Práctica de Laboratorio Medicina 12 (2018) e00105

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Posible papel de la nicotina y cotinina en el estrés nitroxidative y contenido de antioxidantes

en la saliva de los consumidores de tabaco sin humo

Shaik Fareeda Begum un , Gutam Nagajothi segundo , Kodidela Swarnalatha un , G. Sandeep do ,

Bandi Sreekanth re , Chitta Suresh Kumar un , W. Rajendra do , Narendra Maddu un , •
un Departamento de Bioquímica de la Universidad Sri Krishnadevaraya, Ananthapuramu 515003, Andhra Pradesh, India segundo
Departamento de Corporate Secretariado, del Queen Mary College (Autónoma), Chennai 600004, Tamil Nadu, India

do División de Biología Molecular, Departamento de Zoología de la Universidad Sri Venkateswara, Tirupati 517502, Andhra Pradesh, India re
Departamento de Zoología de la Universidad Sri Krishnadevaraya, Ananthapuramu 515003, Andhra Pradesh, India

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO ABSTRACTO

palabras clave:
El objetivo del estudio es a niveles de nicotina y cotinina fueron elevados el malondialdehído estrés oxidativo (MDA) y en Florida inflamación como el
El tabaco sin humo óxido nítrico (NO 2 y no 3) posiblemente, puede estar asociado con las actividades enzimáticas antioxidantes disminuido y con sensibilidad puede
nicotina cotinina RP-HPLC indicar la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS). Para evaluar el análisis cuantitativo de los niveles
Los radicales libres
de nicotina y cotinina y las alteraciones en los parámetros seleccionados del metabolismo antioxidante durante el estrés nitroxidative en la
saliva de los consumidores de tabaco sin humo. nicotina y cotinina La saliva se midió por el método de HPLC y el óxido nítrico, la

enzimas antioxidantes peroxidación de lípidos y las actividades de las enzimas antioxidantes se estimaron por métodos espectrofotométricos. signi fi aumento de
las concentraciones de peralte de los niveles de nicotina y cotinina en la saliva de los usuarios de tabaco sin humo en comparación con los
controles. la peroxidación de lípidos La saliva se aumentó en los sujetos experimentales (grupo gutkha

39,28% y el grupo khaini 25,00%) en comparación con los controles y el óxido nítrico en la forma de nitritos y nitratos fue signi fi cativamente
mayor en la saliva de los consumidores de tabaco sin humo en comparación con los controles. Los niveles de actividad de las enzimas
antioxidantes se redujeron en la saliva de los usuarios de tabaco sin humo en comparación con los controles normales. Una fuerte correlación
positiva de la nicotina y cotinina con marcadores de estrés nitroxidative en usuarios gutkha y khaini. El aumento de

expresión de óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) enzima conduce a la intoxicación en la saliva y indirectamente induce en Florida proceso de
inflamación. Aumento de la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) y la disminución de los niveles de actividad de las enzimas
antioxidantes en la saliva de los usuarios de tabaco sin humo indicar daño celular y tisular visible.

1. Introducción

El tabaco se consume en forma de fumar y sin humo productos de tabaco y tabaco sin humo (SLT) se consume sin quemar y se puede utilizar por vía oral o por vía nasal. productos de
tabaco sin humo Oral se colocan en la boca, la mejilla o el labio y aspirados (sumergido) o masticarse [1] . La India es uno de los mayores productores y consumidores de tabaco, la mayor
parte en forma de tabaco sin humo y disponible

abreviaturas: SLT, sin humo de tabaco; ROS, especies reactivas de oxígeno; RNS, especies reactivas de nitrógeno; TBA, ácido tiobarbitúrico; TCA, ácido tricloro acético; DCM, diclorometano; DEE, éter dietílico;
TBARS, ácido tiobarbitúrico reacción de la sustancia; MDA, malondialdehído; GSH, glutatión reducido; SOD, superóxido dismutasa; CAT, catalasa; GPx, glutatión peroxidasa; GST, glutatión S-transferasa; TSNA,
especí Tobacco- fi nitrosaminas c; NOS, la óxido nítrico sintasa; nNOS, Neuronal óxido nítrico sintasa; eNOS, óxido nítrico sintasa endotelial; iNOS, óxido nítrico sintasa inducible

• Autor correspondiente.

