2. ¿Qué es un fragmento de anticuerpo? ¿Cuál es su uso?

Los anticuerpos convencionales o de tamaño completo son glicoproteínas llamadas

inmunoglobulinas que son producidas por las células plasmáticas en respuesta a moléculas
extrañas (inmunógenos). La función principal de los anticuerpos es unirse específicamente a un
antígeno y provocar una respuesta inmune, y de esa manera proteger al huésped de la infección.
Existen varias clases de anticuerpos, pero este resumen se enfoca en los anticuerpos IgG e IgM,
los cuales son ampliamente utilizados en numerosas de aplicaciones en investigación,
diagnóstico y terapia biomédica.

Estructura del anticuerpo convencional

La unidad básica de un anticuerpo completo es un cuádruple polipéptido conteniendo dos
cadenas pesadas y dos ligeras unidas por puentes disulfuro. La forma básica de un anticuerpo es
la de la letra "Y", y la bisagra en el punto de la estructura "Y" posee flexibilidad. Cada cadena
polipeptídica posee una región constante, la cual es muy similar para todos los anticuerpos, y
una región variable, la cual es específica para cada anticuerpo en particular. La notación común
para la región variable de la cadena ligera es "VL" (del inglés, "Variable Light") y para la región
constante de la cadena ligera es "CL" (del inglés "Constant Light"). La notación es similar para las
regiones variables (VH, "Variable Heavy") y constante (CH, "Constant Heavy") de la cadena
pesada. El dominio CH2 de las cadenas pesadas se encuentra normalmente unido a
carbohidratos. La región del fragmento cristalizable (Fc) sólo contiene regiones constantes de
las cadenas pesadas (CH), pero la del fragmento de la región de unión al antígeno (Fab) incluye
tanto un dominio constante como los dominios variables de las cadenas pesadas y ligeras (VH y
CL). El fragmento región variable Fv solamente contiene los dos dominios variables.

Aplicaciones de anticuerpos convencionales

Los anticuerpos convencionales han sido utilizados en investigación para la detección de
proteínas por Western blot, inmunohistoquímica y ensayos de inmunoadsorción ligada a
enzimas (ELISA) durante décadas. Anticuerpos de tamaño completo también han sido
desarrollados para aplicaciones de diagnóstico tales como las pruebas de embarazo y la
detección de bacterias y virus en sangre, tal como un ELISA para detectar el VIH. Además, los
anticuerpos convencionales de tamaño completo son utilizados comúnmente en la terapia de
enfermedades. Por ejemplo, Infliximab es uno de los muchos anticuerpos disponibles que
reconocen el factor alfa de necrosis tumoral (del iglés, TNFα) y es utilizado en el tratamiento de
la enfermedad de Crohn y la artritis reumatoide. Trastuzumab, o Herceptin, es un anticuerpo
utilizado en el tratamiento del cáncer de mama metastásico que une al receptor del factor de
crecimiento epidérmico.

Las ventajas de utilizar anticuerpos convencionales incluyen el hecho de que la región Fc

desencadena la respuesta inmune del cuerpo, causando la destrucción de las moléculas unidas.
Entre las desventajas de anticuerpos de tamaño completo se incluye su inhabilidad para
penetrar en ciertos tejidos debido a su tamaño relativamente grande. Una desventaja de utilizar
anticuerpos de tamaño completo en aplicaciones clínicas es que el dominio Fc frecuentemente
provocará una respuesta inmune, lo que puede ser perjudicial para la salud del paciente. El
dominio Fc frecuentemente provoca una unión no especifica significativa, lo cual puede
interferir en aplicaciones de detección.

Fragmentos de anticuerpos
Los fragmentos de un anticuerpo pueden ser producidos mediante mecanismos químicos o
genéticos. La fragmentación química utiliza agentes reductores para romper los puentes
disulfuro de la región bisagra y la digestión del anticuerpo con proteasas incluyendo pepsina,
papaína y ficina. La construcción genética de fragmentos ofrece la habilidad de crear numerosas
moléculas conteniendo fragmentos, cada una con características de unión y función únicas.

