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RESUMEN
Objetivo: Estandarizar y validar la técnica de Inmunocromatografía para el diagnóstico de la infección
por Taenia solium en humanos mediante la detección de coproantígenos. Materiales y métodos: Se
produjo en Oryctolagus cuniculus “conejo” IgG y en Gallus gallus “gallina” IgY a los antígenos de
excreción/secreción (ES) de Taenia solium y en Capra hircus “cabra” IgG anti-IgG de conejo, siendo las
IgG de conejo anti-antígenos E/S de T. solium conjugadas con oro coloidal. La inmunocromatografía se
llevó a cabo utilizando tiras de nitrocelulosa en las cuáles se fijó dos bandas con anticuerpos de captura;
en la primera, las IgY anti antígenos ES de T. solium (banda de prueba), y en la segunda las IgG anti-IgG
de conejo (banda control). La técnica fue evaluada con heces de personas parasitadas con Taenia
solium, Giardia lamblia, Enterobius vermicularis, Hymenolepis nana, Hymenolepis diminuta,
Ancylostomideos, Ascaris lumbricoides, Diphylobotrium pacificum y Trichuris trichiura; asi como heces
de persona no parasitadas. Como control positivo se utilizó medio Medio MEM con antígenos de E/S de
T. solium y como control negativo solo el medio MEM. Resultados: La Inmunocromatografía permitió
detectar antígenos de T. solium solamente en tres muestras de heces positivas de las siete evaluadas, la
cual se evidenció mediante la coloración de la banda de prueba, siendo negativa cuando se utilizó
muestras con las otras parasitosis y con las muestras de personas no parasitadas. En todas las tiras
usadas se observó coloración de la banda control. Conclusión: Se encontró una sensibilidad de 42.86%
y una especificidad del 100%, sin embargo, se recomienda evaluar la técnica con mayor cantidad de
muestras para determinar si esta técnica puede ser aplicada como prueba diagnóstica.
Palabras clave: Teniasis; Inmunocromatografía; Antígenos; Anticuerpos (fuente: DeCS BIREME)
ABSTRACT
Objetive: Standardize and validate Immunochromatographic technique for the diagnosis of Taenia solium
infection in humans by coproantigen detection. Materials and methods: IgG and IgY anti Taenia solium
excretory/secretory (E/S) antigens were produced in Oryctolagus cuniculus "rabbit" and Gallus gallus
"chicken”. IgG anti-rabbit IgG was produced in Capra hircus "goat", which was conjugated with colloidal
gold. Immunochromatography was performed in nitrocellulose paper strip in which two transversal bands
with capture antibodies were fixed. The first band had chiken anti-T. solium E/S IgY antigens (test band),
and the second band had goat IgG anti-rabbit IgG (control band). The assay was assessed using faeces
from people infected with Taenia solium, Giardia lamblia, Enterobius vermicularis, Hymenolepis nana,
Hymenolepis diminuta, Ancylostomideos, Ascaris lumbricoides, Diphylobotrium pacificum and Trichuris
trichiura, as well as feces from non-infected persons. T. solium E/S antigens in the MEM medium were
used as positive controls and as a negative control MEM medium alone. Results:
Immunochromatography detected T. solium antigens only in three stool samples tested of the seven
positive samples. This was evidenced by change in color of the test band, which was negative when
samples with the other parasites were used, and with the samples from non-infected persons. In all strips
used was observed a change in coloration of the control band. Conclusion: Sensitivity was of 42.86%
and a specificity of 100%, however, it is recommended to evaluate the technique with a larger number of
samples to determine whether this technique can be applied as a diagnostic tool.
Keywords: Teniasis; Immunochromatography; Antigen; Antibodies (source: DeCS BIREME)
INTRODUCCION
MATERIAL BIOLOGICO
PROCEDIMIENTOS
VN
Especifici dad 100
VN FP
VP
Sensibilid ad 100
VP FN
De los conejos inmunizados se obtuvieron sueros, de los cuales se purificaron las IgG
específicas anti Taenia solium en columnas de cromatografía lográndose alícuotas de 2 mL
donde las concentraciones de IgG especificas se encontraban entre 200 y 350 mg/mL. De la
yema de huevo de gallina se obtuvo IgY anti T. solium a la concentración de 1.2 mg/ml. En
ambos casos los anticuerpos fueron puestos en evidencia por la técnica de “Western Blot”
usando antígenos de excreción/secreción obtenidas de cultivo, que permitió mostrar las bandas
antigénicas de 33,0 y 37,8 KDa específicos para T. solium. Observándose además que las IgY
muestran bandas más intensas (Fig 1). De la cabra al igual que en los conejos se obtuvo
eluídos con concentraciones entre 250 y 350 mg/mL, cuya presencia se evidenció por la
técnica de inmunodifusión doble donde se observa una sola banda de precipitación (Fig 2).