Dirección de correo electrónico: dr.narendramaddu@gmail.com (N. Maddu).

https://doi.org/10.1016/j.plabm.2018.e00105
Recibido el 27 de noviembre de 2017. Recibido en forma 06 de mayo 2018 revisado; Aceptó 16 de julio de 2018
2352-5517 / © 2018 Publicado por Elsevier Este es un artículo de acceso abierto bajo la licencia CC BY-NC-ND licencia (http://creativecommons.org/licenses/BY-NC-ND/4.0/).
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en di ff Erent marcas en todo el país [2] . Se estima que 5.500 adolescentes consumen tabaco todos los días en la India y cada año 4 millones de jóvenes están comenzando el consumo de tabaco
con regularidad [3] . La India tiene el segundo mayor número de consumidores de tabaco en el mundo con 229 millones de usuarios y China cuenta con 311 millones de consumidores de tabaco
[4,5] . bajo estatus socioeconómico, el analfabetismo, socialmente aceptables y fácilmente hábito adictivo son los diversos factores múltiples que contribuyen al consumo de tabaco sin humo más
que fumar cigarrillos. Los constituyentes de tabaco sin humo también pueden contribuir a la salud adversa correo ff ECTS entre los consumidores. Gutkha, panmasala con el tabaco, khaini son las
múltiples formas de tabaco sin humo (SLT) que se hace localmente y se consume en la India y contiene varios elementos cancerígenos. La composición de producto gutkha contiene tabaco, nuez
de areca, catechu, cal apagada y agregado Florida sabores. Está disponible en las marcas khaleja y rebeldes en la India y la marca khaleja es la forma más preferible y altamente consumible de
gutkha. Khaini es la combinación de tabaco y piedra caliza pasta, disponible en la marca Mahak chaini / khaini. El tabaco sin humo se coloca entre la mejilla y las encías durante la masticación y
escupir conduce a la mucosa lesiones de la cavidad oral. La cal y catechu participan activamente la formación de especies reactivas de oxígeno (ROS) en la cavidad oral [6] . Alto potencial de
entrega y dependencia a la nicotina de los productos de tabaco sin humo puede ser un factor crítico para que pudiese competir con el absorbido la mayor rapidez la nicotina del tabaco de fumar
[7] . En los seres humanos, la mayor parte del consumo de nicotina se metaboliza en cotinina. Actúa como metabolito principal y especificidad fi marcador c de exposición a la nicotina y su
concentración se determina por la tasa de metabolismo de la nicotina. La absorción de la nicotina del tabaco sin humo se produce principalmente a través de las membranas mucosas y acelera
rápidamente, convirtiéndose máxima a 5 minutos, pero luego disminuye durante 30 min a pesar de la presencia continua de tabaco en la boca [8] . El anión superóxido y peróxidos hidroeléctricas
son las principales fuentes de la nicotina inducidas radicales libres y actúan como marcadores de estrés oxidativo [9,10] . El ácido úrico y glutatión reducido (GSH) son los antioxidantes no
enzimáticos, que limpian los radicales libres producidos durante las reacciones metabólicas en las células [11] . Células generan continuamente especies de oxígeno reactivas (ROS) como parte de
los procesos metabólicos. El sistema de defensa antioxidante que consiste en enzimas como la catalasa, superóxido dismutasa y glutatión peroxidasa, que redujo las concentraciones de oxidantes
en las células y tejidos. Aumento de los niveles de nicotina y cotinina muestra alto consumo y la naturaleza adictiva de los productos de tabaco sin humo y mayores niveles de nicotina indican
que daño crónico de los tejidos orales y cánceres de la cavidad oral. Por lo tanto, el propósito de este estudio fue explorar las concentraciones de nicotina y cotinina, estado de las enzimas
antioxidantes, los niveles de peroxidación de lípidos y el óxido nítrico en la saliva de los consumidores de tabaco sin humo.

