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Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas


Departamento de bioquímica “Dr. Guillermo Carvajal Sandoval”
Laboratorio de Métodos de Análisis
Químico Bacteriólogo Parasitólogo

“ANÁLISIS ESPECTROFOTOMÉTRICO DE UN
SISTEMA MULTIPLE”

García Escobar María de Jesús


5QV2
VICTOR MANUEL MACÍAS MARTÍNEZ
SECCIÓN: 1
Fecha de entrega: 28 de Septiembre 2018
OBJETIVO

 Reconocer las propiedades que debe cumplir sistema múltiple para poder
aplicar la ley de la aditividad.

FUNDAMENTOS
-Absorción de luz: Cuando la luz blanca incide sobre un cuerpo éste absorbe total o
parcialmente una parte del espectro y refleja o transmite (según sea opaco o transparente)
una determinada gama de longitudes de onda, que constituyen su color. Es entonces
cuando la energía luminosa puede convertirse en otro tipo de energías como el calor o la
electricidad, o producir una reacción química como la que ocurre en la fotografía analógica
y los soportes fotosensibles.
-Transmisión: La transmisión de luz a través de una placa de vidrio en la cual la reflectancia
ocurre en la superficie superior e inferior y la absorción dentro de la placa.

RESULTADOS
DETERMINACIÒN DE LAS LONGITUDES DE ONDA DE TRABAJO (λ 1 Y λ2)
Como parte de cualquier determinación espectrofotométrica se debe conocer la longitud de
onda de trabajo, por lo cual se corrió un espectro de absorción de nuestros dos analitos.
Tabla 1. Resultados del espectro de absorción para el dicromato de potasio y el
permanganato de potasio, con el cual se seleccionaron las longitudes de onda de trabajo.

LONGITUD A A LONGITUD A A
DE ONDA K2CR207 KMnO4 DE ONDA K2CR207 KMnO4
340 2,253 1,150 480 0,418 0,924
350 2,269 1,123 490 0,332 0,993
360 2,286 1,082 500 0,259 1,054
370 2,174 1,020 510 0,182 1,134
380 1,863 0,947 520 0,104 1,219
390 1,424 0,853 530 0,056 1,293
400 1,065 0,846 540 0,032 1,296
410 0,787 0,815 550 0,018 1,276
420 0,650 0,800 560 0,003 1,169
430 0,611 0,798 570 0,000 1,001
440 0,612 0,804 580 0,000 0,862
450 0,607 0,818 590 0,000 0,792
460 0,573 0,840 600 0,000 0,756
470 0,506 0,872

Gráfica 1. Espectro de Absorción. Espectros de absorción de permanganato de potasio


y dicromato de potasio, el punto verde, sobre el espectro naranja y rojo sobre el azul hace
referencia a la longitud que se trabajará para la determinación de dicromato de potasio y
permanganato de potasio, respectivamente.

ESPECTRO DE ABSORCIÓN
2.5

2
ABSORBANCIA

1.5

K2Cr2O7
1
KMNO4

0.5

0
300 350 400 450 500 550 600
LONGITUD DE ONDA λ

Tabla 2. Valores de λ máx para la determinación de dicromato de potasio y permanganato


de potasio

Compuesto λ máx.
K2CR207 380
KMnO4 490

¿Por qué se eligen estas longitudes de onda y no otras? Para saber la longitud de onda
de trabajo y para que las dos sean detectables. En un compuesto es alta y en el otro
donde empiece a absorber.
OBTENCION DE LAS ABSORTIVIDADES MOLARES DE CADA COMPONENTE A LAS
DOS LONGITUDES DE ONDA SELECCIONADAS (λ1 Y λ2)

Se realizaron curvas de calibración de ambos analitos, las cuales fueron leídas a las dos
longitudes de onda que se seleccionaron en la etapa anterior.

Tabla3. Resultados de la absorbancia para la construcción de las curvas tipo.


CONCENTRACIÒN Aλ1 Aλ2
COMPUESTO DILUCIONES
MOLAR 380 490
1:7 0.00022 0,285 0,043
1:6 0.00026 0,312 0,047
1:5 0.00032 0,393 0,060
1:4 0.00040 0,533 0,086
K2Cr207 1:3 0.00053 0,678 0,102
1:2 0.00080 1,041 1,047
1:7 0.00005 0,019 0,042
KMnO4 1:6 0.00006 0,028 0,049
1:5 0.00008 0,033 0,060
1:4 0.00010 0,040 0,077
1:3 0.00013 0,056 0,108
1:2 0.00020 0,043 0,163

 Cálculos para obtener la concentración molar.

