PRÁCTICA No.

4: Técnicas de recuento de microorganismos

Autores y códigos: Juan Daniel Erira T. 515512; Francisco Javier Patiño. 411534; Daniel
Beltrán. 413504
Fecha: 28 de febrero de 2017
Objetivos
Conocer los métodos de conteo de microorganismos tales como conteo en superficie y en
profundidad.
Aprender técnicas de preparación de diluciones, preparación de agares, para entender las
estrategias empleadas de un buen conteo de microorganismos
PRIMER RECUENTO EN SUPERFICIE
Primera dilución: 10-1 Recuento caja 1: 15
Segunda dilución: 10-2 Recuento caja 1: 0
Tercera dilución: 10-3 Recuento caja 1: 0
Cálculos:
15 x 10 = 150 = 1,5 x 102 UFC/ML
0 x 100 = 0 UFC/ML
0 x 1000 = 0 UCF/ ML
Observaciones:
A las 24 horas solo creció en siembra por superficie en la dilución de 10-1, mientras que en
las otras diluciones no se observó crecimiento.

PRIMER RECUENTO EN PROFUNDIDAD

Primera dilución retenida: 10-1 Conteo caja 1: 0
Segunda dilución retenida: 10-2 Conteo caja 1: 0
Tercera dilución retenida: 10-3 Conteo caja 1: 0
Cálculos:
0 x 10 = 0 UFC/ML
0 x 100 = 0 UCF/ML
0 x 1000 = 0 UCF/ML
Observaciones:
En siembra por profundidad no se observa ningún tipo de crecimiento en las distintas
diluciones y se volvió a dejar en la incubadora por otras 18 horas con el fin de obtener otros
resultados.
SEGUNDO RECUENTO EN SUPERFICIE
Primera dilución: 10-1 Recuento caja 1: 94
Segunda dilución: 10-2 Recuento caja 1: 2
Tercera dilución: 10-3 Recuento caja 1: 0
Cálculos:
94 x 10 = 940 = 9,4 x 102 UFC/ML
2 x 100 = 200 = 2 x 102 UFC/ML
0 x 1000 = 0 UCF/ ML
Observaciones:
Al cabo del determinado tiempo se observó pequeños cambios en las diluciones de
profundidad y de superficie.

SEGUNDO RECUENTO EN PROFUNDIDAD

Primera dilución retenida: 10-1 Conteo caja 1: 38
Segunda dilución retenida: 10-2 Conteo caja 1 : 4
Tercera dilución retenida: 10-3 Conteo caja 1: 2
Cálculos:
38 x 10 = 380 = 3,8 x 102 UFC/ML
4 x 100 = 400 = 4 x 102 UCF/ML
2 x 1000 = 2000 = 2 x 103 UCF/ML