2. Materiales

2.1. productos químicos

La nicotina se compró con pureza de ≥ 99% y la pureza de cotinina de 98% a partir de Sigma Aldrich, Bangalore se utilizaron como patrones internos en el método de HPLC. ácido tiobarbitúrico
(TBA), ácido acético tricloro (TCA), metanol, diclorometano (DCM), dietil éter (DEE), acetonitrilo (ACN), Sodio n-heptano sulponic ácido y Potasio di hidrógeno fosfato (KH 2 correos
4).

2.2. Asignaturas

La población del estudio consistió en noventa hombres voluntarios humanos y se dividió en tres grupos. Cada grupo consta de treinta voluntarios varones: Grupo I- grupo de control II-
masticadores gutkha y masticadores khaini grupo III-. Los sujetos experimentales son principalmente los conductores de automóviles, mecánicos y constructores de viviendas mediante el uso de
un cuestionario. masticadores gutkha consumen siete y cincuenta y seis khaleja marca de bolsitas gutkha y los sujetos consumen khaini fi cinco paquetes de marca chaini Mahak al día durante 2
- 6 años disponibles en Ananthapuramu. Los criterios de inclusión son el uso habitual de sólo gutkha y khaini paquetes por parte de los usuarios y gutkha khaini, respectivamente, y elegir a las
personas solteras estatus económico y bajas. Los criterios de exclusión son no se prefieren los grupos o religión de las personas alcohol o fumar consumidos. Los sujetos sanos que no usaron
alguna forma de tabaco o alcohol y que no habían sido expuestos a cualquier tipo de productos químicos y eran de la misma edad, sexo y estratos socioeconómicos como se seleccionaron los
sujetos experimentales como controles. Los grupos de estudio fueron de edades comprendidas entre 25 y 35 años y este estudio fue aprobado por el Comité Institucional de Ética.

Grupo I: Controles
Grupo II: masticadores gutkha
Group-III: masticadores khaini

2.3. recopilación y el análisis de la saliva

Cinco mililitros de muestras salivales enteros no estimuladas fueron obtenidos por expectoración, en ausencia de movimientos de masticación, en viales de plástico secas con el sujeto de
prueba que se sienta en una posición relajada. Las muestras de saliva recogidas se centrifugaron a 3000 rpm durante 10 min. Los sobrenadantes se almacenaron a - 70 ° C hasta su posterior
análisis.

2.4. estimaciones bioquímicas

Estimación de la peroxidación de lípidos en la saliva se hizo midiendo el ácido tiobarbitúrico reacción de la sustancia (TBARS) y se expresó en términos de malonaldehído (MDA) contenido
[12] . Las glutatión (GSH) niveles en las muestras se estimaron utilizando 5, 5 '- método ditiobis-2-nitrobenzoico (DTNB) [13] y la cantidad de glutatión se expresa como mmoles / mg de proteína.
La superóxido dismutasa se evaluó (SOD) la actividad siguiendo el método [14] y se expresa como proteína U / mg. Catalasa (CAT) fue

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determinado por el método [15] y la actividad de CAT se expresa como moles de H 2 O 2 descompuesto / min / mg de proteína o U / mg de proteína. Glutatión peroxidasa (GPx) se ensayó por
el método [dieciséis] y la actividad de GPx se expresó como mmoles de glutatión oxidado / min / mg de proteína. El glutatión S-transferasa (GST) conjugado con GSH y 1-cloro-2,

4-dinitrobenceno da un complejo, S- (2, 4-dinitrofenilo) glutatión, que se mide espectrofotométricamente como el aumento en la absorbancia a 340 nm por el método [17] . Albúminas,
proteínas totales y ácido úrico fueron analizados utilizando métodos kit analizador automático. El óxido nítrico (NO 2 y no 3) por el método [18] .

2.5. HPLC

sistema de HPLC (Shimadzu, Japón) está equipado con sistema binario gradiente con UV / VIS detector variable (SPD-20A) y el inyector Rheodyne con un bucle de 20 l y bombas LC-20
CE y del integrador. El análisis cromatográfico de fase inversa se lleva a cabo en condición isocrática usando columna de fase inversa C18 (5 μ) a 37 ° C.

