Professional Documents
Culture Documents
Equipo 3
Chaparro Camacho Diana Andrea
Huerta Silva Jesús Eduardo
Vera Maldonado Karol Scarlet
Zavaleta Ojeda Karen Adeydi
Resumen
La ingeniería genética utiliza una serie de técnicas que permiten la modificación de los
ácidos nucleicos que conforman los genes. Un descubrimiento que permitió el surgimiento
de esta rama de la ciencia fue el de los elementos genéticos móviles en bacterias y
levaduras que se encuentran de manera libre en su citoplasma. Entre ellos, ocupando un
lugar destacado, están los plásmidos y las enzimas de restricción. Debido a la importancia
que esto como uno de los pasos previos de trabajos de alta importancia, como
secuenciación y clonación, en el trabajo siguiente se realizó el aislamiento y purificación de
DNA plasmídico de una cepa de E. Coli por lisis alcalina (Miniprep), comprobando ello con
el índice 260/280; posteriormente se llevó a cabo la digestión del mismo usando EcoRI,
HindIII y una mezcla de ambos para observar a través de electroforesis el número y el
tamaño de los cortes producidos. Por medio de esto se obtuvo una purificación exitosa con
un índice 260/280 de 1.82, encontrándose después de la digestión un corte con EcoRI de
2923 pb, dos con Hind III de 6000 y 4000 pb y tres cortes con una mezcla de ambos, de
tamaños 5853, 1077 y 2000 pb, respectivamente.
Palabras clave: Plásmidos, pDEST22, lisis alcalina, enzimas de restricción, EcoRI, Hind III,
indice 260/280, electroforesis, extremos romos, extremos cohesivos.
Abstract
Genetic engineering uses a series of techniques that allow the modification of the nucleic
acids that make up the genes. A discovery that allowed the emergence of this branch of
science was the mobile genetic elements in bacteria and yeasts that are found freely in their
cytoplasm. Among them, occupying a prominent place, are plasmids and restriction
enzymes. Due to the importance of this as one of the previous steps of high-importance
work, such as sequencing and cloning, in the following work the isolation and purification of
plasmid DNA of an E. Coli strain by alkaline lysis (Miniprep) was performed, checking it with
the index 260/280; later digestion was carried out using EcoRI, HindIII and a mixture of both
to observe through electrophoresis the number and size of the cuts produced. By means of
this a successful purification was obtained with an index 260/280 of 1.82, being after the
digestion a cut with EcoRI of 2923 bp, two with Hind III of 6000 and 4000 bp and three cuts
with a mixture of both, of sizes 5853, 1077 and 2000 bp, respectively.
Keywords: Plasmids, pDEST22, alkaline lysis, restriction enzymes, EcoRI, Hind III, index
260/280, electrophoresis, blunt ends, cohesive ends.