Formula
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2
Donde

C= Concentraciones 1 y 2, respectivamente

V= Volumen 1 y 2, respectivamente

Para tubo 1 de K2CR207 Para tubo 1 de KMnO4


𝑪𝟏 𝑽𝟏 𝑪𝟏 𝑽𝟏
𝑪𝟐 = 𝑪𝟐 =
𝑽𝟐 𝑽𝟐
Sustituyendo; Sustituyendo
𝑪𝟐 =
(𝟎.𝟎𝟎𝟏𝟔𝑴)(𝟎.𝟓𝒎𝑳)
=0.00022 (𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟒𝑴)(𝟎. 𝟓𝒎𝑳)
(𝟑.𝟓𝒎𝑳) 𝑪𝟐 = = 𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟎𝟓
(𝟑. 𝟓𝒎𝑳)

Gráfica 2. Curvas tipo de dicromato de potasio, la línea en azul representa la curva tipo
leída a 380 nm y en naranja la absorbancia fue leída a se encuentra a 490 nm.
Curva de Calibración de K2Cr2O7
1.2

λ1
1 y = 0,1434x + 0,0385
R² = 0,8801
R=0,9381
0.8
Absorbancia

K2Cr2O7 λ1
0.6

K2Cr2O7 λ2
0.4 λ2
y = 0,1489x - 0,2903
Linear
R² = 0,4837
0.2 (K2Cr2O7
R=0.6954
λ1)

0
0 0.0002 0.0004 0.0006 0.0008 0.001
Concentración de K2Cr2O7

Gráfica 3. Curvas tipo de permanganato de potasio, la línea en azul representa la curva


tipo leída a 380 nm y en naranja la absorbancia fue leída a se encuentra a 490 nm.

Curva de Calibración de KMnO4


0.18
λ2
0.16 y = 822,83x - 0,0019
R² = 0,9956
KMnO4 λ1
0.14 R=0,9977

0.12
KMnO4 λ2
λ1
Absorción

0.1
y = 164,35x + 0,0195
R² = 0,5017
0.08 R=0,7083
Linear
0.06 (KMnO4 λ1)

0.04
Linear
(KMnO4 λ2)
0.02

0
0 0.00005 0.0001 0.00015 0.0002 0.00025
Concentración de KMnO4
Tabla 4. Absortividad molar de cada mensurando a las longitudes de onda leídas.

Sustancia
Absortividad K2Cr207 KMnO4

am a λ1 (380 nm) 0.1434 822.83


am a λ2 (490 nm) 0.1489 164.34

COMPROBACIÒN DE LA LEY DE ADITIVIDAD EN UN SISTEMA MULTIPLE.


Se realizaron 3 mezclas con los analitos a determinar, cada mezcla tenía diferentes
concentraciones, después se leyeron al espectrofotómetro cada una a las dos longitudes
de onda de trabajo.
Tabla 5. Concentración molar de mezclas y los resultados de absorbancias a las dos
longitudes de onda.

A observada
Cm Cm λ1 λ2
Mezcla no.
K2Cr207 KMnO4 (380 (490
nm) nm)
1 0.0008 0.00005 0.626 0.151
2 0.0004 0.0001 1.164 0.160
3 0.00016 0.0002 0.247 0.188

Cálculos de concentración de las mezclas de K2Cr2O7 y KMnO4.


𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2
𝐶1 𝑉1
𝐶2 =
𝑉2
Sustituyendo para el K2Cr2O7, en la mezcla del tubo 1:
(0.0016𝑀)(5𝑚𝐿)
𝐶2 = = 0.0008 𝑀
10𝑚𝐿

Sustituyendo para el KMnO4, en la mezcla número 1:


𝐷𝑜𝑛𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑜𝑙𝑎𝑟𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒𝑙 KMnO4 𝑒𝑠 𝑑𝑒 0.0004 𝑀 𝑦 𝑒𝑙 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑜𝑛 5 𝑚𝑖𝑙𝑖𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜𝑠
(0.0004𝑀)(1𝑚𝐿)
𝐶2 = = 0.00005 𝑀
10𝑚𝐿
Tabla 6. Valores de absorbancia observados y calculados para las mezclas de dicromato
de potasio y permanganato de potasio a λ1 y λ2