2.6. condiciones de funcionamiento de HPLC 19

Resolución de los picos se realizó con la fase móvil que consiste en una mezcla de 0,272 g de KH 2 correos 4, 0,184 g de N- sodio

sulfonato de heptano, 820ml de agua (grado HPLC), y 180 ml de metanol (grado HPLC). El pH de la fase móvil se ajustó por adición gota a gota de ácido fosfórico orto (pH = 3,2). los Florida
velocidad de flujo usada fue 1,0 ml / min, y la longitud de onda era fi jos a 256 nm para la nicotina y 262 nm para la cotinina como por la modi fi método ed de [19] . La nicotina y cotinina en las
concentraciones de 20! M / ml se usaron como estándares.

2.7. análisis de muestras para HPLC

análisis de la muestra se procesa por el modi fi método ed de [19] . Una parte alícuota de 0,1 ml de saliva se colocó en un tubo de ensayo de vidrio era

se alcaliniza con 20 l de NaOH 5,0 M, a continuación, se mezcló en vórtex a 2800 rpm durante 30 s. Cantidades iguales de diclorometano-éter dietílico (1: 1 v / v) fue utilizado para un solo
paso sola extracción, a continuación, se mezcló en vórtex a 2800 rpm durante 2 minutos. La capa orgánica, después de ser centrifugada a 3.500 rpm durante 3 min, se transfirió a un nuevo
tubo de vidrio que contiene 4 l de 0.25MHCl la capa orgánica, después de haber sido centrifugaron a 3500 rpm durante 3 min, se transfirió a un nuevo tubo de vidrio que contiene 4 l de

0.25MHCl. Después, la fase orgánica se evaporó bajo una corriente de nitrógeno a 35 ° C hasta sequedad y se reconstituyó en 50 l de fase móvil. Una parte alícuota de 20 l se inyectó en el
HPLC para el análisis.

2.8. análisis de los datos estadísticos

Todos los datos cuantitativos se expresan como media ± SEM y estudiantes t- Se utilizó la prueba para determinar el signi fi cance de los parámetros entre los grupos y el Consejo de
Europa de correlación de Pearson FFI ciente analizaron utilizando Graph Pad Prism versión 6.01 para Windows.
P < 0,05 fue considerado estadísticamente signi fi hipocresía.

3. resultados

Los datos presentados en ( tabla 1 ) Indicaron que las proteínas totales se redujeron en la saliva del grupo gutkha sin signi fi el cambio no puede y signi fi disminución en el grupo no puede
khaini en comparación con los controles. El albúminas salivales (grupo gutkha, - 22,22% y el grupo khaini, - 37,03%) y globulinas encontraron que había una disminución del nivel en ambos
grupos de consumidores de tabaco sin humo en comparación con los controles y no mostró di estadística ff rencia. Se observó un aumento de los niveles de malondialdehído en la saliva de los
sujetos experimentales en comparación con los controles (masticadores gutkha, 39,28% y masticadores khaini, 25,00%). consumidores de tabaco sin humo se expusieron que el signi fi
cativamente aumento de los niveles de óxido nítrico que los controles. Los datos indican signi fi cativamente elevado los niveles de nicotina

tabla 1
Efecto de tabaco sin humo en el óxido nítrico salival y la peroxidación lipídica.

Parámetro grupos

controles los usuarios de tabaco sin humo (SLT)

usuarios gutkha usuarios khaini

Las proteínas totales (g / dl) 1,12 ± 0,03 1,06 ± 0,04 # 0,97 ± 0,05 *
Albúminas (g / dl) 0,27 ± 0,05 0,21 ± 0,01 0,17 ± 0,01
Las globulinas (g / dl) 0,85 ± 0,08 0,83 ± 0,05 0,079 ± 0,03
El malondialdehído (moles / mg de proteína) 0,28 ± 0,05 0,39 ± 0,09 0,35 ± 0,08
El óxido nítrico (NOx) (moles / L) 47,91 ± 2,34 55,77 ± 1,13 * 54,46 ± 1,72 *

Los datos se representan como la media ± SEM y * indica que los datos son significativamente diferentes con los otros grupos y # indica que los datos no son significativamente diferentes de los otros grupos.