DISCUSIÓN:
Con respecto a los resultados que se obtuvieron del reconteo que se realizó a las diferentes
técnicas de siembra. Los datos que se obtuvieron presentan error, debido a cualquier parte
del procedimiento el cual se realizó mal.
Para el recuento por superficie y en profundidad, de la caja de Petri se toma una pequeña
concentración de células de una muestra conocida, la cual fue una papa descompuesta y se la
coloca en el tubo de ensayo, realizando la dilución y formando así la muestra patrón.
Posteriormente de esta muestra patrón se toma 1 ml el cual se le agrega al tubo de 10-1, de
este se vuelve a tomar 1 ml y así sucesivamente hasta finalizar con el tubo de 10-3, Los tres
tubos contienen 9ml de agua peptona y se recomienda en cada paso homogenizar la muestra
en el córtex.
Con las tres diluciones ya preparadas, cabe recordar que siempre se debe tener la precaución
de cambiar la pipeta entre la realización de cada una de las diluciones para que no se alteren.
Luego se realiza la siembra en profundidad, aplicando 1ml de cada tubo a su respectiva caja
de Petri, es decir del tubo 10-3 a la caja 10-3 y así para los otros dos, en este caso se utiliza una
pipeta para los tres procesos empezando desde la dilución menos concentrada (10-3) y
finalizando en la de 10-1, esto para que las muestras no se alteren. Se dejan en reposo unos
minutos y después se coloca el medio de cultivo, de esta manera se lleva a cabo una
inoculación anaeróbica.
Para la siembra en superficie se hace el mismo procedimiento, la diferencia es que se le
agrega 0,1ml de la dilución cada tubo a su respectiva caja. En este caso los microorganismos
crecen por encima del medio de cultivo, es decir de forma aerobia.
Al no hacer correctamente los anteriores pasos los resultados pueden salir incoherentes como
sucedió en esta práctica de laboratorio, hay dos posibles errores. El primero fue en agregar
mal la cantidad de dilución a su caja respectiva, pues en lugar de colocar 0,1ml se le añadió
0,6ml; El segundo, por el intercambio del orden al agregar la dilución a las cajas, ya que el
0,1ml del tubo 10-1 se le agrego a la caja de 10-3, y del tubo de 10-3 a la caja de 10-1. De esta
manera alterando la concentración de los microorganismos, por lo cual se observa un escaso
crecimiento en los dos tipos de siembra.
Como se esperaba, en las respectivas técnicas de siembras en las cajas de Petri (10-3 ) tuvieron
que presentar menor cantidad de colonias ( colonias aisladas) en comparación con las otras
dos, puesto que la dilución siguiente (10-2) tuvo que presentar mayor número de colonias, y
finalmente la dilución más concentrada (10-1 ) presenta colonias incontables, las cuales tienen
mayor número de microrganismos. A las 24 horas de incubación no se observó lo
anteriormente dicho y el número de colonias en cada caja fue incoherente
PRIMER CONTEO
Las cajas de la parte superior son de siembra por superficie y las de la parte inferior son las
cajas de siembra por profundidad (10-1, 10-2, 10-3) en las cuales no se observa ningún tipo
de crecimiento bacteriano.

SEGUNDO CONTEO: SIEMBRA POR PROFUNDIDAD

SEGUNDO CONTEO: SIEMBRA POR SUPERFICIE

Después del segundo conteo en siembra por profundidad se observó crecimiento de

colonias en 10-1, mientras que en las otras no hubo un crecimiento normal. Como se
observó en 10-1 son colonias de igual forma, tamaño y color; por lo tanto se dice que es
una especie puro y en la siembra por superficie tiene resultados similares a diferencia que
crecieron mucho más puesto que estaba en medio aerobio.
Conclusiones:
 Los métodos de recuento facilitan la identificación de los microorganismos por medio
del aislamiento
 Se aprendió las técnicas de superficie y profundidad para poder realizar el recuento de
microorganismos, así como hacer las diluciones y sus posteriores cálculos.
 Se llevó a cabo una eficiente dilución del microorganismo a partir de un inoculo.

CONSULTA
1. Explique brevemente el proceso mediante el cual se realiza el recuento de
microorganismos por la técnica de tubos múltiples (o técnica del Número Más
Probable -NMP).

En esta técnica la muestra se diluye en tubos de ensayo cada vez aumentando la disolución
por tubo de ensayo tomando 1 ml del tubo anterior aumentando la proporción es decir 1:10
1:100 etc. esto con el fin de que la densidad celular sea de menos de 1 por ml, entonces ya
no se habla de concentración sino de la probabilidad de encontrar una célula, cada muestra
diluida es inoculada en un tubo aparte para ver el crecimiento los que presenten crecimiento
microbiano se pueden convertir en concentración por medio de las tablas de NMP que son
tablas estadísticas de organismos por ml.
2. Defina el término inóculo

Significa injertar y se refiere a los microorganismos capaces de provocar infección o

simbiosis cuando se transfieren a un huésped, también una suspensión de microorganismos
que se transfieren a un medio se denomina inoculación.
3. ¿Cuál es el objetivo de las siembras por profundidad y superficie?

El objetivo de las siembras dependen de las condiciones que requieran los microorganismos
por lo tanto la siembra en superficie se hace para conseguir que el microorganismo tenga
condiciones aerobias apropiadas ya que queda sobre el medio de cultivo.
La siembra en profundidad en cambio se hace para que los organismos tengan condiciones
de anaerobiosis ya que el inoculo queda debajo del medio de cultivo.

Bibliografía
Madigan, M., Martinko, J., & Parker, J. (2004). Brock Biología de los microorganismos
(Décima ed.).Madrid: Prentice-Hall.