Mezcla No. A observada A calculada


λ1 λ2 λ1 λ2
(380 nm) (490 nm) (380 nm) (490 nm)
1 0,626 0,151 0,0412 8.3361x10-
3
2 1,164 0,160 1,162 0,141
3 0,247 0,188 0,240 0,212

Cálculos Formula: 𝐴𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 = 𝜀1 ∗ 𝑏 ∗ 𝐶1 + 𝜀2 ∗ 𝑏 ∗ 𝐶2 + 𝜀3 ∗ 𝑏 ∗ 𝐶3 + … … . .. +𝜀𝑛 ∗ 𝑏 ∗ 𝐶𝑛

𝐴470 = 𝑎𝑚𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 (380𝑛𝑚) ∗ 𝑏 ∗ 𝑐𝑚𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 + 𝑎𝑚𝐾𝑀𝑛𝑂4 (380𝑛𝑚) ∗ 𝑏 ∗ 𝑐𝑚𝐾𝑀𝑛𝑂4

Sustituyendo para la mezcla 1 a 380 nm;


𝐴470(1) = 0.1434(1)(0.0008) + (822.83)(1)(0.00005) = 0.0412
𝐴510 = 𝑎𝑚𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 (510𝑛𝑚) ∗ 𝑏 ∗ 𝑐𝑚𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 + 𝑎𝑚𝐾𝑀𝑛𝑂4 (510𝑛𝑚) ∗ 𝑏 ∗ 𝑐𝑚𝐾𝑀𝑛𝑂4
Sustituyendo para a mezcla 1 a 490 nm;
𝐴510(1) = (0.1489)(1)(0.0008) + (164.34)(0.00005) = 8.3361𝑥10 − 3
Para poder verificar la ley de aditividad se trazaron dos graficas de donde se obtuvieron
los coeficientes de variación y determinación de las dos longitudes de onda trabajadas.
Tabla 7. Valores de coeficiente de variación y de determinación de ambas longitudes de
onda

λ1 λ2
(380 nm) (490 nm)
r 0,8801 0,9956
r2 0,9381 0,9977

DETERMINACIÒN DE LA CONCENTRACION DE EN LASOLUCION


PROBLEMA.
Una vez realizado lo anterior a cada equipo se le proporciono una solución
problema donde se leyeron a ambas longitudes de onda.
Tabla 8. Resultados de absorbancias obtenidas de la muestra problema a las dos
longitudes de onda
λ1 λ2
(380 nm) (490 nm)
Problema 2 1,148 0,347
𝐴 = 𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7
𝐵 = 𝐾𝑀𝑛𝑂4
A y B se colocaron así para realizar los cálculos, no representan algún interés por
parte del profesor, solo del alumno, se empleó el método de sistema de
ecuaciones de dos variables.
Formulas:
𝐴𝑇𝜆1 470 𝑛𝑚 = 𝑎𝑚𝐴𝜆1 𝑏𝐶𝑚𝐴𝜆1 + 𝑎𝑚𝐵𝜆1 𝑏𝐶𝑚𝐵𝜆1 … … . . (a)
𝐴𝑇𝜆2 510 𝑛𝑚 = 𝑎𝑚𝐴𝜆2 𝑏𝐶𝑚𝐴𝜆2 + 𝑎𝑚𝐵𝜆2 𝑏𝐶𝑚𝐵𝜆2 … … … (𝑏)

Sustituyendo con los valores:

1,148 = ( 0.1434)(1𝑐𝑚)𝐶1 + (822.83)(1𝑐𝑚)𝐶2 … . . (𝑎)

0,347 = 0,1489(1𝑐𝑚)𝐶1 + ( 164.34 )(1𝑐𝑚)𝐶2 … . . (𝑏)

Despejando a C1 de la ecuación 1

1,148 − (822,83 )(1𝑐𝑚)𝐶2


𝐶1 = … … . . (𝑐)
(0,1434 )(1𝑐𝑚)

Ecuación 3 en 2:

1,148 − (822,83 )(1𝑐𝑚)𝐶2


0,347 = (0,1489 )(1𝑐𝑚) ( ) + ( 164,34 )(1𝑐𝑚)𝐶2
(0,1434)(1𝑐𝑚)

Resolviendo:
0.1659 − 122.51𝐶2
0,347 = + ( 164,34 )(1𝑐𝑚)𝐶2
0,1434

0,1659 122.51
0,347 = − 𝐶2 + 164,34𝐶2
0,1434 0,1434
0,1659
0,347 − = −854,32 𝐶2 + 165,34𝐶2
0,1434
−0,8099 = −688.98𝐶2
Despejando C2
−0,8099
𝐶2 = = 0.00117
−688.98
𝑪𝟐 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟏𝟕 M

Sustituyendo el valor obtenido en c:

1,148 − (822.33 )(1𝑐𝑚)𝐶2


𝐶1 =
(0.1434 )(1𝑐𝑚)

𝐶1 = 5734.51

Tabla 9. Resultados de concentración de los analitos en la muestra problema.