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Tabla 2
Las concentraciones de los niveles de nicotina y cotinina en la saliva.

Parámetro grupos

controles los usuarios de tabaco sin humo (SLT)

usuarios gutkha usuarios khaini

La nicotina (ng / ml) 34,23 ± 2,87 3712.12 ± 522.21 * 3556.96 ± 253.82 *

La cotinina (ng / ml) 40,91 ± 3,45 7248.04 ± 958.10 * 5326.90 ± 656.94 *

Los datos se representan como la media ± SEM y * indica que los datos son significativamente diferentes con los otros grupos.

Figura 1. HPLC cromatogramas de los estándares de nicotina y cotinina.

y cotinina en la saliva de los usuarios de tabaco sin humo en comparación con los controles fueron mencionados ( Tabla 2 ). Aunque el grupo de control normal tenía no se observaron
cantidades considerables de consumo de nicotina y la exposición al tabaco, pero pequeñas concentraciones de los niveles de nicotina y cotinina en el grupo de control debido a la exposición
ambiental de tabaco y algunos constituyentes de los alimentos. La gama de tiempo de retención de nicotina estándar es de 5,3 - 6.3min y mostró un pico en el cromatograma 6.00min. La gama
de tiempo de retención de cotinina estándar es de

3.6 - 4.6min y mostró un pico de cromatograma en 4.01min ( Figura 1 ). Los datos mostrados en ( Figura 2 ) Indica que no hay picos observados en los cromatogramas de saliva en los
controles normales en la

Figura 2. HPLC cromatogramas de los niveles de nicotina y cotinina en muestras de saliva de los controles.

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Fig. 3. HPLC cromatogramas de los niveles de nicotina y cotinina en muestras de saliva de los usuarios gutkha y khaini.

Fig. 4. Los niveles de glutatión y ácido úrico en la saliva. Los datos se representan como la media ± SEM y * denota que signi fi no puede di ff rencia con los otros grupos y # indica que los datos no son signi fi
cativamente di ff Erent con los otros grupos.

retención de 4,01 y 6.00min de nicotina y cotinina. Los II consumidores grupo mostró estrecho pico de cromatograma de nicotina en tiempo de retención de 5,95 y el pico de cotinina en 3,67.
En este grupo gutkha, gran cantidad de nicotina se metaboliza en cotinina. La nicotina mostró pico cromatograma a 6,27 tiempo de retención y cotinina mostró pico cromatograma en 3.87min
en el grupo III los consumidores ( Fig. 3 ). los niveles de ácido úrico demostraron que el signi fi cativamente disminuyó en la saliva de los usuarios de tabaco sin humo que en los controles
normales. los niveles de glutatión salivales se redujeron signi fi cativamente en masticadores gutkha y khaini masticadores mostraron disminución de los niveles de glutatión sin signi fi no puede
di ff rencia comparación con los controles ( Fig. 4 ). Los datos presentados en ( Fig. 5 ) Representados que las parcelas de regresión lineal de la nicotina, cotinina, malondialdehído (MDA) y el
óxido nítrico en la saliva entre el control y los sujetos experimentales.

Los niveles disminuidos de superóxido dismutasa en sujetos experimentales con no signi fi el cambio no puede. Los niveles de catalasa y glutatión peroxidasa fueron menores con signi fi no
puede di ff rencia. Del grupo III masticadores expuestas que el signi fi disminución no puede de glutatión S-transferasa y la disminución de los niveles de GST en el grupo II masticadores sin signi fi
cambio no puede comparación con los controles ( Tabla 3 ). El análisis de correlación demostró que había un signi fi no puede relación lineal cuesta arriba se produce entre la nicotina y cotinina
con malondialdehído y el óxido nítrico en la saliva de los usuarios gutkha y khaini y en muchos casos, el Consejo de Europa de correlación de Pearson FFI cientes fueron de entre 0,85 y 0,98. (
tablas 4a y 4b ). Un espectáculo datos en ( Fig. 6 ) Indica que los gráficos de correlación de la nicotina y cotinina con malondialdehído y óxido nítrico en