Fab, Fab', (Fab')2, y Fv

La digestión química y por proteasas de anticuerpos de tamaño completo produce fragmentos
de unión al antígeno (Fab), los cuales son generados a partir de la región variable de los
anticuerpos clase IgG e IgM. Los fragmentos Fc, compuestos sólo por las regiones constantes de
la cadena pesada, son separados de los Fab. Los fragmentos de unión al antígeno incluyen Fab,
Fab', (Fab')2, y Fv. Estos fragmentos son capaces de unir al antígeno, pero todos carecen de la
región Fc que contiene los dominios constantes 2 y 3 de la cadena pesada. Dos fragmentos F(ab)
individuales son separados de la región Fc cuando un anticuerpo de tamaño completo es
digerido con la enzima papaína. Sin embargo, un fragmento F(ab')2, el cual retiene una pequeña
parte de la región bisagra del Fc, es separado del resto de la región Fc de un anticuerpo mediante
digestión con pepsina. Si bien la utilización de métodos bioquímicos para generar fragmentos
de anticuerpos produce herramientas útiles para aplicaciones de diagnóstico y terapéutica,
resulta muy laborioso y requiere de grandes cantidades de anticuerpo como material de partida.

Fragmentos monovalentes F(ab) poseen un solo sitio de unión a antígeno, mientras que los
fragmentos divalentes F(ab')2 poseen dos regiones de unión a antígeno unidas por puentes
disulfuro. La reducción de los fragmentos F(ab')2 produce dos fragmentos monovalentes Fab'
que poseen un grupo sulfhidrilo libre, el cual es útil para la conjugación con otras moléculas.

Los fragmentos Fv son los fragmentos más pequeños conseguidos por digestión enzimática de
anticuerpos clase IgG e IgM. Los fragmentos Fv poseen el sitio de unión a antígeno compuesto
por las regiones VH y VC, pero carecen de las regiones CH1 y CL. Las cadenas VH y VL se
mantienen unidas en los fragmentos Fv mediante interacciones no covalentes.

ScFv, diacuerpo, triacuerpo, tetracuerpo, Bis-scFv, minicuerpo, Fab2, Fab3

Los métodos de ingeniería genética permiten la producción de fragmentos variables de cadena
única (ScFv), los cuales son fragmentos tipo Fv que incluyen los dominios VH y VL unidos por un
péptido flexible. Cuando el conector es de al menos 12 residuos de largo, los fragmentos ScFv
son principalmente monoméricos. La manipulación de la orientación de los dominios V y el largo
del conector crean diferentes formas de moléculas Fv. Conectores de 3-11 residuos de largo
generan moléculas ScFv incapaces de plegarse para formar un dominio Fv funcional. Estas
moléculas se asocian con una segunda molécula ScFv, lo que crea un diacuerpo divalente. Si el
conector pose menos de tres residuos, las moléculas ScFv se asocian en triacuerpos o
tetracuerpos. Los ScFv multivalentes poseen una mayor afinidad de unión funcional a sus
antígenos diana que sus homólogos monovalentes al unirse a dos o más antígenos diana, lo que
reduce la tasa de desprendimiento del fragmento de anticuerpo. Los minicuerpos son proteínas
de fusión entre los fragmentos ScFv y CH3 que se ensamblan en dímeros bivalentes. Los
fragmentos bis-ScFv son biespecíficos. Los fragmentos ScFv miniaturizados pueden ser
generados para poseer dos dominios variables diferentes, permitiendo a estas moléculas Bis-
scFv unirse a dos epítopos diferentes al mismo tiempo. Los métodos genéticos también son
utilizados para crear dímeros Fab biespecíficos (Fab2) y trímeros Fab triespecíficos (Fab3). Estos
fragmentos de anticuerpo son capaces de unir a 2 (Fab2) o 3 (Fab3) antígenos diferentes
simultáneamente.