Dicromato de potasio Permanganato de potasio


K2Cr207 KMnO4
Concentración M 0.00117 M 5734.51 M

DISCUSION DE RESULTADOS

Se analizó la tabla 1 y 2, junto con la gráfica 1, debido a que en esta etapa del experimento
se eligieron las longitudes de onda de trabajo, y bueno elegimos esas longitudes de trabajo,
para dicromato de potasio K2Cr2O7 a 380 nm y el de permanganato de potasio KMn04 490
nm, esto debido a que en la ley de aditividad no se elige la absorbancia máxima de
absorción de cada especie de interés analítico cuantitativo, sino que se elige la longitud de
onda a la cual absorban las especies químicas a analizar, pero la característica es que una
de las dos absorba mucho más que otra, para evitar que se confundan las señales de
absorción, podemos observar en la gráfica 1, que se eligieron las óptimas para realizar el
trabajo, la selección depende del criterio del analista.

Por otro lado, se determinaron las absortividades molares, ver tabla 4, de cada especie a
distintas a las longitudes de trabajo seleccionadas, esto se logró mediante la construcción
de 2 curvas tipo de cada componente de la mezcla, la absortividad molar se trata de la
interacción entre la materia y la energía electromagnética y es propia de cada sustancia a
una longitud y concentración especifica es decir variara dependiendo la longitud y
concentración a la cual se lea el analito, y se obtuvieron a partir de la ecuación de regresión
lineal que se obtuvo a partir de las absorbancias dadas y del cálculo de concentración con
la que se realizó.
Consiguiente al paso anterior, se prepararon y leyeron diversas mezclas cuyo el fin de
comprobar dicha ley de aditividad cumplía con la ley de Bouger y Beer, esto debido a que
la ley de aditividad especifica que mientras las soluciones presentes en una mezcla no
interactúen entre si las absorbancias de cada compuesto son aditivas, es decir se irán
sumando por lo cual nosotros realizamos tubos con mezclas a distintas concentraciones
del analito, el analito se encontraba a distintas concentraciones, para verificar que
efectivamente esta ley es correcta, estas se leyeron y una vez obtenida su absorbancia se
continuo a comprobar dicha ley, si esta nuestras absorbancias observadas contra nuestras
absorbancias calculadas, se comportan de manera similar de tal manera que al determinar
los coeficientes de correlación y determinación, si estos se acercan a 1, quiere decir que la
linealidad se cumple en la mezcla es decir que el método si sirve, lo cual nos dio de 0.99
de ambos casos deduciendo así que la ley de la aditividad efectivamente se cumple en
ambos casos.
Respecto a la muestra problema se pudo cuantificar, por el método de sistema de
ecuaciones de dos variables, esto no se logró debido a que no había la linealidad en el
método con la ley de Bouger-Beer, que se explicó en el párrafo anterior, no se pudo discutir
debido a que no se nos proporcionó el valor real de los analitos determinados. Esto se pudo
deber a que al momento de las lecturas de absorbancias del dicromato las lecturas no
dieron cercanas a las referencias debido al desconocimiento del uso del aparato.

CONCLUSIONES
 La ley de Bouger-Beer no solo es aplicable a muestran con un solo analito, sino que
puede ser aplicada a una muestra de estos si y solo si, cumplan con los caracteres
descritos en la introducción
 La ley de aditividad se cumple para los mensurados dicromatos de potasio y
permanganato de potasio.
 Es posible cuantificar más de un solo analito con la ley de Bouger-Beer.

REFERENCIAS.
 UAM. (2015). ANÁLISIS DE UNA MEZCLA BINARIA. Disponible en
https://goo.gl/ioU2zh (consulta el 04/2018)
 Sierra-Alonso I, Gómez-Ruiz S, Pérez-Quintilla D, Morante-Zarcero S. (2010),
Análisis instrumental. Ed. Netbiblo, S.L. España. Pp. 44
 Skoog-Douglas A, West-Donald M. (1985). Análisis instrumental. 2da Edición Nueva
editorial interamericana S.A. de C.V., México D. F. Pp 158,162

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