saliva de los consumidores de tabaco sin humo y de control. parcelas de comparación cuantiles muestran los niveles de distribución de la nicotina y cotinina en los controles y los usuarios de
tabaco sin humo ( Fig. 7 ). El principal metabolito del metabolismo de nicotina es cotinina y además de esto, la nicotina se metaboliza extensamente por el hígado en otros metabolitos como 5 '
cotinina hidroxi, 5 ' nicotina hidroxi, nornicotina y la nicotina de iminio ion etc., ( Fig. 8 ).

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Fig. 5. parcelas regresión de la comparación de la nicotina saliva, los niveles de cotinina, la peroxidación de lípidos y el óxido nítrico entre los controles y los sujetos experimentales.

4. Discusión

La masticación de tabaco sin humo es un muy común y es fácilmente productos addictable a los seres humanos. La composición principal de tabaco sin humo es la nicotina, el tabaco
especí fi nitrosaminas c (TSNA), nitrosaminas volátiles, aldehídos y metales pesados, etc., tabaco sin humo (SLT) anomalías mediadas en la saliva se han investigado en detalle y tabaco especí fi
nitrosaminas c son los carcinógenos en estos productos y sintetizado a partir de la nitración de la nicotina durante el procesamiento del tabaco. El consumo de tabaco es el factor principal para
la generación de radicales libres en células y tejidos [21] . El tabaco sin humo contiene altas cantidades de nicotina que fumar tabaco se debe producir a partir de Nicotiana rustica especies. La
saliva podría constituir una fi línea primera de defensa contra el estrés oxidativo mediado por radicales libres y durante las reacciones metabólicas, aumenta las reacciones de peroxidación de
lípidos [22,23] . Curiosamente, el tabaco sin humo se asocia con el cáncer oral y en Florida inflamación en la saliva. controles normales consistieron en cantidades mínimas de nicotina y cotinina
y estos niveles bajos podrían deberse a la exposición ambiental de tabaco. Nuestros resultados observaron que signi fi cativamente aumento de las concentraciones de nicotina observado en la
saliva de los consumidores de tabaco sin humo. Feyerabend et al. (mil novecientos ochenta y dos) [24] informó de que el cigarrillo

Tabla 3
estado de enzimas antioxidantes en la saliva de los usuarios de tabaco sin humo.

Parámetro grupos

controles los usuarios de tabaco sin humo (SLT)

usuarios gutkha usuarios khaini

SOD (/ mg de proteína U) 1,38 ± 0,21 1,14 ± 0,28 1,33 ± 0,47

CAT (micromoles / min / mg de proteína) 22.51 ± 5.02 11,14 ± 2,72 * 20,70 ± 2,89 *
GPx (mmoles / min / mg de proteína) 17,61 ± 2,63 9,76 ± 1,32 * 10,44 ± 0,93 *
GST (nmoles / min / mg de proteína) 79.37 ± 12.20 58,39 ± 5,20 77,35 ± 5,66 *

Los valores se representan como la media ± SEM y * indica que los datos son significativamente diferentes con los otros grupos.

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Tabla 4a
Correlación de la nicotina con la peroxidación de lípidos y el óxido nítrico.

Nicotina usuarios gutkha usuarios khaini

r PAG r PAG

malondialdehído 0.93 <0,0001 0.86 0,0004

Óxido nítrico 0.86 0,0003 0.92 <0,0001

r = correlación coefficient.P <0,0001 diferencia estadísticamente significativa.

Tabla 4b
Correlación de la cotinina con la peroxidación de lípidos y el óxido nítrico.