Anticuerpo de cadena sencilla

Un anticuerpo monocatenario, fragmento Fv monocatenario o scFv es la fusión de las regiones
variables de las cadenas pesada y ligera de las inmunoglobulinas, unidas mediante un péptido
conector. Éste está formado habitualmente por residuos de glicina (para aportarle flexibilidad)
y de serina o treonina para darle solubilidad.

Esta molécula quimérica mantiene la especificidad de la inmunoglobulina original, a pesar de la

eliminación de las regiones constantes y la introducción del péptido conector. La imagen de la
derecha muestra cómo estas modificaciones dejan inalterada la estructura de la región del
anticuerpo que reconoce el antígeno.

Estas moléculas se crearon originalmente para facilitar la confección de bibliotecas de expresión

en fago (phage display) donde es muy conveniente expresar el dominio de unión al antígeno
como un único péptido. Por otra parte, los scFv se pueden crear directamente a partir de
cadenas ligeras y pesadas subclonadas, derivadas de un hibridoma.

Los scFv tienen muchas aplicaciones, como la citometría de flujo, la inmunohistoquímica o como
dominios de unión a antígeno de receptores artificiales de linfocitos T.

Aplicaciones de fragmentos de anticuerpos

Los fragmentos ofrecen ventajas sobre los anticuerpos de tamaño completo en algunas
aplicaciones. Una ventaja de los fragmentos sobre los anticuerpos de tamaño completo es que
los fragmentos son lo suficientemente pequeños como para infiltrarse en algunos tejidos en los
cuales los anticuerpos de tamaño completo no pueden penetrar, lo cual ayuda tanto en
procedimientos terapéuticos como inmunohistoquímicos. Los fragmentos de anticuerpos son
más pequeños que los anticuerpos convencionales y generalmente carecen de glicosilación,
permitiendo su producción en sistemas de expresión procariotas, lo que permite ahorrar tiempo
y costos. Sin embargo, los fragmentos que carecen del dominio Fc son degradados en el cuerpo
mucho más rápido que los anticuerpos convencionales, y son incapaces de desencadenar los
procesos citotóxicos mediados por los Fc a menos que sean conjugados a una fracción efectora,
lo cual requiere de una mayor optimización para una terapéutica basada en fragmentos de
anticuerpo. Sin embargo, la falta del dominio Fc es una ventaja sustancial para anticuerpos
primarios utilizados en inmunohistoquímica y otras aplicaciones de detección ya que poseen
una unión inespecífica al receptor Fc considerablemente menor. Los fragmentos de anticuerpos
que no poseen la región Fc ofrecen la ventaja de una menor unión inespecífica. Un ScFv utilizado
comúnmente para diagnóstico es el anticuerpo NC10 contra la neuraminidasa de influenza. El
anticuerpo MOC-31 contra la molécula de adhesión celular epitelial, Ep-CAM, es un ScFv
utilizado comúnmente en la terapia contra el cáncer. Los diacuerpos, triacuerpos y tetracuerpos
tienen usos potenciales en aplicaciones tales como la radioinmunoterapia y diagnósticos por
imagen in vivo. Los nanocuerpos pueden ser utilizados para propósitos específicos en (co)-
inmunoprecipitaciones, o acoplados a proteínas fluorescentes para rastrear dianas
intracelulares en tiempo real en células vivas.

Experimentos actuales
Ratones modelo de la enfermedad de Alzheimer han sido tratados con éxito con un fragmento
de anticuerpo diseñado por investigadores de la UAB. Con una sola inyección en el abdomen, y
después de sólo cinco días, los animales mejoran la memoria y la capacidad de aprendizaje como
consecuencia de la retirada de los agregados tóxicos y del aumento del número de neuronas. Se
han ensayado en ratones un fragmento de anticuerpo específico contra los agregados solubles
del péptido Aβ, responsables de la toxicidad y de la muerte celular características de la
enfermedad de Alzheimer.

La enfermedad de Alzheimer está asociada a la presencia de unos depósitos insolubles

denominados placas amiloides. La inmunoterapia, que consiste en el uso de anticuerpos como
tratamiento de las enfermedades, está resultando una herramienta esperanzadora en el
tratamiento de ciertos tipos de cáncer y se ha ensayado también para tratar la enfermedad de
Alzheimer.