Fig 1. Bandas coloreadas que indican la presencia de IgG específicas de Oryctolagus cuniculus
“conejo” (izquierda) y de IgY específicas de Gallus gallus “gallina” (derecha) detectados por
“Western Blot”, utilizando antígenos de excreción/secreción (E/S) de Taenia solium.
Fig 2. Bandas de precipitación formadas por las IgG de conejo y las IgG de cabra anti IgG de
conejo evidenciadas por inmunodifusión doble.
a. Antigenos de E/S de
Taenia solium. a. IgY de yema de gallina
b. Medio MEM sin anti antígenos de E/S de
antígenos. Taenia solium.
c. IgG de cabra anti b. IgY de yema de gallina
IgG de conejo. pre inmune.
d. IgG de cabra pre
inmune.
Fig 3. Puntos coloreados que indican el reconocimiento de los antígenos de E/S de de T. solium por el
conjugado con oro coloidal (IgG de conejo anti-antigenos de e/s de T. solium y oro coloidal (a) y la
captura de dicho conjugado por las IgG de cabra anti-IgG de conejo por la técnica de Inmunodot
(lado izquierdo) y puntos colereados que indican el reconocimiento del complejo IgY gallina-
antígenos de e/s de T. solium de cultivo por el conjugado con oro coloidal (IgG de conejo anti-
antígenos de e/s de T. solium y oro coloidal (a) y la no presencia de puntos con IgY de gallina pre
inmune (b) por la técnica de Inmunodot (lado derecho)
Taenia solium Negativos
C+ C- + + +
Fig 4. Evaluación de muestras positivas a Taenia solium y heces de niños negativos a cualquier
parasitosis por la técnica de Inmunocromatografía.
NEGATIVO 4 43 47
TOTAL 7 43 50
* La infección por T. solium fue confirmada por el hallazgo de huevos en las heces humanas,
mediante el análisis coproparasitoscopico.
Sensibilidad = 42.8%
Especificidad = 100%
DISCUSION
El uso del oro coloidal como marcador en las técnicas inmunológicas viene utilizándose
desde hace mucho tiempo, tanto en microscopia electrónica33 como en Inmunoblotting34.
Actualmente, se utiliza en las técnicas de Inmunodot e Inmunocromatografía para la detección
rápida de antígenos en diferentes muestras biológicas35. Mediante la técnica de Inmunodot se
demostró la eficacia del conjugado preparado al reaccionar solamente con los antígenos de
excreción/secreción y con la IgG de cabra anti conejo, no observándose reacción en los lugares
donde se fijo IgG de cabra pre inmune y medio MEM. Al evaluar un sistema dot sándwich con
IgY de gallina inmunizada y pre inmune como anticuerpos de captura, los cuales fueron
incubados con los antígenos de excreción/secreción y el conjugado preparado, se observo
reacción solamente en el caso de IgY inmunizada y no en la IgY pre inmune. Los buenos
resultados encontrados determinaron el uso de la IgY como anticuerpo de captura en la técnica
de Inmunocromatografía.
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Agradecimiento: Al Dr. Héctor Hugo García del Instituto de Ciencias Neurológicas Lima-
Perú, por proporcionarnos muestras de heces humanas positivas a
Taenia solium.
ANEXOS
Fig 9. Inmunización de Oryctolagus cuniculus “conejo” con antígenos de excreción/secreción (E/S) de T. solium
emulsificados con adyuvante de Freund y extracción de sangre por punción cardiaca para la obtención del
inmunosuero.
Fig 10. Inmunización de Capra hircus “cabra” con inmunoglobulina G de Oryctolagus cuniculus
“conejo” emulsificado con adyuvante de Freund y extracción de sangre por punción yugular
para la obtención del inmunosuero.