La cotinina usuarios gutkha usuarios khaini

r PAG r PAG

malondialdehído 0.92 <0,0001 0.85 0,0004

Óxido nítrico 0.94 <0,0001 0.88 0,0002

r = correlación coefficient.P <0,0001 diferencia estadísticamente significativa.

los fumadores encontró que el signi fi cativamente aumento de la concentración de nicotina en saliva en comparación con los no fumadores. los usuarios de tabaco sin humo demostraron que
signi fi aumento no puede en concentraciones de niveles de cotinina de saliva en comparación con los controles normales. Un aumento de la concentración de nicotina se indica la mayor
prevalencia y el consumo de tabaco sin humo. nicotina y tabaco sin humo extracto puro se indujo la toxicidad celular y el estrés oxidativo mediante el aumento de la producción de especies
reactivas de oxígeno

[25] . La nicotina tiene una vida media de 30 - 150 min y cotinina consistieron larga vida media de aproximadamente 20 horas. Debido a larga media vida de cotinina, las concentraciones de
cotinina fueron relativamente estable durante todo el día de fumar, alcanzando un máximo al final de la día
[26] . Los resultados anteriores también indicaron que el signi fi cativamente aumento de las concentraciones de cotinina en la saliva de los fumadores que en no fumadores

[27] . Durante movimientos de masticación gran fracción de la nicotina se metaboliza en cotinina y se prefiere como metabolito principal y de biomarcadores. Esto indica que la exposición al tabaco
y la dependencia de la nicotina en los consumidores de tabaco sin humo y la relación cuantitativa entre el aclaramiento de la cotinina y la ingesta de nicotina. El consumo diario de tabaco sin humo
tenía estadísticamente significativa fi asociación no puede con concentraciones de cotinina en la saliva de los sujetos experimentales [28] . Hubo una significante fi no puede fuerte correlación
positiva de los niveles de nicotina y cotinina entre el control y el grupo gutkha. Gutkha y los consumidores khaini indicaron que los parámetros de estrés nitrosativo mostraron que la correlación
positiva con la nicotina y cotinina. Los componentes de tabaco sin humo son la nicotina y el tabaco especí fi nitrosaminas c interrumpen el sistema antioxidante conduce a una mayor producción
de radicales libres y la degradación oxidativa de los tejidos orales. Los niveles elevados de óxido nítrico en las células podrían ejercer genotóxico e ff ECTS incluyen la formación de compuestos N-
nitroso cancerígenos, desaminación directa de bases de ADN y la oxidación de DNA [29,30] . Nuestras observaciones sugieren que las proteínas totales, albúminas y globulinas se redujeron en la
saliva de los usuarios de tabaco sin humo en comparación con los controles. La albúmina actúa como potente antioxidante [31] y la disminución de los niveles de albúminas en la saliva de los
consumidores de tabaco sin humo re Florida ect la producción de especies reactivas de oxígeno en niveles más altos que en los controles. El aumento de los niveles de peroxidación de lípidos de
los sujetos experimentales en la saliva que el grupo control normal. Los niveles de MDA se incrementaron en la saliva de fumadores que en los no fumadores [32] . La masticación de tabaco sin
humo se aumentó, se observó un aumento simultáneo de los niveles de MDA. signi fi aumento no puede en niveles de óxido nítrico de la saliva en los usuarios de tabaco sin humo en comparación
con los no usuarios. El óxido nítrico se degrada en nitritos y nitratos y es sintetizada por la óxido nítrico sintasa (NOS) y existe en tres isoformas: neuronales (nNOS), endoteliales (eNOS) y formas
inducibles de óxido nítrico sintasa (iNOS). Óxido nítrico sintasa inducible se expresa en todas las células y es de hasta regulado en la saliva de los sujetos experimentales. El NOx es un radical libre
liberado por la enzima NOS, que se produce a partir de gran variedad de células y tejidos [33] . Informes anteriores indicaron que los niveles de óxido nítrico salivales fueron signi fi cativamente
aumentó en los fumadores en comparación con los controles [34] . Nítrico

