcla y se obtienen los colores evidenciados.