Se diseñó un fragmento de anticuerpo recombinante (denominado scFv - h3D6 o single- chain

variable Fragment, scFv), derivado de bapineuzumab, que únicamente contiene la parte activa
contra el agente etiológico de la enfermedad: los dominios del anticuerpo responsables de la
unión a los oligómeros Aβ. Los científicos observaron, en cultivos celulares humanos, cómo este
fragmento de anticuerpo protege de la muerte celular y describieron el mecanismo molecular
por el que este fragmento de anticuerpo retira los oligómeros Aβ causantes de la enfermedad.

A nivel molecular, los investigadores han demostrado dos hechos importantes: por un lado, el
nuevo tratamiento elimina los oligómeros del péptido Aβ, los elementos que provocan la
enfermedad, de la corteza cerebral. Por otro lado, este hecho está vinculado a la recuperación
de los niveles de ciertas apolipoproteínas que se sospecha están implicadas en la eliminación
natural de los agregados del péptido Aβ.
CONCLUSIONES
Los fragmentos de un anticuerpo pueden ser producidos mediante mecanismos químicos o
genéticos. La fragmentación química utiliza agentes reductores para romper los puentes
disulfuro de la región bisagra y la digestión del anticuerpo con proteasas incluyendo pepsina,
papaína y ficina. La construcción genética de fragmentos ofrece la habilidad de crear numerosas
moléculas conteniendo fragmentos, cada una con características de unión y función únicas.

Los fragmentos ofrecen ventajas sobre los anticuerpos de tamaño completo en algunas
aplicaciones. Una ventaja de los fragmentos sobre los anticuerpos de tamaño completo es que
los fragmentos son lo suficientemente pequeños como para infiltrarse en algunos tejidos en los
cuales los anticuerpos de tamaño completo no pueden penetrar, lo cual ayuda tanto en
procedimientos terapéuticos como inmunohistoquímicos.
Los fragmentos de anticuerpos son más pequeños que los anticuerpos convencionales y
generalmente carecen de glicosilación, permitiendo su producción en sistemas de expresión
procariotas, lo que permite ahorrar tiempo y costos. Sin embargo, los fragmentos que carecen
del dominio Fc son degradados en el cuerpo mucho más rápido que los anticuerpos
convencionales, y son incapaces de desencadenar los procesos citotóxicos mediados por los Fc
a menos que sean conjugados a una fracción efectora, lo cual requiere de una mayor
optimización para una terapéutica basada en fragmentos de anticuerpo.

REFERENCIAS:
M. Johnson. Estructura y fragmentos de anticuerpos. Labome, 2013 (citado 11 Sep. 2018).
Disponible en: http://www.labome.es/method/Antibody-Structure-and-Fragments.html

Colaboradores de Wikipedia. Anticuerpo de cadena sencilla. Wikipedia, La enciclopedia libre,

2013 [citado 11 Sep. 2018]. Disponible en
https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Anticuerpo_de_cadena_sencilla&oldid=64548062

Universidad Autónoma de Barcelona. Un fragmento de anticuerpo actúa eficazmente contra el

Alzheimer en ratones. UAB, 2013 (CITADO 11 Sep. 2018). Disponible en:
https://www.uab.cat/web/noticias/detalle-de-una-noticia/un-fragmento-de-anticuerpo-actua-
eficazmente-contra-el-alzheimer-en-ratones-1099409749848.html?noticiaid=1345662577400

P. Alcalá Morales. Ingeniería de anticuerpos aplicada al desarrollo y caracterización de

biosensores enzimáticos. UAB, 2002 (citado 11 Sep. 2018). Disponible en:
https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3505/plam1de3.pdf?sequence=1&isAllowed=y

Dunbar J, Krawczyk K, Leem J, Baker T, Fuchs A, Georges G, et al. SAbDab: the structural antibody
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Renart J, Reiser J, Stark G. Transfer of proteins from gels to diazobenzyloxymethyl-paper and

detection with antisera: a method for studying antibody specificity and antigen structure. Proc
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