óxido se ha sugerido que desempeñar un papel importante en en Florida proceso de inflamación cuando se produce en exceso de las cantidades de óxido nítrico sintasa inducible [35 - 37] .
especies reactivas de nitrógeno (RNS) incluyen óxido y peroxinitritos nítrico y la producción excesiva de estas especies crea desequilibrio entre los antioxidantes y RNS conduce a la formación de
estrés nitrosativo. Los extractos acuosos de nuez de areca y catechu eran capaces de generar peróxidos de aniones y de hidrógeno superóxido y estos radicales libres juegan un papel importante
en el riesgo de cáncer oral de sujetos experimentales [38] . Los componentes tóxicos del tabaco sin humo son principalmente nicotina y el tabaco especí fi nitrosaminas c también pueden causar
directa o indirectamente el deterioro de los tejidos periodontales [39] . Nuestro estudio demostró que los niveles de ácido úrico fueron signi fi cativamente disminuyó en la saliva de los
consumidores de tabaco sin humo en comparación con los controles. El ácido úrico es el producto del catabolismo de la purina y actúa como un potente antioxidante. Actúa como un agente de
barrido de oxígeno singlete y los radicales libres mediante la inhibición de estrés oxidativo

[40] y esto era coherente con las anteriores fi hallazgos que muestran que el signi fi disminución no puede en los niveles de ácido úrico en la saliva de fumadores que en no fumadores [41] . El
GSH es un tripéptido consta de gamma gluatamyl glicina cisteinil y actúa como un antioxidante estabiliza el estado redox de las proteínas. enzima SOD convierte el radical superóxido (O 2- en el
peróxido (H 2 O 2)) y GPx también cataliza la reducción de hidroperóxidos [42] . El nivel medio de glutatión reducido se redujo signi fi cativamente en la saliva de los grupos experimentales en
comparación con los no chwers y esto también está en línea con la observación de que un signi fi disminución en la concentración de GSH no puede salival se informó después de fumar un solo
cigarrillo [43] . Salival glutatión peroxidasa, glutatión S-transferasa, y

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Fig. 6. gráficos de correlación de la nicotina y cotinina con óxido nítrico y la peroxidación lipídica.

Fig. 7. parcelas de comparación cuantiles de la nicotina saliva y los niveles de cotinina.

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Fig. 8. El mecanismo del metabolismo de nicotina [20] .

niveles de catalasa se redujeron signi fi cativamente en la saliva de los usuarios de tabaco sin humo que los controles. En informes anteriores habían encontrado que las actividades de las enzimas
antioxidantes de la GPx, los niveles de GST y el gato fueron signi fi cativamente disminuyó en hígado y riñón de ratas tratadas con nicotina

[11] . Superóxido dismutasa enzima muestran actividad disminución de los niveles en los grupos experimentales con no signi fi el cambio no puede en comparación con los no usuarios. De
acuerdo con el presente estudio, los niveles de superóxido dismutasa mostró un aumento de los niveles detectados en los fumadores y los no fumadores. En conjunto, nuestra fi hallazgos indican
que el desequilibrio de las enzimas antioxidantes, y aumento de la actividad enzimática de la óxido nítrico sintasa inducible en la saliva después de masticar tabaco sin humo.

5. Conclusiones

Disminuir el estado antioxidante, niveles de ácido úrico, hasta la regulación de la peroxidación de lípidos y los niveles de óxido nítrico en la saliva de los usuarios de tabaco sin humo, en
comparación con los controles para sugerir que la evaluación de estos parámetros tal vez puede utilizarse como marcadores de tabaco inducidas estrés nitroxidative. Una de las implicaciones
importantes para la exposición a la nicotina es la producción de especies reactivas del oxígeno en los consumidores de tabaco sin humo. La masticación de tabaco sin humo es muy peligroso y
producto fácilmente addictable, la conciencia se han incrementado sobre los efectos nocivos de correo ff ECTS de los productos de tabaco sin humo y reduce el riesgo de exposición y el
consumo. Se necesitan más estudios para correlacionar el tóxico e ff ECTS de uso prolongado de tabaco sin humo en la salud humana.

Financiación y Reconocimientos

La señorita S. Fareeda Begum es un receptor de ICMR- Investigador Senior y fi la ayuda financiera se reconoce en gran medida.

Declaración de interés

Los autores informan no hay declaraciones de interest.Con Florida icto de intereses Los autores declaran

no hay aire Florida icto de intereses.

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